石德时
- 作品数：104 被引量：410H指数：13
- 供职机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金武汉市科技攻关计划项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 一种编码具有高水解活性的猪肝羧酸酯酶亚型基因
- 本发明属于动物基因工程领域，具体涉及一种编码具有高水解活性的猪肝羧酸酯酶亚型基因。从健康的大白猪的肝脏组织中分离得到一种对通用底物对硝基苯基乙酸酯(p-NPA)的水解活性比已见报道的PLE亚型都明显高的新亚型基因，该基因...
- 石德时杨路肖运才王喜亮毕丁仁肖启玲周琼琼田中元李自力刘梅
- 文献传递
- 鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族的研究被引量：6
- 2003年
- 鸡毒霉形体 (Mycoplasma gallisepticum ,GM)基因组中存在着编码细胞表面血凝粘附素蛋白 (protein of My-coplasma gallisepticum adhesin,p MGA)相关基因组的多基因族。为筛选出含有完整的 p MGA基因片段 ,并估算出鸡毒霉形体 HS株基因组中 p MGA多基因族的基因数 ,本试验以 p UC1 8为载体 ,用 Eco R 限制性内切酶构建了鸡毒霉形体 HS株的基因组文库。根据 p MGA基因引导序列的保守区和 p MGA基因间隔区的序列 ,人工合成了 2个寡核苷酸探针 (探针 、探针 ) ,经标记后 ,双筛选所建的基因文库 ,从 6 0 0个转化子中共得到的 38个含有 p MGA基因的阳性克隆子 ,选其中 1个 7.5 kb的片段 (17号阳性克隆子 ,W17) ,用 4种限制性内切酶 (Eco R ,Hind ,Pst ,Bgl )酶切消化 ,绘制了该片段的物理图谱。该片段酶切产物经电泳、转膜后与探针 和探针 杂交 ,发现 2个探针杂交图谱基本相同 ,根据杂交带及放射信号的强度值 ,估测出该片段含有 4个 p MGA基因 ,以这个片段所含的 p MGA基因数为标准 ,估算出鸡毒霉形体 HS株含有 39个 p MGA基因。
- 翁长江毕丁仁沈青春李自力石德时许青荣刘梅程峰
- 关键词：HS株鸡毒霉形体
- 具有修复肠道功能的环境友好型猪表皮生长因子重组乳酸乳球菌
- 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及具有修复肠道功能的环境友好型猪表皮生长因子重组乳酸乳球菌。本发明以乳酸乳球菌NZ3900为宿主菌，以LacF为筛选标记，利用表达载体pNZ8149为出发载体，构建了表达猪表皮生长因...
- 石德时郭莹莹罗吉肖运才王喜亮周进
- 文献传递
- 一种H9亚型禽流感病毒抗体检测装置
- 本实用新型涉及病毒抗体检测装置技术领域，且公开了一种H9亚型禽流感病毒抗体检测装置，包括固定安装，所述固定安装的顶部固定连接有检测箱，所述检测箱的内部固定连接有电机，所述电机的输出轴右侧固定连接有螺纹杆，且螺纹杆的另一端...
- 王喜亮李越杨帆石德时金秀娥付咏堂
- 文献传递
- 金丝猴源益生粪肠球菌dlt7a的发酵工艺被引量：4
- 2017年
- 从神农架金丝猴的粪便中分离出1株益生菌株dlt7a,经鉴定为粪肠球菌。为进一步提高发酵液中dlt7a的活菌数量,对菌株dlt7a的发酵工艺进行优化。通过单因素水平试验,确定dlt7a的最佳培养条件为装液量20%(50mL/250mL),接种量2%,培养基初始pH 6.5。设计Plackett-Burman(PB)试验和响应面试验,找出发酵培养基中影响dlt7a活菌数的主要成分是蔗糖、鱼粉和KH_2PO_4,并优化3种重要成分的含量,确定最优发酵培养基配方为:蔗糖2.55%,鱼粉2.63%,豆粕2.5%,酵母膏0.4%,CaCO_3 1.0%,KCl 0.1%,MgSO_4·7H_2O 0.1%,KH_2PO_4 0.014%。在此条件下培养dlt7a菌株,活菌数可达58.83×108cfu/mL,比优化前提高了46.53%。
- 白文妹李雪梅申立泉石德时杨敬元姚辉龙兴权欧阳潮肖运才
- 关键词：金丝猴粪肠球菌发酵工艺响应面法
- 直接竞争ELISA检测氯霉素残留的方法建立及初步应用被引量：12
- 2007年
- 用混合酸酐法合成氯霉素的CAP抗原,用过碘酸钠氧化法合成CAP酶标记抗原,用ELISA方法对合成的CAP抗原、CAP酶标记抗原进行鉴定表明其与抗CAP单克隆抗体具有特异性反应。在此基础上建立了包被二抗的直接竞争ELISA方法。特异性试验结果表明,CAP琥珀酸酯、CAP琥珀酸钠盐的交叉反应率分别为107%、106.4%;甲砜霉素、氟甲砜霉素与CAP的交叉反应率小于0.016%;与其他结构类似物间未见交叉反应。该方法对CAP的检测限可达到0.1μg/L,IC50为11.6μg/L,线性范围0.1～100μg/L,批内变异系数小于11.5%,批间变异系数小于19.6%。对猪肉、鸡肉、蜂蜜分别添加1.0、3.0、10.0、30.0μg/L CAP标准品,回收率61.0%～102.0%,变异系数为6.6%～15.8%;对猪肉、鸡肉、蜂蜜中CAP的最低检测限分别为0.48、0.42、1.20μg/kg。
- 李晓云石德时王喜亮熊宁刘百红张道宏毕丁仁
- 关键词：氯霉素药物残留
- 一种鸡禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染的胶体金免疫层析快速鉴别诊断试剂盒及应用
- 本发明属于动物免疫技术领域，具体涉及一种鸡禽流感疫苗免疫与病毒野毒感染的胶体金免疫层析快速鉴别诊断试剂盒及其应用。该试剂盒包含盒体、设在盒体内的酶标板、试纸条和样品稀释液。其中的试纸条是由样品垫、吸收垫、涂覆有金标记抗鸡...
- 毕丁仁胡思顺郑兴华王喜亮张万坡肖运才刘梅李自力石德时许青荣金秀娥
- 文献传递
- 鸡传染性法氏囊抗体免疫胶体金快速检测试剂盒及应用
- 本发明属于免疫应用领域，涉及动物分子生物学、免疫学等相关领域。公开了一种分别用于快速检测鸡传染性法氏囊抗体的试剂盒。该试剂盒包含盒体、设在盒体内的试纸卡和样品稀释液。其中的试纸卡是由样品垫、吸收垫、分别包被有鸡传染性法氏...
- 毕丁仁张进良胡思顺张文通张展英王政李自力肖运才王喜亮石德时刘梅许青荣
- 文献传递
- 旋毛虫肌幼虫分泌性蛋白P49基因的克隆与表达被引量：5
- 2003年
- 通过设计、合成引物,以旋毛虫RNA为模板,用RT-PCR法扩增出旋毛虫P49序列,并进行了序列测定。将P49基因亚克隆至表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达,作SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,PCR法扩增出P49序列,其大小约为960bp,将构建的重组质粒pGEM-P49进行序列测定表明其与Genbank中的P49序列具有高度的同源性。成功构建了重组表达载体pET-P49;SDS-PAGR及Western blot分析表明,表达产物分子量约为38kDa,约占菌体总蛋白的7％左右,且能被感染旋毛虫猪阳性血清所识别。
- 赵凌孟宪荣栗绍文石德时华安龙孙锡斌毕丁仁王桂枝
- 关键词：旋毛虫幼虫基因克隆基因表达人畜共患病
- 伪狂犬病毒诱导感染乳仔猪扁桃体淋巴细胞发生凋亡
- 2005年
- 将伪狂犬病毒Ea株,按100 TCID50的剂量感染15日龄的健康乳仔猪,所有实验组仔猪在接种后5～7天出现伪狂病症状,取感染组及对照组仔猪扁桃体,进行透射电镜观察、原位末端脱氧核苷酸标记等试验.透射电镜观察发现扁桃体的淋巴细胞发生凋亡,DNA原位末端脱氧核苷酸标记(TUNEL)呈阳性.
- 石德时兰盛银李祥敏金梅林徐珍秀陈焕春
- 关键词：PRV乳仔猪TUNEL
