童煜
- 作品数：42 被引量：136H指数：7
- 供职机构：四川大学华西第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划新世纪高等教育教学改革工程更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 脑源性神经营养因子通过PI3K/Akt/mTOR信号途径对胚鼠缺氧神经元的保护作用被引量：16
- 2013年
- 目的探讨脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对缺氧(oxygen deprivation,OD)神经元的保护作用是否与激活自噬有关,其信号通路是否通过PI3K/Akt/mTOR途径。方法 1)建立胚鼠神经元OD损伤模型;CCK-8法观察不同浓度BDNF对OD神经元细胞活性的影响;2)检测OD神经元1,3,5h自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达,情况观察BDNF对OD神经元的保护作用是否与自噬有关;3)检测p-Akt,p-mTOR,p-p70S6K以及LC3II的表达,对比BDNF与自噬激活剂雷帕霉素(mammalian target of rapamycin,Rapamycin)对Akt/mTOR/p70S6K的影响,以及自噬被3-MA抑制后,BDNF对Akt/mTOR/p70S6K的影响。结果 1)50μg/L BDNF可对OD神经元起保护作用(P<0.05),100μg/L BDNF效应次之;2)BDNF和/或Rapamycin在下调p-Akt/p-mTOR/p-p70S6K表达的同时可上调LC3II的表达;当3-MA抑制自噬后,BDNF对LC3II的上调作用被抑制。结论 BDNF通过PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号途径激活自噬,发挥对OD神经元的保护作用。
- 陈艾熊励晶马骄童煜毛萌
- 关键词：脑源性神经生长因子自噬哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
- 新生大鼠海马神经元细胞体外培养方法改良研究被引量：10
- 2016年
- 目的探讨改良的新生大鼠海马神经元细胞体外培养方法,为新生儿缺血性脑损伤模型等海马神经元相关疾病研究奠定基础。方法采用本研究自行设计的改良新生大鼠海马神经元细胞的体外培养方法,进行新生大鼠海马神经元细胞的体外培养。判断新生大鼠原代海马神经元细胞体外培养成功的标准为:荧光显微镜下,可见微管相关蛋白(MAP)2在海马神经元细胞体和树突中表达。该改良方法具体为:1以L-多聚赖氨酸和鼠尾胶原作为神经元细胞体外培养的生长基质,分离出生24h内新生SD大鼠海马结构。将其运用单一胰蛋白酶水浴振荡消化后,吹打成细胞悬液,将海马神经元细胞以适当的密度种植于含10%胎牛血清DMEM培养基中,贴壁培养4h后,更换为Neurobasal维持培养基继续培养,以后每3d更换1/2培养液。2采用抗MAP2-5-异硫氰酸荧光素(anti-MAP2-FITC)免疫荧光法,对所获得的海马神经元细胞进行鉴定。结果 1新生大鼠海马神经元细胞的体外培养结果显示,新生大鼠海马神经元细胞于培养30min时,大部分细胞贴壁生长,培养2h后,细胞贴壁明显,少数细胞开始长出突起。于培养5d后,神经元突起进一步增多,并形成神经细胞网络,培养7d后,神经元细胞分化更加成熟,神经元细胞之间的突起联系更加紧密,可见密集的神经细胞网络。海马神经元细胞体外培养至第21天后,神经元细胞开始退化、变性,细胞体皱缩,残留细胞体痕迹,周围光晕消失,折光性减弱,突起融合而粗大杂乱,神经细胞网络粗大老化。2anti-MAP2-FITC免疫荧光法对所获得的海马神经元细胞进行鉴定的结果显示,在所有细胞中,免疫荧光染色MAP2阳性新生大鼠海马神经元细胞纯度达96.3%。结论通过上述改良方法培养获得的新生大鼠海马神经元细胞生长状态良好,并具有较高的纯度,可为进一步进行新生儿缺血性脑损伤模型等海马神经元相�
- 郭慧俞丹周晖童煜王峥
- 关键词：形态学特征荧光免疫测定
- 以慢病毒为载体的整合素β8 RNAi在新生鼠脑内干扰效率的研究被引量：3
- 2018年
- 目的制备稳定表达pSicoR-β8 shRNA的慢病毒载体系统,并评估其在新生鼠脑内RNA干扰(RNAi)效率。方法将慢病毒表达载体pSicoR-β8 shRNA、pSicoR-对照序列与慢病毒包装质粒系统pDM2G、g/pRRE和pRSV Rev分别进行扩增及质粒酶切鉴定,然后共转染293T包装细胞株,通过293T细胞的包装和分泌以收集携带目的干扰片段的慢病毒颗粒。利用PEG-it病毒浓缩试剂进行浓缩,50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。将浓缩后的慢病毒颗粒通过侧脑室注射对新生SD乳鼠中枢神经系统野生表达的整合素β8进行干扰,荧光显微镜下观察慢病毒侧脑室注射后脑组织中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,结合RT-PCR和Western blot方法检测β8 mRNA和蛋白在干预后表达水平的变化,以评估RNAi效率及选择最佳干预时间。结果质粒扩增及酶切结果显示各质粒片段大小分别与质粒图谱大小一致,浓缩后测得的病毒滴度为LV-对照序列:1.0×10~8 PFU/mL,LV-β8 shRNA:5.0×10~8 PFU/mL。慢病毒侧脑室注射后1d,侧脑室周围即可观察到携带GFP的慢病毒整合到宿主细胞基因组并发出绿色荧光,注射后2d、3d和5d可在脑组织切片中观察到较强的绿色荧光。β8 mRNA表达水平在RNAi后1~3d出现降低(P<0.05),第3天达到最大抑制作用,其β8 mRNA抑制率约为56%。β8蛋白表达变化趋势与β8 mRNA表达变化趋势基本一致,RNAi后第3天达到最大抑制作用,其β8蛋白抑制率约为51%。结论成功获得滴度达到体内实验要求的含有β8 shRNA的慢病毒颗粒,并具有较好的体内干扰活性,为进一步研究整合素β8在新生鼠脑组织中的生理功能奠定了基础。
- 唐彬秩屈艺赵凤艳童煜王德健
- 关键词：慢病毒载体RNAI
- 浅谈临床科研能力培养在住院医师规范化培训中的作用被引量：23
- 2017年
- 本文针对住院医生规范化培训中临床科研能力培养的重要性进行了探讨,论述了临床科研能力的培养在住院医师规范化培训中发挥的积极作用,并总结了进一步加强规培医生临床科研能力培养的重要意义。
- 朱将虎童煜屈艺母得志
- 关键词：住院医师规范化培训
- 脑源性神经生长因子经自噬对胚鼠神经元缺氧损伤的保护作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨脑源性神经生长因子(BDNF)对胚鼠缺氧神经元是否有保护作用及其机制是否与激活自噬有关。方法将SD大鼠胚鼠(孕17～19 d)的大脑皮质神经元在体外进行原代细胞培养,并进行神经元鉴定。培养7～10 d,选取生长良好的神经元用于前后两部分实验。1.第一部分随机分为3组,对照组:不加入药物,只作缺氧处理;3-甲基腺嘌呤组(3-MA组):提前加入不同浓度的3-MA后作缺氧处理,依次为5 mmol.L-13-MA组、10 mmol.L-13-MA组、20 mmol.L-13-MA组;BDNF组:提前加入不同浓度的BDNF后作缺氧处理,依次为50μg.L-1BDNF组、100μg.L-1BDNF组、200μg.L-1BDNF组。观察不同剂量3-MA、BDNF对缺氧神经元损伤的作用。之后以细胞计数盒-8(CCK-8)测定各组细胞活力,确定干预缺氧神经元的最佳药物浓度。2.第二部分分为3组,对照组:单纯缺氧,不加药物;100μg.L-1BDNF组:加入100μg.L-1BDNF;10 mmol.L-13-MA组:加入10 mmol.L-13-MA。免疫蛋白印迹法检测3组缺氧神经元在不同缺氧时间点细胞自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,以LC3Ⅱ/ac-tin的相对表达量判断自噬发生的程度。结果 1.免疫荧光鉴定:与未缺氧神经元比较,缺氧神经元突触回缩,细胞网状结构被破坏。2.神经元细胞活力:50μg.L-1BDNF组缺氧神经元细胞活力最强,100μg.L-1BDNF组缺氧神经元细胞活力其次(Pa<0.05);随3-MA剂量加大,各剂量组神经元活力明显降低。3.免疫印迹:于缺氧1 h、3 h、5 h,100μg.L-1BDNF组缺氧神经元的LC3表达量,均较对照组相应时间点明显上调(Pa<0.05)。结论 BDNF通过自噬途径对缺氧损伤神经元起保护作用。
- 陈艾周晖童煜毛萌
- 关键词：脑源性神经生长因子神经元自噬
- 大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养改良方法的研究被引量：3
- 2014年
- 目的改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)的体外培养方法,为进一步研究奠定基础。方法选取生后3d的Sprague-Dawley大鼠的大脑皮层,常规分离纯化AS,低密度种植,培养箱中孵育1h后换瓶,24h后换液,细胞融合成单层后传代,传代后维持在含10%胎牛血清DMEM培养基中培养,并在长时期内不给予更换或补加培养液。采用GFAP/DAPI免疫荧光法鉴定AS细胞。结果体外培养的纯化大鼠大脑皮层AS,表现为细胞突起细长、胞体明显缩小、形态多样的纤维型AS,最后细胞突起之间相互连接形成AS网络。GFAP/DAPI免疫荧光染色结果示GFAP阳性细胞达98%以上。结论大鼠大脑皮质AS的体外培养改良方法培养的AS体外形态、发育特点均与在体内AS基本一致,且纯度较高,为进一步进行AS的研究创造了条件。
- 郭慧毛萌俞丹周晖童煜
- 关键词：星形胶质细胞神经胶质原纤维酸性蛋白
- 论儿科卓越医生培养被引量：4
- 2016年
- 为了整体推进临床医学教育改革,全面提高医学人才培养质量,我国从2012年起开始在全国高校试点卓越医生教育培养计划。根据儿科的专业特点和儿科医生的成长规律,建议将儿科卓越医生项目分为入门基本功、儿科常见病的诊治、儿科疑难疾病诊治、儿科急诊和危急重症的诊治、科学研究、总结和结业六个阶段,逐步培养、引导学员成长为合格的儿科专科医生。
- 蔡浅云罗蓉万朝敏童煜屈艺母得志
- 关键词：儿科
- PC12细胞氧糖剥夺/再灌注损伤中自噬与凋亡现象
- 目的观察氧糖剥夺/再灌注(OGD/OGD-R)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12自噬和凋亡的发生及进展。方法 PC12细胞经氧糖剥夺及再灌注处理建立OGD/OGD-R模型,在处理不同时间点,流式细胞仪检测各组细胞活性和凋亡率...
- 董琳童煜毛萌
- SAG在制备治疗发育期缺氧缺血脑损伤疾病的药物中的应用
- 本发明公开了SAG在制备治疗发育期缺氧缺血脑损伤疾病的药物中的应用。实验表明，在新生大鼠缺氧缺血后2小时腹腔注射5～25mg/kg SAG均可减轻脑梗死；给与15mg/kg SAG后进一步研究发现，SAG可明显改善脑损伤...
- 母得志黄兰屈艺李世平应俊杰赵凤艳童煜唐军石晶王华夏斌张莉杨晓燕熊涛王炎
- 文献传递
- 信息化时代下儿科教学模式改进的探讨被引量：5
- 2018年
- 随着计算机、互联网等信息技术的快速发展,临床及科研工作模式正在逐渐改变,医学教育也在不断变革。儿科学具有许多不同于其他学科的特点,儿科学专业的学生不仅要掌握基本的医学知识及人文素养,同时要加强特殊方面的训练。本文就信息化环境下儿科学专业的先进教学模式进行了探讨。
- 范雪范雪屈艺童煜
- 关键词：儿科教学信息化
