任玉珊
- 作品数：17 被引量：22H指数：3
- 供职机构：三峡大学医学院分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省教育厅自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多胺类似物及其抗肿瘤作用机制被引量：3
- 2009年
- 多胺类似物是一类研发中的新型抗肿瘤药物。在肿瘤细胞内,多胺类似物通过干扰正常多胺代谢耗竭肿瘤快速生长必需的多胺成分、影响DNA结构和功能、调节肿瘤相关基因表达水平、改变细胞周期和诱导细胞凋亡等途径发挥抗肿瘤效应。本文就多胺类似物及其抗肿瘤的作用机制作一综述。
- 任玉珊韩钰王艳林
- 关键词：胺类肿瘤抗肿瘤药多胺类似物
- 用SiRNA沉默SSAT基因表达降低人A549肺癌细胞对抗癌多胺类似物CPENSpm的敏感性被引量：1
- 2010年
- 目的探讨精脒/精胺乙酰转移酶(Spermidine/Spermine N1-Acetyltransferase,SSAT)基因表达沉默对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用SiRNA技术获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法用于分析SSAT基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA片段化分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株。用10μmol·L-1CPENSpm处理对照细胞24h可使SSAT mRNA水平升高23倍,但在SSAT表达沉默的细胞中CPENSpm无此影响。细胞增殖实验发现,SSAT表达沉默的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性显著性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,10μmol·L-1CPENSpm处理细胞48h导致对照细胞出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象和亚凋亡峰,但在SSAT表达沉默的细胞株中,CPENSpm诱导细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SSAT高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。
- 韩钰任玉珊曹春雨任东明周永芹王艳林
- 关键词：多胺类似物肺癌细胞株药物敏感性
- 重组人多胺氧化酶的原核表达及抗体制备
- 2008年
- 目的:采用基因重组技术获得有酶活性的重组人多胺氧化酶(polyamine oxidase,PAO)并制备兔抗人多胺氧化酶多克隆抗体。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人多胺氧化酶cDNA,构建PAO原核表达质粒pET-15b/PAO并转化E.coli的BL21(DE3)菌株。IPTG诱导表达的重组PAO经Ni-NTA亲和层析纯化和透析复性后,化学荧光法测定酶活性。用制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化的重组人PAO蛋白,皮内接种日本大耳白兔以制备多克隆抗体。以ELISA、Western blot和免疫细胞化学法分别检测兔血清中抗体滴度和抗原特异性。结果:纯化并透析复性后的重组人PAO蛋白具备快速氧化特异性底物的酶活性。用此基因重组蛋白制备的抗体具有高抗体滴度和针对人PAO的特异性。结论:本试验建立了人PAO原核表达、纯化系统,获得了有酶活性的高纯度人PAO蛋白并成功制备了兔抗人PAO的多克隆抗体,为以PAO为靶点的抗肿瘤基础和临床研究提供了有力的研究工具。
- 曹春雨王艳林韩钰任玉珊刘朝奇
- 关键词：多胺氧化酶原核表达抗体制备
- 细胞膜上稳定表达融合蛋白CRT/vGPCR A549细胞株的建立
- 2010年
- 目的将人钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因与病毒G蛋白偶联受体(virus G-protein couple receptor,vGPCR)基因进行基因重组,用此重组基因建立细胞膜上稳定高表达CRT/vGPCR融合蛋白的人肺癌A549细胞株。方法从pSG5-vGPCR质粒中获得全长vGPCR基因片段并与CRT全长编码序列的3′端连接形成融合基因,然后将融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。用此质粒转染人A549肺癌细胞,通过G418筛选建立稳定转染的A549细胞株,用RT-PCR检测重组融合基因的表达,用细胞免疫荧光分析鉴定融合蛋白的表达及其在细胞膜上的定位。结果成功获得重组融合质粒pcDNA3.1(+)-CRT/vGPCR,经DNA序列测定证实融合基因两阅读框(ORF)对接无误。将上述质粒转染A549细胞后,建立了稳定转染CRT/vGPCR的A549细胞株,融合基因在A549细胞中表达并定位到细胞膜上。结论通过与CRT基因融合重组,具有膜定位能力的vGPCR能将CRT蛋白高效包被到肿瘤细胞膜上。
- 秦烨韩钰任玉珊王艳林
- 关键词：A549细胞株
- 二氟甲基鸟氨酸对T淋巴瘤Jurkat细胞生长的影响被引量：3
- 2010年
- 目的研究二氟甲基鸟氨酸(difluromethylornithine,DFMO)对人T淋巴瘤Jurkat细胞的影响及其作用机制,为探讨DFMO能否用于治疗人白血病提供实验依据。方法DFMO(0～10mmol/L)处理人T淋巴瘤Jurkat细胞24～72h后,MTS法检测细胞的存活率,化学分析法检测精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)和乙酰多胺氧化酶(acetylpolyamine oxidase,APAO)活性,DNA片段化分析检测细胞凋亡,荧光染料法检测细胞线粒体膜电位变化,Western blot法检测细胞内Bax含量,分光光度法检测caspase-3酶活性。结果DFMO处理细胞能显著抑制Jurkat细胞的生长(P<0.01),抑制率随药物浓度的增加和作用时间的延长而加大,DFMO浓度为10mmol/L时,24h抑制率为33%,48h抑制率为38%,72h抑制率为49%。DFMO处理可导致Jurkat细胞DNA片段化,促进Bax由细胞质向线粒体转移,细胞内caspase-3活性增加(增加46%,P<0.05),并伴有线粒体膜电位的显著降低,DFMO浓液为2和5mmol/L时,分别降低29%和53%(P<0.01)。DFMO还能诱导细胞内SMO活性(增加1.1倍,P<0.05)但对APAO的活性无诱导性影响。结论DFMO对人T淋巴瘤Jurkat细胞具有生长抑制和诱导凋亡的作用。
- 任玉珊韩钰曹春雨王艳林
- 关键词：二氟甲基鸟氨酸T淋巴细胞JURKAT细胞细胞凋亡生长抑制物
- 鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对肝癌细胞HepG2的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)基因反义RNA对肝癌细胞HepG2的影响。方法:构建ODC反义RNA的真核表达质粒,将此质粒转染HepG2细胞后,RT-PCR和Western印迹法筛选ODC表达抑制的细胞株。以此细胞株为模型,分析ODC反义RNA对细胞生长、细胞周期和对抗癌药物米托蒽醌敏感性的影响。结果:成功构建ODC反义RNA真核表达载体并获得稳定低表达ODC的肝癌细胞株Hr1。与对照细胞相比,ODC低表达引起HepG2细胞生长抑制,72h生长抑制率为31%;流式细胞术检测细胞周期发现,Hr1G1期细胞数(56.2%)显著性高于对照(48.2%),而S期细胞(25.5%)则显著性低于对照(34.9%),提示ODC低表达导致G1期阻滞;用米托蒽醌(100μg/L)处理两种细胞后发现,Hr1对药物的敏感性显著性高于对照细胞,处理48h后药物对HepG2和Hr1的抑制率分别是33.4%和60.6%,72h后的抑制率分别是60.8%和83.8%。结论:ODC反义RNA能抑制肝癌HepG2细胞生长,在抗肿瘤治疗中具有潜在的临应用价值。
- 任玉珊韩钰秦烨王艳林
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶肝癌细胞反义RNA
- 鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对淋巴瘤细胞Jurkat生长的影响被引量：1
- 2010年
- 探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)反义RNA是否对人淋巴瘤细胞Jurkat的生长具有抑制作用。含反义RNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Rodc用脂质体转染Jurkat细胞,G418筛选ODC表达抑制的细胞株,MTS法分析细胞增殖,Western blotting检测细胞中ODC蛋白表达水平,半定量RT-PCR检测细胞中ODC mRNA含量,流式细胞术检测细胞周期的变化,DNA片段化分析细胞凋亡。结果显示,成功获得ODC表达抑制的淋巴瘤细胞株J/o,ODC反义RNA转染细胞后,引起Jurkat细胞生长缓慢和S/G2细胞周期停滞,细胞对抗癌药物DFMO敏感性显著增加。由此证明,ODC反义RNA能抑制人T淋巴瘤Jurkat细胞的生长,具有治疗人白血病的潜在应用价值。
- 任玉珊韩钰蔡富强王艳林
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶JURKAT细胞反义RNA
- 小鼠钙网蛋白的克隆与原核表达被引量：3
- 2008年
- 目的:克隆小鼠钙网蛋白(CRT)并在E.coli中原核表达和纯化.方法:采用RT-PCR法从昆明鼠肝总RNA中克隆小鼠钙CRTcDNA,构建CRT原核表达质粒(pET-15b/CRT)并转化E.coli的Rossetta(DE3)菌株.IPTG诱导后,表达蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,然后透析复性.分别用SDS-PAGE和Westernblot法鉴定CRT的表达和纯化.结果:从昆明鼠肝总RNA中成功克隆获得小鼠CRTcDNA,该cDNA序列被成功克隆入pET-15b原核表达载体.DNA测序表明,重组质粒pET-15b/CRT构建正确.转化pET-15b/CRT的E.coli,Rossetta(DE3)能够诱导性表达重组小鼠CRT蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化.结论:成功克隆昆明小鼠CRTcDNA并建立了小鼠CRT原核表达和纯化的实验方法,为后续的CRT蛋白功能研究奠定了基础.
- 曹春雨王艳林任玉珊韩钰
- 关键词：钙网蛋白原核表达蛋白纯化小鼠
- 重组人精胺氧化酶的原核表达及抗体制备
- 目的以基因重组技术原核表达和纯化人精胺氧化酶蛋白,制备抗 SMO 抗体以用于抗肿瘤基础和临床研究。方法用 RT-PCR 扩增技术从人肺癌细胞株 A549中获得精胺氧化酶 cDNA, 并克隆到原核表达质粒 pET-15b ...
- 曹春雨韩钰任玉珊王艳林
- 关键词：原核表达抗体
- 文献传递
- 高效液相色谱法测定细胞裂解液中多胺的含量
- 2010年
- 目的:建立肿瘤细胞样品中多胺的HPLC测定法。方法:取处理好的肿瘤细胞裂解液样品,以1,7-庚二胺(DAH)为内标,经苯甲酰氯柱前衍生,乙醚提取衍生物。HPLC分析条件:LunaC18柱(150mm×4.6mm,5μm)为固定相,乙腈-水(62∶38)为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254nm。结果:多胺中的腐胺、精脒和精胺能较好分离。腐胺的检测限为35.36μg.L-1,精脒为88.90μg.L-1,精胺为77.74μg.L-1。多胺各对照品中,腐胺在1.04～3.12mg.L-1之间,精脒在2.54～7.62mg·mL-1之间,精胺在2.99～8.97mg·mL-1之间,其线性关系均良好,相关系数(r)均大于0.999。腐胺、精脒和精胺平均加样回收率分别为96.84%,92.70%,90.05%。结论:建立了测定细胞多胺含量的HPLC方法,该方法简便、灵敏,能够满足肿瘤细胞样品中多胺含量测定的需要。
- 刘小琴何毓敏任玉珊蔡富强王艳林
- 关键词：高效液相色谱法多胺
