贾彬
- 作品数：9 被引量：24H指数：3
- 供职机构：华中科技大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家高技术研究发展计划湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的基因改造及其在毕赤酵母中组成型和诱导型的表达被引量：10
- 2010年
- 【目的】克隆洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）脂肪酶基因,实现其在毕赤酵母中快速、安全和稳定性的大量表达。【方法】首先设计引物扩增B.cepacia脂肪酶基因,然后应用生物信息学方法分析B.cepacia和毕赤酵母整体密码子使用情况、脂肪酶基因信号肽及密码子偏好性。在此基础上,运用overlap PCR对脂肪酶基因中低使用频率密码子进行改造并同时降低基因的G＋C含量,获得优化的脂肪酶基因。再分别把原始和优化的脂肪酶基因导入载体pGAPZα和pPIC9K中,获得组成型表达载体pGAPlipW、pGAPlipO和诱导型表达载体pPIClipW、pPIClipO。分别将所得4种载体转入GS115中,得到一系列工程菌。经发酵和NTA树脂纯化后,对脂肪酶的酶学性质进行了初步研究。【结果】4种工程菌的脂肪酶活力分别为pPIClipW37.8U/mL,pPIClipO129.5U/mL,pGAPlipW40.2U/mL和pGAPlipO184.3U/mL。改造后脂肪酶活力比原始脂肪酶提高了4.6倍。酶学性质研究表明,脂肪酶在60℃时活力最高,在40℃-65℃范围内非常稳定;脂肪酶最适pH值为9.0,在pH6.0-pH10.0范围均表现很好的稳定性。【结论】通过overlap PCR改造后的脂肪酶显著提高了其在毕赤酵母中的表达效率,且GAP启动子比AOX1启动子更适合于B.cepacia脂肪酶的表达。大量表达的重组脂肪酶的性质与野生脂肪酶的性质相同,符合生产要求。
- 贾彬刘文山杨江科叶才伟徐莉闫云君
- 关键词：洋葱伯克霍尔德菌OVERLAPGAP启动子
- 一种洋葱假单胞菌基因工程菌的构建方法
- 本发明提供一种洋葱假单胞菌基因工程菌的构建方法，将T7 RNA聚合酶基因替换洋葱假单胞菌G63基因组中脂肪酶及其伴侣基因，使T7 RNA聚合酶基因整合到洋葱假单胞菌基因组中并位于脂肪酶启动子的调控之下。然后将洋葱假单胞菌...
- 闫云君杨江科刘云贾彬徐莉
- 文献传递
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶:一种应用前景广阔的生物催化剂被引量：7
- 2009年
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶对有机溶剂(醇)、热、氧化剂、表面活性剂、去污剂、蛋白酶等具有良好的抗性,在有机合成、对映体拆分、非水相催化等领域应用十分广泛。综述了洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的发酵生产、分离纯化、基因克隆与表达、固定化与生物印迹、蛋白质结构解析及应用研究等,并展望了其未来发展方向,以期为该工业酶的研发与广泛应用提供参考。
- 汪小锋贾彬刘涛杨江科闫云君
- 关键词：分离纯化固定化蛋白质结构
- 土壤中产脂肪酶洋葱伯克霍尔德菌的分离与鉴定被引量：3
- 2010年
- 洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)在生物防治、生物降解等农业领域有着广泛的应用,它产生的脂肪酶则在有机合成、精细化工等领域潜力巨大。采用改良的TB-T平板筛选法从土壤中初步筛选出300株洋葱伯克霍尔德菌,然后用脂肪酶活性检测平板对300株菌进行筛选,最终获得6株脂肪酶产量高的菌,通过发酵发现6株菌均有较好的产脂肪酶能力。随后通过16S rDNA比对的方法将6株全部鉴定为B.cepacia。在此基础上,采用HaeⅢ-recA RFLP和基因种特异性PCR对6株菌进行了基因种鉴定,结果表明JWT16、G63YL、WJ158和JWT137属于Burkholderia cenocepacia菌,JWP9属于Burkhold-eria vietnamiensis,JWT267则属于Burkholderia multivorans。
- 贾彬刘文山杨江科汪小锋叶才伟闫云君
- 关键词：洋葱伯克霍尔德菌
- 一种表达生物柴油专用脂肪酶的工程菌及其发酵工艺
- 本发明提供了一种表达生物柴油专用脂肪酶的工程菌及其发酵工艺。本发明采用洋葱伯克霍尔德菌GJ(<I>B.cenocepacia</I>)为原始菌，通过荧光型启动子探针载体从其中筛选组成型强启动子P<Sub>con</Sub...
- 闫云君贾彬徐莉张后今
- 文献传递
- 解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2的表面展示及其酶学性质被引量：1
- 2010年
- 表面展示酶作为全细胞催化剂具备诸如能提高酶的稳定性、省去纯化过程、节约成本等优点。脂肪酶是应用最为广泛的工业酶之一。本研究利用酿酒酵母细胞壁蛋白Cwp2作为锚定蛋白,将解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2展示在酿酒酵母细胞表面,以制备脂肪酶全细胞催化剂。Lip2被融合到Cwp2的N端,Cwp2通过其C端的GPI锚定信号共价结合到细胞壁上。表面展示的Lip2可以水解三丁酸甘油酯及对硝基苯酚辛酸酯(pNPC),其pNPC水解酶活达到4.6U/g干细胞。作为全细胞催化剂,表面展示的Lip2具备良好的催化特征,其最适温度为40°C,最适pH为8.0,同时还具备良好的有机溶剂稳定性。
- 刘文山赵鹤云贾彬徐莉闫云君
- 关键词：脂肪酶解脂耶氏酵母酿酒酵母
- 洋葱伯克霍尔德菌的筛选、鉴定及其脂肪酶基因的高效表达
- 生物柴油是解决目前石化能源危机的重要途径之一，其中脂肪酶催化法制备生物柴油技术具有反应条件温和、转化效率高、绿色环保无污染等优点，符合国家的新能源发展战略，前景广阔。但昂贵的脂肪酶价格限制了酶法生物柴油制备技术的推广和工...
- 贾彬
- 关键词：洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶
- 文献传递
- 基于T7表达系统的洋葱伯克霍尔德菌G63脂肪酶同源高效表达被引量：4
- 2009年
- 为实现对洋葱伯克霍尔脂肪酶的可控高效表达,将目前被广泛使用的T7重组蛋白高效表达系统移植到洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)G63中进行脂肪酶同源表达。首先采用PCR从大肠杆菌BL21(DE3)中得到T7 RNA聚合酶基因(T7 RNAP)并将其克隆到致死质粒pJQ200SK上,然后在T7 RNAP前后各加入500 bp用于同源重组的片段,再通过三亲本杂交把T7 RNAP整合到B.cepacia基因组上,使T7 RNAP受到脂肪酶基因(lipA)启动子调控。接着把lipA和它的伴侣基因lipB单独或全部克隆到载体pUCPCM和pBBR22b上,构建出pBBR22blipAB、pBBR22blipA、pUCPCMlipAB、pUCPCMlipA、pUCPCM△lipAlipB、pUCPCM△lipA、pUCPCM△lipB七种表达质粒,通过电转化将上述表达质粒转化到含T7 RNAP的B.cepacia宿主菌中,最终得到一系列脂肪酶基因工程菌。通过摇瓶诱导发酵发现含表达质粒pUCPCMlipAB的工程菌脂肪酶酶活最高,达到607 U/mg,与野生菌相比酶活力提高2.8倍,并且除含pUCPCM△lipB的工程菌外,其它工程菌的脂肪酶酶活均有不同程度提高。野生菌与工程菌pUCPCMlipAB的发酵液经硫酸铵沉淀,Sephadex G-75凝胶过滤纯化后,比酶活分别为29 984 U/mg和30 875 U/mg。以上结果表明,构建的基于T7表达系统的B.cepacia脂肪酶基因工程能有效提高脂肪酶的表达量,同时说明分泌信号PelB和增强转录的核糖体接合位点对脂肪酶的表达有促进作用。
- 贾彬杨江科闫云君
- 一种表达生物柴油专用脂肪酶的工程菌及其发酵工艺
- 本发明提供了一种表达生物柴油专用脂肪酶的工程菌及其发酵工艺。本发明采用洋葱伯克霍尔德菌GJ (B. cenocepacia)为原始菌，通过荧光型启动子探针载体从其中筛选组成型强启动子P<Sub>con</Sub>，将不含...
- 闫云君贾彬徐莉张后今
- 文献传递
