郑筱娇
- 作品数：12 被引量：19H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝细胞生长因子诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞抗凋亡效应研究被引量：3
- 2017年
- 目的观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对经凋亡诱导剂足叶乙苷(etoposide,VP-16)诱导后慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞凋亡的抑制作用,并分析其分子机制。方法采用苏木素-伊红(HE)染色、吖啶橙染色(AO)染色对凋亡细胞形态特征变化进行定性/半定量分析;采用Annexin V-FITC/PI双染、JC-1染色检测细胞膜表面的PS外翻和完整性及线粒体膜电位分析凋亡细胞生化特征变化;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9等凋亡相关基因mRNA表达的变化,综合评价HGF抗凋亡效应,并阐述其分子机制。结果 HE法、AO法发现HGF+VP-16组凋亡率明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.05),提示HGF可显著抑制凋亡的发生;Annexin V-FITC/PI双染法、JC-1染色法发现HGF+VP-16组早期凋亡细胞明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.001),提示HGF具有抗K562细胞早期凋亡效应;凋亡相关基因mRNA表达检测结果发现,HGF+VP-16组的Bcl-2 mRNA表达量明显高于VP-16组(P<0.001),而Bax mRNA、Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA表达量明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.001、P<0.001),证实HGF抑制凋亡基因表达,同时促进抗凋亡基因的表达,提示HGF具抗凋亡效应。结论 HGF显著抑制经VP-16诱导的CML K562细胞的凋亡,该抗凋亡效应可能通过HGF/c-Met途径调控PI3K/AKT通路而实现。
- 郑筱娇高洲沈蓉蓉赵行滑世轩吕建新岑东
- 关键词：肝细胞生长因子慢性髓细胞性白血病K562细胞凋亡
- NK4拮抗HGF促进肿瘤细胞凋亡的生物学效应被引量：3
- 2013年
- 观察NK4通过拮抗肝细胞生长因子(HGF)诱导不同肿瘤细胞凋亡,研究其生物学作用及分子机制.以足叶乙甙(VP-16)诱导凋亡,分别或经HGF蛋白、NK4蛋白处理5种肿瘤细胞(B细胞淋巴瘤细胞系Raji、人急性粒细胞白血病细胞系HL-60、宫颈癌细胞系HeLa、前列腺癌细胞系PC-3、非小细胞肺癌细胞系A549),采用流式细胞术(FCM)、吖啶橙(AO)染色法、苏木素-伊红(HE)染色法定量观察5种肿瘤细胞的凋亡情况,并进行相关分析.FCM发现,经VP-16处理5种肿瘤细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.001),而HGF+VP-16组凋亡率明显下降(P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.05).AO染色和HE染色结果也证实,5种肿瘤细胞经VP-16处理后凋亡率均显著增高(P<0.001,P<0.001),而HGF+VP-16组细胞凋亡率均明显低于VP-16组(P<0.001,P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.001,P<0.05).此外,发现NK4+VP-16组、HGF+NK4+VP-16组、VP-16组等3组间凋亡率无统计学差异(P>0.05).以上结果提示,HGF蛋白可抵抗凋亡诱导剂VP16的作用,明显降低细胞凋亡;NK4通过竞争性抑制HGF从而促进肿瘤细胞的凋亡,具有潜在的肿瘤治疗价值.
- 郑筱娇高洲沈蓉蓉岑东裴仁治罗建平吕建新
- 关键词：肝细胞生长因子凋亡拮抗
- 肝细胞生长因子抑制肿瘤细胞凋亡作用研究被引量：9
- 2012年
- 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)抑制凋亡诱导剂依托泊苷(etoposide,VP-16)诱导5种肿瘤细胞(B细胞淋巴瘤细胞系Raji、人急性粒细胞白血病细胞系HL-60、宫颈癌细胞系HeLa、前列腺癌细胞系PC-3、非小细胞肺癌细胞系A549)凋亡的作用及其分子机制的研究。方法实验设正常对照组、药物组及肝细胞生长因子保护组,通过CCK-8法观察依托泊苷对5种肿瘤细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞术,吖啶橙(AO)荧光染色,瑞氏染色(HE),透射电镜定性及定量观察5种肿瘤细胞的凋亡情况,并进行相关分析。结果 CCK-8法显示依托泊苷可明显抑制Raji、HL-60、PC-3、HeLa、A549等5种细胞增殖的药物浓度分别是100、1、400、200、200μg.mL-1;透射电镜下可观察到典型的凋亡细胞。流式细胞仪检测结果表明,5种细胞的药物组凋亡率均明显高于对照组(P<0.01,P<0.05),其中肝细胞生长因子保护组凋亡率明显低于药物组(P<0.01,P<0.05);吖啶橙染色和HE染色结果表明,正常组细胞形态完好,药物组及肝细胞生长因子保护组凋亡率明显增高(P<0.01,P<0.05),其中肝细胞生长因子保护组凋亡率明显低于给药组(P<0.01,P<0.05)。结论肝细胞生长因子可明显抑制依托泊苷诱导的5种肿瘤细胞凋亡,其作用机制有待进一步研究证实。
- 沈蓉蓉郑筱娇赵行岑东罗建平吕建新裴仁治滑世轩
- 关键词：肝细胞生长因子依托泊苷凋亡流式细胞术吖啶橙染色肿瘤
- 肝细胞生长因子基因转染对人淋巴瘤细胞凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染人淋巴瘤细胞系Raji细胞后,拮抗足叶乙甙(VP-16)诱导细胞凋亡的研究。将三种细胞:未转染Raji细胞、空载体pVITRO2-mcs转染细胞和HGF基因转染细胞,分成正常对照组和经VP-16处理的药物组。采用Western blot法验证HGF蛋白的表达;CCK-8法检测诱导Raji细胞凋亡的药物浓度;通过透射电镜、流式细胞术、吖啶橙(AO)染色、苏木精–伊红(HE)染色等方法观察Raji细胞的凋亡情况,并进行相关分析。结果显示:Western blot法验证了HGF蛋白质的表达;CCK-8法显示100μg/mL足叶乙甙可明显抑制Raji细胞增殖;透射电镜下可发现典型的凋亡细胞;流式检测结果表明:给药组与正常组相比,三组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01),提示VP-16具有诱导细胞凋亡的作用;但给药组间:HGF基因转染组凋亡率明显低于未转染组(P<0.05)和空载体pVITRO2-mcs转染组(P<0.05),提示HGF基因转染可明显抑制VP-16诱导的Raji细胞的凋亡,AO染色和HE染色结果也同样提示HGF具有拮抗VP-16诱导的细胞凋亡效应。
- 沈蓉蓉郑筱娇岑东赵行滑世轩裴仁治吕建新涂植光
- 关键词：肝细胞生长因子基因转染凋亡
- HGF基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用
- 2013年
- 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用及其机制。方法:采用HGF基因重组质粒pVITRO2-HGF转染的Raji细胞建立裸鼠皮下人淋巴瘤移植瘤模型,动态监测裸鼠体重和肿瘤大小;8周后获取瘤组织,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组化检测移植瘤组织的细胞凋亡和微血管密度(MVD),并进行相关分析。结果:造模成功率为96.7%。HGF转染组的瘤体积明显大于HGF转染+VP-16组(P<0.01)、未转染组与空载体组(P<0.01),HGF转染+VP-16组也大于对照组(P<0.01),未转染组与空载体组间无显著差异(P>0.05)。pVITRO2-HGF转染组凋亡指数显著低于对照组(P<0.01),经VP-16诱导后凋亡增加(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01)。pVITRO2-HGF转染组的MVD显著高于对照组(P<0.01),但经VP-16诱导后血管增生降低(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05),对照组间无显著差异(P>0.05)。结论:HGF基因转染可显著促进裸鼠人淋巴瘤移植瘤的生长,明显抑制凋亡的发生,这一效应可能与其促进肿瘤血管新生和抑制肿瘤细胞凋亡有关。
- 赵行郑筱娇高洲沈蓉蓉岑东裴仁治罗建平吕建新
- 关键词：基因转染淋巴瘤裸鼠异种移植物
- 肝细胞生长因子的表达、纯化和基本活性研究被引量：1
- 2012年
- 目的通过构建肝细胞生长因子（HGF）基因的重组原核表达载体，转化大肠杆菌，制备HGF重组蛋白并初步证实其活性。方法克隆HGF基因插入载体pET-26b（＋），构建重组原核表达载体pET-26b（＋）-HGF，转化E-coliRosseta（DE3）。IPTG诱导转化菌表达重组蛋白，采用Ni—NTA树脂亲和层析法进行纯化，复性后冷冻干燥。结果HGF基因重组原核表达载体pET．26b（＋）．HGF构建成功。转化pET-26b（＋）-HGF的EcoliRosseta（DE3）以包涵体形式大量表达目的蛋白，占菌体总蛋白的38％，并经Westernblot证实。经Ni—NTA树脂亲和层析法纯化后HGF蛋白纯度约为95％，作用于人非小细胞肺癌细胞系A549细胞发现可促进其增殖、迁徙并抑制凋亡。结论成功构建了HGF基因重组原核表达载体pET-26b（＋）-HGF，转化E-coliRosseta（DE3）后成功表达，纯化复性回复重组HGF蛋白结构，经体外实验证实具有生物学活性。
- 郑筱娇高洲沈蓉蓉赵行岑东罗建平吕建新裴仁治滑世轩
- 关键词：肝细胞生长因子蛋白纯化活性
- 磁共振在宫颈癌术前评估中的价值探讨被引量：1
- 2017年
- 目的探讨磁共振成像(MRI)对宫颈癌患者术前临床评估价值。方法选择42例临床分期为早中期宫颈癌患者的术前MRI影像学和完整临床资料,治疗前患者均行磁共振检查,采用自身对照,以临床分期为对照,以术后病理为金标准,分析磁共振成像在宫颈癌分期的预测价值。结果 42例宫颈癌患者,经MRI检测宫颈癌的符合率为81.00%(34/42),分别为0期33.33%,IA期66.67%,IB期95.83%,IIA期57.14%,IIB期80.00%;而临床分期的符合率为57.10%(24/42),分别为0期33.33%,IA期33.33%,IB期83.33%,IIA期14.28%,IIB期20.00%;本研究显示MRI分期诊断符合率对于IB期为95.83%,IIB为80.0%,提示磁共振对于IB及IIB期诊断符合率高。以手术病理分期为"金标准"计算相应Kappa值,临床分期为0.34;MRI分期为0.71,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MRI可准确测量肿瘤病灶大小、肌层浸润深度、显示盆腔淋巴结情况,从而提高宫颈癌分期的准确性,为更合理选择治疗方案提供依据。
- 张富斌崔李宁郑筱娇阮新忠
- 关键词：宫颈肿瘤
- 肝细胞生长因子重组蛋白在大肠杆菌的表达与制备
- 目的通过构建肝细胞生长因子(HGF)基因的重组原核表达载体,转化大肠杆菌,制备HGF重组蛋白。方法将HGF基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体pET-26b(+)-HGF,转化E.coli Rosset...
- 郑筱娇沈蓉蓉赵行岑东吕建新罗建平裴仁治滑世轩
- 关键词：纯化
- 文献传递
- 肝细胞生长因子诱导慢性粒细胞白血病K562细胞抗凋亡效应及分子机制研究
- 目的：克隆肝细胞生长因子(HGF)基因，构建重组真核表达载体;观察HGF蛋白诱导经足叶乙甙(VP-16)处理后人慢性粒细胞白血病K562细胞(K562细胞)拮抗凋亡效应;HGF基因重组表达载体转染K562细胞，观察HGF...
- 郑筱娇
- 关键词：慢性粒细胞白血病肝细胞生长因子K562细胞基因转染
- MiR-145靶向作用激活素受体ⅠB抑制小鼠卵巢颗粒细胞增殖被引量：1
- 2017年
- 目的探讨miR-145对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的调控作用。方法制备Ad-miR-145重组腺病毒,分离培养3周龄的SPF级ICR雌性小鼠卵巢颗粒细胞(mGC),以不同浓度的Ad-miR-145(0 mol、50 mol、100 mol)感染m GC,48 h后通过CCK-8增殖实验检测细胞的增殖活力;收集细胞通过TRIZOL法提取细胞总RNA,反转录后进行实时定量PCR检测细胞增殖相关基因细胞周期蛋白cyclin D2 mRNA的表达情况;提取细胞蛋白,通过Western blot检测其中cyclin D2的蛋白水平;同时采用双荧光素酶报告基因调查miR-145对其预测靶基因激活素受体ⅠB(ACVRⅠB)的调控作用。结果成功获得滴度为8.91×10^(10) ifu/mL的高表达miR-145腺病毒,该腺病毒可在mGC中高表达miR-145;腺病毒介导的miR-145高表达可抑制m GC的增殖活力,并可抑制m GC中cyclin D2的m RNA和蛋白的表达;miR-145可抑制ACVRⅠB 3’-UTR的荧光素酶活性。结论 miR-145通过靶向作用ACVRⅠB抑制小鼠m GC增殖。
- 张连筱郑筱娇徐科君张富斌崔李宁
- 关键词：MIR-145细胞周期蛋白
