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任吉华: 作品数：29 被引量：38H指数：4; 供职机构：重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学更多>>

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SIRT3激动剂对乙肝病毒转录和复制的影响被引量：2: 2020年; 该文探讨了SIRT3激动剂(Honokiol,HKL)对乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。培养HepG2-NTCP和人原代肝细胞(primary human hepatocytes,PHH),感染HBV颗粒后,用Honokiol(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)处理细胞后继续培养10天,通过荧光定量PCR检测细胞内HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs水平,Southern blot实验进一步检测胞内HBV DNA水平。构建SIRT3-KO细胞,检测敲除SIRT3后,Honokiol对细胞内HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs的影响。通过小鼠尾静脉高压注射pCMV-KRAB-Cre质粒和precccDNA质粒构建持续感染小鼠模型,一周后腹腔注射Honokiol持续20天。荧光定量PCR检测小鼠血清中HBV DNA拷贝数,肝组织内HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs水平。结果表明,Honokiol浓度依赖性地抑制HepG2-NTCP和PHH细胞内HBV DNA以及HBV RNAs水平,此外,Honokiol可以降低cccDNA的转录活性;敲除SIRT3后,Honokiol不能发挥抗病毒作用;小鼠模型中,Honokiol能够降低血清中HBV DNA和肝组织内HBV DNA拷贝数,以及能够显著抑制肝组织内HBV RNAs水平和cccDNA的转录活性。该研究结果表明,Honokiol能够抑制乙肝病毒转录和复制。; 徐红艳姜慧秦一萍任放任吉华; 关键词：HONOKIOL 乙肝病毒共价闭合环状DNA

过表达SIRT3抑制裸鼠异位移植人肝细胞癌的生长及其机制研究被引量：1: 2015年; 该文旨在研究人肝细胞癌异位移植瘤裸鼠模型中沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,SIRT3)对肝细胞癌生长的影响及其机制。建立稳定过表达SIRT3和pc DNA3.1的SK-Hep-1细胞株;将稳定过表达SIRT3和pc DNA3.1的细胞悬液分别注射入裸鼠皮下,实时监测两组移植瘤的生长,25 d后剥离出移植瘤并称重;免疫组织化学检测移植瘤中SIRT3、Ki67的表达水平;应用定量逆转录PCR(q RT-PCR)筛选SIRT3影响移植瘤生长的下游靶向分子,Western blot检测下游靶向分子Bax的表达量以及移植瘤中cleaved-PARP(poly ADP-ribose polymerase)的表达水平。结果显示,过表达SIRT3组移植瘤的体积和重量都小于pc DNA3.1组;过表达SIRT3组移植瘤中Ki67的表达水平较pc DNA3.1组降低;过表达SIRT3上调Bax的m RNA和蛋白质水平并促进PARP的剪切。该文结果提示,SIRT3可能通过Bax凋亡信号通路抑制人肝细胞癌异位移植瘤的生长。; 陈祥任吉华冉龙宽陶娜娜李宛蔚周洪钟刘波陈娟; 关键词：肝细胞癌移植瘤 BAX

SIRT2对裸鼠原位肝癌生长和肺转移的影响及其机制研究被引量：1: 2018年; 该文旨在探讨沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,SIRT2)基因敲低对裸鼠原位肝癌生长和肺部转移的影响。应用杀稻瘟菌素筛选构建稳定敲低SIRT2基因的SK-Hep-1细胞,应用定量逆转录PCR(q RT-PCR)和Western blot检测其敲低效率。将稳定敲SIRT2基因的细胞(SIRT2-sh RNA-SK-Hep-1)和对照组细胞(sh Cont-SK-Hep-1)原位注入裸鼠肝脏,8周后处死裸鼠并取出肝脏和肺组织,比较两组裸鼠肝癌肿瘤的大小及肺转移结节的数量。应用Western blot和免疫组织化学检测两组裸鼠肝癌组织中SIRT2、p-AKT、AKT、p-GSK3β、GSK3β、activeβ-catenin和β-catenin的蛋白质水平。结果显示,稳定敲低SIRT2基因的SK-Hep-1细胞系构建成功。裸鼠原位肝癌肺转移模型中,相比sh Cont-SK-Hep-1组,SIRT2-sh RNA-SK-Hep-1组裸鼠原位肝癌体积减小(P<0.05),肺转移结节数量明显减少(P<0.05)。Western blot结果表明,敲低SIRT2基因的裸鼠组p-AKT、p-GSK3β、activeβ-catenin、β-catenin蛋白质水平降低,GSK3β水平升高,AKT水平无差异;免疫组织化学结果表明,敲低SIRT2基因的裸鼠组p-AKT、p-GSK3β、β-catenin蛋白质水平降低。本研究结果提示,在裸鼠原位肝癌肺转移模型中,敲低SIRT2基因可以通过激活AKT的表达影响GSK3β/β-catenin信号通路,从而抑制人肝癌细胞的生长和肺转移。; 杨秋霞周洪钟任吉华李宛蔚陶娜娜程胜桃何琳余海波龚蕊陈娟; 关键词：肝细胞癌肝癌肺转移

热休克蛋白70对HBV复制的影响被引量：2: 2016年; 目的:探讨过表达热休克蛋白70(HSP70)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法:运用RTq PCR检测HBV复制对HSP70表达的影响及过表达HSP70对HBV 3.5 kb m RNA的影响;运用Western blot法验证HSP70过表达效果及过表达HSP70对HBV核心蛋白的影响;RT-q PCR和Southern blot法分析过表达HSP70对HBV复制中间体的影响;运用双萤光素酶报告系统检测过表达HSP70对HBV启动子活性的影响。结果:HBV复制显著抑制HSP70的m RNA水平。过表达HSP70抑制HBV复制中间体、3.5 kb m RNA以及核心蛋白的表达,同时抑制HBV核心启动子的活性。结论:HBV复制抑制HSP70的表达。过表达HSP70抑制HBV的复制。本研究结果表明,HSP70通过抑制核心启动子的活性抑制HBV的复制。; 周洪钟刘波任吉华陶娜娜陈祥李宛蔚陈娟; 关键词：热休克蛋白70 乙型肝炎病毒

沉默信息调节因子1(SIRT1)在HBV复制调控中的作用及机制研究: 背景：乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染是导致急慢性肝炎的关键因素，并可逐步发展为肝硬化和肝癌，每年约有100万人死于 HBV相关的各种终末期疾病，HBV感染已成为威胁人类健康的重要病因。因...; 任吉华; 关键词：乙型肝炎病毒沉默信息调节因子动物模型

沉默信息调节因子6(SIRT6)在原发性肝细胞癌(HCC)中的作用机制研究: 目的研究沉默信息调节因子2相关酶6(sirtuin6,SIRT6)对肝癌细胞生长的影响,并探索SIRT6调控肝癌细胞生长的分子机制。方法运用Real-time PCR、western blot、免疫组织化学分析SIRT6...; 冉龙宽李宛蔚宋春丽任吉华陈祥陶娜娜黄爱龙陈娟; 关键词：肝癌凋亡; 文献传递

SlRT3在HBV感染诱导的氧化应激反应中的作用及其对HBV复制的影响: 目的研究Sirtuin 3(SIRT3)在HBV感染诱导的氧化应激反应中的作用及其对HBV复制的影响,并探讨SIRT3调控HBV复制的分子机制.方法运用细胞免疫荧光技术验证HBV感染对细胞氧化应激反应的影响;Real...; 任吉华宋春丽李宛蔚冉龙宽陶娜娜陈祥黄爱龙陈娟; 关键词：HBV

非瑟素对HBV复制诱导的细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究: 2017年; 该文旨在研究sirtuin家族激活剂非瑟素(fisetin)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制导致的氧化损伤过程中的保护作用,并初步分析其分子机制。在Huh-7细胞中转染HBV表达质粒p CH9/3091并同时用N-乙酰半胱氨酸(n-acetyl-cysteine,NAC)处理细胞,Mito SOX?Red试剂检测细胞线粒体活性氧类(reactive oxygen species,ROS)水平,DCFH-DA探针法检测细胞内ROS水平,丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA水平,Western blot检测细胞超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)和SOD2的蛋白质水平。Huh-7细胞转染p CH9/3091的同时用非瑟素处理细胞,并检测细胞ROS、MDA、SOD1和SOD2蛋白质水平;Huh-7细胞转染p CH9/3091并用非瑟素处理细胞或同时沉默SOD2,用细胞免疫荧光及Western blot检测γ-H2AX(Phosphorylated Histone H2AX)的形成;MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt]实验分析氧化应激条件下非瑟素对HBV复制细胞活率的影响;进一步应用Western blot检测丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族磷酸化水平及总蛋白水平的变化。结果显示,HBV复制明显增加细胞线粒体和细胞内ROS水平和细胞MDA水平,并且也明显降低SOD1和SOD2水平。NAC处理HBV复制细胞后,线粒体内和细胞内的ROS和细胞MDA水平明显减少。非瑟素处理HBV复制细胞后,HBV复制对细胞内ROS和MDA水平促进作用明显减弱;此外,HBV复制对细胞内SOD1和SOD2水平的抑制作用也明显减弱。非瑟素处理HBV复制细胞后,HBV复制对γ-H2AX形成的促进作用明显减弱,而SOD2沉默则减弱了非瑟素对HBV复制细胞中γ-H2AX形成的抑制作用。在氧化应激条件下,非瑟素明显减弱HBV复制对细胞活力的影响,SOD2沉默则减弱了非瑟素对HBV复制细胞活率的影响。非瑟素拮抗HBV表达对JNK(c-Jun N-terminal kinase)和p38(p38 kinase)磷酸化的促进作用,而SOD2沉默减弱了非瑟素; 刘波程胜桃余海波任放陶娜娜任吉华; 关键词：乙型肝炎病毒

SIRT6基因沉默对人肝癌细胞凋亡的影响及其机制研究被引量：3: 2016年; 该文旨在探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,SIRT6)基因沉默对人肝癌细胞凋亡的影响及其机制。逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测人肝癌细胞系(SK-Hep-1、Huh-7、PLC/PRF/5、Hep G2)和永生化肝细胞系(MIHA)中SIRT6基因的表达水平;利用慢病毒介导的sh RNA干扰技术靶向沉默SIRT6的表达,并通过RT-PCR和Western blot验证其沉默效率;流式细胞术检测SIRT6基因沉默对人肝癌细胞凋亡的影响,进一步应用RT-PCR和Western blot检测SIRT6基因沉默对凋亡抑制蛋白基因(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族m RNA和蛋白质水平的影响;最后,应用流式细胞术分析X连锁凋亡抑制蛋白基因(X-linked inhibitor of apoptosis protein gene,XIAP)在SIRT6基因沉默诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。结果显示,SIRT6基因在人肝癌细胞系中表达上调;慢病毒介导的sh RNA能抑制人肝癌细胞中SIRT6基因的表达;沉默SIRT6基因的表达能诱导人肝癌细胞凋亡,并降低XIAP的m RNA和蛋白质水平;过表达XIAP能逆转SIRT6基因沉默所诱导的人肝癌细胞凋亡。该研究结果提示,SIRT6基因沉默可能通过调节XIAP的表达从而诱导人肝癌细胞凋亡。; 周洪钟陶娜娜陈祥任吉华李宛蔚刘波陈娟; 关键词：肝细胞癌 XIAP 细胞凋亡

Sirtuin1(SIRT1)通过转录因子AP-1调节HBV的转录和复制: 目的研究Sirtuin 1(SIRT1)在乙型肝炎病毒(HBV)复制中的作用,并探讨SIRT1在调节HBV复制过程中可能的机制。方法运用Real-time PCR、western-blot分析SIRT1在HBV复制细胞中...; 任吉华陶颖宋春丽李宛蔚冉龙宽陈娟

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