任洌
- 作品数：1 被引量：7H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：化学工程更多>>
- 糖多孢红霉菌λC3-SRR突变体的构建及其产物鉴定被引量：7
- 2004年
- 目的 :构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体 ,探讨SRR氨基酸相应 9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B的关系。方法 :以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板 ,用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应 9核苷酸的KR6酶域DNA片段 ,并克隆到载体pWHM3上 ,构建了同源重组质粒pWHM3 SRR。将pWHM3 SRR质粒转化糖多孢红霉菌λC3菌株 ,筛选出质粒整合到染色体上红霉素合成基因位点的整合体λC3 A、B和C。λC3 A在无硫链丝菌肽 (Thio)的R3M斜面上生长两代后 ,制备的原生质体涂R3M平皿 ,挑选出不能在含Thio的R3M斜面上生长、发酵液也无抑制枯草芽孢杆菌活性的突变菌株λC3 SRR。结果 :部分基因组DNA序列分析表明 ,糖多孢红霉菌λC3 SRR染色体上SRR氨基酸相应 9核苷酸已经敲除 ,ZabspecFab质谱分析证实λC3 SRR菌株合成了 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B。结论 :糖多孢红霉菌KR6酶域SRR氨基酸相应 9核苷酸敲除的λC3 SRR突变菌株可以合成 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B ,SRR为KR6酶域上NADPH 2′ 磷酸结合位点。
- 李凌凌张部昌张华任洌刘传暄马清钧
- 关键词：糖多孢红霉菌聚酮合成酶同源重组
