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魏健: 作品数：24 被引量：71H指数：7; 供职机构：河北农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金转基因生物新品种培育专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学文化科学经济管理更多>>

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转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印迹检测被引量：7: 2017年; 【目的】制备抗CAS9蛋白质的单克隆抗体,建立转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印迹检测方法,了解CAS9蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以带Cas9的质粒DNA为模板,PCR扩增Cas9 5′端810 bp片段后克隆到p ET30a载体中,将酶切验证且序列正确的重组质粒转入表达菌Condon Plus中,经IPTG诱导表达CAS9蛋白质(N端270氨基酸),用纯化的重组蛋白质作为免疫原免疫小鼠,制备单克隆抗体,用免疫印迹分析筛选特异性和灵敏度高的抗体细胞株。用特异性引物PCR扩增转基因水稻的Cas9,用免疫印迹检测转基因水稻中的CAS9蛋白质。将重组CAS9蛋白质和带有CAS9的水稻苗期叶片蛋白质进行平行免疫印迹分析,用Image J软件采集信号绘制CAS9蛋白质的标准曲线,进而对水稻叶片中的CAS9蛋白质进行定量分析。提取单粒稻米的总蛋白质,稀释后用免疫印迹分析CAS9蛋白质的检测下限,提取多个时期、部位的水稻材料的总蛋白质,包括苗期的地上部和地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶片等,用SDS-PAGE分离后免疫印迹检测比较CAS9蛋白质的表达特征。【结果】通过体外克隆、诱导表达获得了纯化的重组CAS9蛋白质N端片段,免疫小鼠后得到42株阳性杂交瘤细胞株,经筛选鉴定到#12D2细胞株对水稻样品的检测具有较好的特异性和灵敏度。用该抗体通过免疫印迹检测了转基因水稻,所建立的免疫印迹方法对重组CAS9蛋白质的检测下限约为0.25 ng。在水稻苗期叶片中,CAS9蛋白质约占鲜重的0.00005%,可检出单粒稻米8%样品(约2 mg)中的CAS9蛋白质。在苗期地上部CAS9蛋白质的表达丰度高于地下部,分蘖期茎和叶片中表达量较高,根和叶鞘表达量较低。【结论】获得特异性强、灵敏度高的抗CAS9单克隆抗体,建立了检测转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印记方法,揭示了CAS9蛋白质在水稻不同部位的表达特征,并展示了在其他植�; 郭亚璐马晓飞史佳楠张柳张剑硕黄腾武鹏程康昊翔耿广荟陈浩魏健窦世娟李莉云尹长城刘国振; 关键词：水稻转基因植物单克隆抗体免疫印迹

玉米低植酸基因的分子标记及其应用: 本发明公开了属于作物分子标记领域的玉米低植酸基因的两个分子标记，扩增该两个分子标记的引物对分别为IDP7818和IDP7635，其中引物对IDP7818由SEQ？ID？No：1和SEQ？ID？No：2所示的核苷酸序列组成...; 刘国振高庆华孟义江刘丽娟贾盟张萃窦世娟李莉云兰金苹魏健; 文献传递

水稻病程相关PR1家族蛋白质在叶片生长及与白叶枯病菌互作反应中的表达被引量：9: 2014年; 病程相关(PR)蛋白质经常被用作抗病反应的分子标记。利用免疫印迹(WB)技术检测了7个PR1家族蛋白质在水稻(Oryza sativa)叶片生长及与白叶枯病菌互作反应过程中的表达,发现6个PR1家族蛋白质在叶片生长中有表达。检测PR1蛋白质在Xa21介导的抗白叶枯病过程中的表达,结果显示PR1#052、PR1#072、PR1#073和PR1#121四个蛋白质在抗病反应后期呈上调或诱导表达,PR1#071则表达下调。进一步比较它们在抗病、感病和对照(Mock)反应中的表达丰度,发现在抗病和感病反应中的变化幅度均明显大于对照反应,推测这些PR蛋白质在水稻-白叶枯病菌互作反应中发挥作用。另外,对PR1基因上游启动子区的cis元件进行了分析。该研究初步揭示了水稻PR1家族蛋白质的表达谱,为进一步了解PR1蛋白质的功能提供了线索。; 李雪姣范伟牛东东关明俐缪刘杨史佳楠窦世娟魏健刘丽娟李莉云刘国振; 关键词：水稻免疫印迹白叶枯病菌

水稻核糖核酸酶T2蛋白质在叶片生长和盐胁迫过程中的表达研究被引量：4: 2013年; 核糖核酸酶(Ribonucleases,RNase,RNS)T2普遍存在于各种生物中,其保守性提示了功能的重要性。在水稻基因组中有8个RNase T2成员,本试验采用基于抗体的蛋白质组学策略,用免疫印迹(Western Blotting,WB)技术检测了它们在叶片生长及盐胁迫条件下的表达,发现OsRNS1-OsRNS7蛋白质在叶片中有表达,其中OsRNS4主要在苗期表达,提示其在苗期发挥作用,其它蛋白质主要在成株期表达,但没有检测到OsRNS8的表达;水稻OsRNS4在盐胁迫条件下表达上调,提示其可能在盐胁迫应答过程中发挥作用,其它RNase T2蛋白质的表达大多随盐胁迫时间的延长而下降。将RNase T2蛋白质的表达与转录信号进行比较,发现二者在部分基因中有一定的相关性。本试验获得的数据为揭示水稻RNase T2基因的功能提供了线索。; 曾祥然魏健贾霖关明俐刘钊兰金苹刘丽娟李莉云刘国振; 关键词：水稻免疫印迹

水稻类钙调磷酸酶亚基B蛋白质在逆境胁迫下的表达被引量：7: 2013年; 【目的】了解水稻CBL蛋白质在逆境胁迫下的表达模式进而探讨水稻耐逆的分子机理。【方法】采用基于抗体的蛋白质组学策略,以超级杂交稻父本9311为材料,采用免疫印迹(western blotting,WB)技术调查了CBL家族主要成员在冷、热、旱、淹和盐胁迫等5种逆境中的表达特征。【结果】发现CBL1、CBL5和CBL6在冷胁迫中表达下调,CBL1和CBL2在热胁迫中表达下调,CBL1和CBL5在旱胁迫中表现下调,而CBL6、CBL8和CBL10在旱胁迫中表现上调,CBL1、CBL5、CBL6、CBL8和CBL10在淹涝胁迫中表达上调,而CBL2表现下调。【结论】鉴定了水稻在重要逆境胁迫下发生丰度变化的6个CBL蛋白质。; 贾霖刘雨萌范伟关明俐贾盟窦世娟魏健彭业博刘丽娟李莉云刘国振; 关键词：水稻免疫印迹逆境胁迫蛋白质表达

中小企业组织变迁的动因及趋势: 在人类迈入21世纪的今天,经济和社会环境已发生了天翻地覆的变化.并导致人们的行为、资源的配置方式的变化.这些变化对中小企业的发展而言,既是机遇,也是挑战.中小企业在具有先天劣势的前提下,只有先一步对企业组织做出调整,才能...; 魏健; 关键词：中小企业知识链; 文献传递

过表达OsMPK17激酶蛋白质增强了水稻的耐旱性被引量：4: 2020年; 促分裂原活化蛋白质激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)在真核生物中高度保守,在水稻逆境应答反应中也发挥着重要作用。本研究表达纯化了水稻OsMPK17蛋白质,制备了特异性抗体,对多种非生物逆境胁迫下的蛋白质样品进行免疫印迹分析,发现OsMPK17蛋白质在干旱胁迫下诱导表达,提示该蛋白质在干旱胁迫应答中发挥作用。对脱落酸和茉莉酸甲酯处理的离体叶片蛋白质分析发现,OsMPK17蛋白质表达丰度下降,提示该蛋白质的功能发挥可能受激素调控。为此,构建了过表达OsMPK17蛋白质的载体,转化水稻后筛选获得了OsMPK17蛋白质过表达的纯合株系。田间种植鉴定结果表明,转基因株系的株高变矮、穗长变短、结实率降低。种子萌发期拟旱(PEG-6000)处理条件下,过表达OsMPK17株系的种子长势明显比野生型好,根长与芽长均显著大于野生型。幼苗期失水试验表明,转基因植株的失水率低于野生型。在土培干旱胁迫后恢复浇水的试验中,过表达OsMPK17蛋白质的转基因水稻生长也好于野生型。综上,过表达OsMPK17蛋白质提高了水稻的耐旱性。本研究增进了对水稻OsMPK17基因功能的了解。; 马金姣兰金苹张彤陈悦郭亚璐郭亚璐燕高伟魏健窦世娟魏健窦世娟杨明; 关键词：水稻免疫印迹逆境胁迫过表达

水稻类Tubby蛋白质在叶片生长和白叶枯病抗性反应中的表达研究: 背景:水稻是世界上最重要的粮食作物之一,也是基础研究的模式植物之一。由Xanthomonas oryzae pv.oryzae (Xoo)引起的水稻白叶枯病,是一种严重的细菌性病害。水稻遭受白叶枯病菌侵染会严重减产,甚至...; 魏健; 关键词：水稻抗白叶枯病; 文献传递

一种微藻收集和浓缩的方法与装置: 一种微藻收集和浓缩的方法，是将含微藻的液体注入微孔不锈钢网做成的网桶中，因水面提高产生自然压力使水分通过微孔排出，而微藻留在桶中，达到收集和浓缩微藻的目的。本发明的装置包括：（1）微藻收集桶，该桶由三部分组成，上部和下部...; 刘国振柴帅杰史佳楠郭美岑李莉云刘丽娟窦世娟魏健; 文献传递

转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征被引量：10: 2014年; 【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入大肠杆菌表达菌BL21中,IPTG诱导获得重组表达的GUS蛋白质,用HIS-tag beads纯化后作为免疫原免疫小鼠制备GUS蛋白质特异的抗体,通过免疫印迹分析筛选高特异性的单克隆抗体,用Broadford法对重组的GUS蛋白质进行定量,对不同浓度的GUS蛋白质进行免疫印迹分析,绘制检测GUS蛋白质的标准曲线,通过与标准曲线的比较对水稻叶片中GUS蛋白质进行定量分析。提取不同时期、不同部位的水稻总蛋白质,包括苗期的地上部、地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶枕、叶片上部、叶片中部和叶片下部,孕穗期的茎、穗轴、叶鞘、叶枕、叶片、幼穗(长度分别为1、2、10和20 cm),开花期的茎、穗轴、叶鞘、叶片、穗子,成熟期的茎、叶片、授粉后不同时期的种子(分别为授粉后10、20、30和40 d)、乳熟期的胚、胚乳和颖壳、成熟种子的全种子、胚、胚乳和颖壳以及不同时期的叶片和根部材料等。SDS-PAGE分离后用抗体检测其GUS蛋白质的丰度。【结果】筛选获得了高特异性的抗GUS单克隆抗体(编号为#27),用该抗体检测转基因水稻中及重组的GUS蛋白质均呈现特异条带,没有可见的背景信号,用本研究建立的免疫印迹方法对重组GUS蛋白质的检测下限约为4 ng,可检出转基因水稻单粒大米2.5%样品中(约0.6 mg)的GUS蛋白质。在不同时期的转基因水稻叶片中GUS蛋白质的表达丰度基本稳定,而在水稻根部的GUS丰度随生长急剧减少,5叶期根中的表达量不到3叶期的三分之一,到6叶期检测不到GUS蛋白质。在水稻苗期叶片中,GUS蛋白质约占鲜重的0.02‰。另外,除分蘖期以后的根部之; 牛东东郝育杰荣瑞娟韦汉福兰金苹史佳楠魏健李雪姣杨烁奚文辉武鹏程刘丽娟吴琳刘斯奇尹长城刘国振; 关键词：水稻转基因植物免疫印迹

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