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中垣雅雄: 作品数：10 被引量：32H指数：4; 供职机构：信州大学更多>>; 发文基金：博士科研启动基金中央高校基本科研业务费专项资金安徽省自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>

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不同EGFP-蜘蛛丝融合基因在昆虫细胞的表达及融合丝蛋白形成机制初探(英文): 2007年; 蜘蛛能吐出具有优异机械特性的多种类型的丝,其中管状腺丝用于构建卵囊并具有良好的分子和机械性能,是目前唯一报道的全长cDNA序列的蜘蛛丝。基于为将来利用生物工程方法大量生产高性能的仿蜘蛛丝纤维提供基础信息,通过Bac-to-Bac/AcNPV杆状病毒表达系统,在强启动子驱动下,对2个大小不同的蜘蛛卵囊丝蛋白基因序列(全长cDNA序列和部分cDNA序列)与EGFP报告基因实现了在AcNPV昆虫细胞中的融合表达。绿色荧光和W estern印迹分析表明,被表达出的2个大小不同的卵囊丝融合蛋白在昆虫细胞胞质中呈现出明显不同的溶解性。含有部分卵囊丝基因的短EGFP-蜘蛛丝融合基因的表达产物在胞质里具有可溶性;而含有全长卵囊丝基因的巨大EGFP-蜘蛛丝融合基因的表达产物倾向于自我装配形成沉淀聚合物。研究结果也暗示了蜘蛛丝蛋白的分子大小可能对其装配成高性能的丝纤维有重要影响。; 赵爱春夏庆友鲁成向仲怀张袁松中垣雅雄; 关键词：蜘蛛丝丝蛋白

家蚕卵显微注射操作对蚕卵孵化及畸形蚕发生的影响被引量：1: 2013年; 早期胚胎显微注射是目前获得转基因家蚕Bombyx mori的主要途径。显微注射操作对蚕卵的损伤导致注射后的蚕卵孵化率降低,是家蚕转基因工作的主要障碍之一。本研究对不同卵龄的蚕卵进行了开孔或注射实验,并对产后5h的蚕卵上背侧、腹侧、前极、后极和中央等5个不同的位置进行了开孔实验,调查了卵孵化率和体形异常蚕的产生情况。结果表明:较早卵龄期的注射或从蚕卵背侧的注射可以获得高的孵化率。腹侧注射产生大量的体形异常蚕而背侧注射的蚕完全正常。通过调整注射时期和注射位置避开上述影响可以减少死卵和畸形蚕,提高孵化率。本研究为改进家蚕转基因操作技术提供了有效的参考。; 赵天福韩冷王玉军朱勇张高军中垣雅雄; 关键词：家蚕显微注射畸形孵化率

天蚕卵黄原蛋白cDNA的克隆及序列分析被引量：8: 2006年; 天蚕卵黄原蛋白cDNA的全碱基序列由5720个碱基构成，一个开读框有5334个碱基序列，编码了包括由15个氨基酸组成的信号肽在内的共1778个氨基酸的蛋白质前体。天蚕和柞蚕卵黄原蛋白的同源性非常高，氨基酸序列达到92．6％，碱基序列达到94％。天蚕、柞蚕和家蚕的卵黄原蛋白的糖链附加位点（N—linkedg—lycosylationsite）：柞蚕有4个，家蚕有5个，天蚕和家蚕相同保存着5个。在N-末端区域，天蚕和家蚕有多聚丝氨酸区域和可被胰蛋白酶识别的RSRR部位；柞蚕虽然也具有多聚丝氨酸区域，但没有可被胰蛋白酶识别的RSRR部位。在C-末端区域里，大多数昆虫从GICG功能部位至C-末端结尾具有7个～10个半胱氨酸（Cys）。鳞翅目的4种昆虫柞蚕、天蚕、家蚕和舞毒蛾（A．pernyi，A．yamamai，B．mori，L．dispar）都是7个半胱氨酸。; 刘朝良王磊梶浦善太梶浦善太; 关键词：天蚕卵黄原蛋白 CDNA克隆

柞蚕卵巢移植于雄体后的发育及其卵黄原蛋白的吸收积累被引量：4: 2000年; 卵黄原蛋白 ( Vn)是昆虫卵中主要的蛋白质。正常的柞蚕卵里 ,卵黄原蛋白 ( Vn)占卵全蛋白的70 %以上 ,把柞蚕的卵巢移植于雄体 ,不仅能发育 ,而且能形成卵 ,在此把该卵称之为柞蚕雄卵。 SDS— PAGE和免疫印迹分析的结果表明 ,卵黄原蛋白在柞蚕雄卵里也有一定的积累。并确认该卵黄原蛋白来自于雄体柞蚕液里的卵黄原蛋白前驱体。由于雄体柞蚕液含有的卵黄原蛋白前驱体的量少 (卵全蛋白的 2 .2 %,刘朝良等未发表 ) ,每个移植体只能形成 2～ 3粒成熟卵。卵巢的移植成功率以幼虫; 刘朝良木尾浦善太中垣雅雄武井隆三; 关键词：柞蚕卵巢卵黄原蛋白

转基因家蚕生产含蜘蛛丝蛋白的新型复合茧丝纤维被引量：8: 2012年; 为了人工大量生产蜘蛛丝蛋白,蜘蛛牵引丝基因(MaSp1)被用piggyBac转基因载体导入家蚕染色体中。茧丝蛋白分析显示转基因家蚕可以生产含有蜘蛛牵引丝蛋白的复合茧丝新纤维。与天然茧丝相比,转基因家蚕茧丝强度增加5.3%,而断裂伸长几乎没有变化。研究表明利用转基因家蚕大量生产各种新型复合蛋白质纤维材料具有潜在的应用前景。; 张袁松赵天福赵爱春文红秀中垣雅雄; 关键词：转基因家蚕蜘蛛丝

基因重组与蚕的应用被引量：4: 2001年; 中垣雅雄张袁松李斌; 关键词：基因重组转基因动物转基因昆虫制药转基因蚕

蜘蛛丝基因MaSp1在转基因家蚕中的表达分析(英文): 2013年; 利用反向PCR、定量PCR以及免疫共沉淀等方法分析研究转基因家蚕的丝素蛋白及基因的结构和性质。结果表明:(1)在DNA水平上,MaSp1基因整合进了家蚕的基因组,插入位点位于scaffold 868;(2)在RNA水平上,MaSp1的表达并不干扰其他3个基因(Fib-H,Fib-L and P25)的表达水平,并且外源基因MaSp1的表达水平略高于Fib-H;(3)在蛋白质水平上,MaSp1蛋白的丰度大约占丝素总蛋白的2%,而且通过自身的LBS区段和轻链蛋白(Fib-L)形成分子间二硫键,从而融入蚕丝蛋白复合体。; 韩冷张磊中垣雅雄; 关键词：转基因家蚕蛋白质-蛋白质相互作用

用拉曼光谱研究不同吐丝方式获得的蜘蛛牵引丝的二级结构(英文): 2013年; 利用傅里叶变换拉曼光谱技术对不同吐丝环境下获得的棒络新妇蜘蛛牵引丝(自由爬行分泌的牵引丝,垂直下落时分泌的牵引丝,在20 mm·s-1的速度下人工强制抽取的牵引丝)纤维大分子结构进行了分析,对特征谱带的分析结果表明,蜘蛛牵引丝蛋白中包含了β-折叠,β-转角,α-螺旋以及无规卷曲结构;酰胺I带中,不同的方式获得的牵引丝中所含的4种二级结构的比例不同。其中人工强制抽取获得的牵引丝中包含较多的β-折叠结构,α-螺旋含量最少,说明在不同环境条件下,蜘蛛分泌牵引丝的结构会发生变化,这一改变可能会导致丝纤维的力学特性的改变。; 张磊鲍先巡刘明辉韩冷中垣雅雄; 关键词：分子结构

蓖麻蚕卵黄原蛋白cDNA的克隆及序列分析被引量：14: 2003年; 本文论述了蓖麻蚕卵黄原蛋白cDNA迅速克隆化的方法。SDS-PAGE鉴定的蓖麻蚕卵黄原蛋白由大小二个亚基构成,求出的分子量大亚基为180kDa,小亚基为45kDa,从解析的蓖麻蚕卵黄原蛋白氨基酸序列推算的分子量大亚基为161.06kDa,小亚基为40.53kDa,如果考虑到翻译后的修饰,这与SDS-PAGE求出的分子量是吻合的。蓖麻蚕卵黄原蛋白cDNA是由5788pb构成,一个ORF为5337个碱基,编码了1779个氨基酸。在信号肽的15个氨基酸残基中,有12个是疏水性氨基酸残基。这与其他昆虫卵黄原蛋白信号肽区域的疏水性分析是一致的。蓖麻蚕卵黄原蛋白N-linkedglycosylationsite的分布与家蚕、柞蚕和天蚕不同,3处N-linkedglycosylationsite存在于大亚基里,2处存在于多聚丝氨酸区域上流的小亚基里。另外,我们发现在所解析的柞蚕、天蚕和蓖麻蚕卵黄原蛋白氨基酸序列的C-末端区域里DGQR、GICG功能部位及其后的6个半胱氨酸都完好地保存。; 刘朝良梶浦善太中垣雅雄; 关键词：蓖麻蚕卵黄原蛋白 CDNA

关于长期冷藏蚕卵的孵化率及其有关的2、3个特性: 1991年; 使用本研究室保存的28个品种,进行约2年的长期冷藏,调查了孵化率及其关联的2,3个特性之间的关系。1)对于长期冷藏卵的孵化率,供试品种间有很大差异。热带种和卵色突变系统全部没有孵化,但锦秋、钟和、研白等及交杂种有良很孵化率。2)根据孵化率把观察到的各品种间血缘关系进行了聚类分析,分类成6个集团,已知3眠蚕和卵色系统属于别的集团。3)检索了与孵化有关的遗传基因的存在,从而得到的结果是在第4和第6染色体上有这种遗传基因的存在。蚕卵的长期冷藏是谋求蚕种制造的省力化和提高遗传基因保存效率的重要途径。为确立这种体系,很早就进行了研究,建立了现在的复式冷藏法。这种方法。; 武井隆三长岛荣一中垣雅雄陈胜静; 关键词：省力化蚕种制造眠蚕基因座位近缘

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