刘曼丽
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金广西医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多西环素对体外培养的牛角膜肌成纤维细胞增生的影响被引量：1
- 2013年
- 背景 多西环素是一种金属离子螯合剂和广谱抗生素,常用于眼表疾病的治疗. 目的 研究多西环素对体外培养的牛角膜肌成纤维细胞增生的影响,并探讨其作用机制.方法 收集6只新鲜牛角膜,分别用基础培养液配制的1.0g/L及2.0 g/L Ⅰ型胶原酶对牛角膜基质层进行二步法消化分离,制成细胞悬液后转入培养瓶中用RPMI-1640培养液（含质量分数10％胎牛血清）进行培养.取生长良好的细胞进行波形蛋白免疫细胞化学染色以确定所培养的细胞来自角膜基质层,在细胞传代培养的同时进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光细胞化学染色,呈阳性表现的细胞为角膜肌成纤维细胞.细胞培养36 h后培养液中不加入任何药物者为阴性对照组,阳性对照组细胞培养液中加入120 mg/L地塞米松,另分别在培养液中加入10、20、40、60、80 mg/L多西环素作为药物干预组.采用MTT比色法、流式细胞术测定各组干预24 h和48 h后角膜肌成纤维细胞的增生情况及细胞周期各时相的分布. 结果 体外分离培养的牛角膜肌成纤维细胞生长良好,免疫组织化学染色显示波形蛋白和α-SMA呈阳性反应,证实为角膜肌成纤维细胞.MTT比色法检测显示,随着多西环素质量浓度的增加,活性角膜肌成纤维细胞的数量逐渐下降,差异有统计学意义（F质量浓度=1233.778,P＜0.001）；随着药物作用时间的延长,活性角膜肌成纤维细胞的数量逐渐下降,差异有统计学意义（F时间=227.564,P＜0.001）；且两因素间的交互效应亦有统计学意义（F交互作用=51.656,P＜0.001）.流式细胞术细胞周期分析显示,10、20、40、60、80 mg/L多西环素作用24 h,G0-G1期角膜肌成纤维细胞率分别为82.85％、84.36％、85.18％、87.12％、89.31％,明显高于阴性对照组的63.89％,差异均有统计学意义（P＜0.05）,40 mg/L多西环素组G0-G1期角膜肌成纤维细胞率接近阳性对照组；10、20、
- 刘曼丽邹文进黄明汉曾静付馨余王松
- 关键词：细胞增生多西环素
- 多西环素对体外培养的牛角膜肌成纤维细胞核仁组成区嗜银蛋白及平滑肌肌动蛋白表达的抑制作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨多西环素对角膜肌成纤维细胞核仁组成区嗜银蛋白（AgNOR）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的抑制作用。方法实验研究。分别用基础培养液配制的1．0及2．0g／LⅠ型胶原酶对牛角膜基质层进行二步消化分离，制成细胞悬液后转入培养瓶中用RPMI-1640培养液（含10％胎牛血清）培养。取生长良好的细胞进行波形蛋白免疫细胞化学染色和免疫荧光细胞化学染色。选用生长良好的牛角膜肌成纤维细胞分成3个组：阴性对照组（无药物干预），地塞米松组（地塞米松120mg／L）及各浓度梯度（10、20、40、60及80mg／L）多西环素组，每组30例。指标测定：采用AgNOR及α-SMA免疫荧光细胞化学染色等技术测定各实验组在对角膜肌成纤维细胞干预24和48h后，对细胞DNA复制及α-SMA合成的影响。各组间比较采用单因素方差分析，同一药物浓度下两组间比较采用两样本均数比较t检验。结果在体外成功分离培养牛角膜肌成纤维细胞，显微镜下观察及α-SMA免疫荧光细胞化学染色后证实所培养的细胞为角膜肌成纤维细胞。细胞被干预24h后，阴性对照组AgNOR颗粒数为（6．40±0．62）个，AgNOR颗粒面积为（34．80±2．36）μm。；60mg／L多西环素组AgNOR颗粒数（2．23±0．43）个，AgNOR颗粒面积为（19．91±2．15）μm2。细胞被干预48h后，阴性对照组AgNOR颗粒数为（7．27±0．64）个，AgNOR颗粒面积为（36．27±1．99）Ixm。；60mg／L多西环素组AgNOR颗粒数为（2．80±0．76）个，AgNOR颗粒面积为（13．75±2．09）μm2。差异有统计学意义（干预24h：F=252．55，202．16；P〈0．05；干预48h：F：169．38，853．23；P〈0．05；在同一浓度干预下：江6．98，11．62；P〈0．05）。当多西环素浓度达60mg／L时作用效果与120mg／L地塞米松相当，差异无统计学意义（t=1．182，0．213；P〉0．05）。α-SMA免疫荧光细胞化�
- 刘曼丽邹文进黄明汉赵静博付馨余王松
- 关键词：角膜肌纤维母细胞多西环素核仁组成区肌动蛋白类细胞
- 胶原酶二步消化法分离培养牛角膜基质成纤维细胞被引量：6
- 2012年
- 背景:获得纯度高、活性强、生物学特性更接近体内状态的角膜基质成纤维细胞是角膜损伤后修复研究的基础。目的:探索体外培养牛角膜基质成纤维细胞的新方法。方法:用Ⅰ型胶原酶对牛角膜基质层进行二步消化分离后制成细胞悬液转入培养瓶中培养,取生长良好的细胞进行传代养。采用锥虫蓝染色检测消化分离后细胞即刻存活率;倒置相差显微镜动态观察细胞的生长状态;波形蛋白免疫组织化染色鉴定角膜成纤维细胞;MTT法检测细胞增殖情况;取处于对数生长期的细胞,绘制细胞生长曲线并计算细胞群倍增间。结果与结论:在体外成功分离培养牛角膜基质成纤维细胞,显微镜下观察及波形蛋白免疫组织化学染色后证实所培养的胞为角膜基质成纤维细胞。锥虫蓝染色,细胞即刻成活率达93.5%。细胞生长曲线近似"S"形,其群体倍增时间38.70h。说明二步消化法细胞培养技术简便、经济、高效,为原代培养角膜基质成纤维细胞提供了有效渠道。
- 刘曼丽邹文进黄明汉曾静
- 关键词：角膜成纤维细胞细胞原代培养细胞形态消化法
- 多西环素与地塞米松抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管的对比研究被引量：3
- 2013年
- 目的对比多西环素、地塞米松对碱烧伤大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法健康SD大鼠48只,随机分为对照组、多西环素组、地塞米松组,每组各16只。建立角膜碱烧伤模型后,分别予眼液溶媒、5g·L-1多西环素眼液、1g·L-1地塞米松眼液点眼,每天4次。于碱烧伤后3d、7d、14d、21d裂隙灯显微镜下观察,计算炎症指数和角膜新生血管面积。结果 3d、7d多西环素组、地塞米松组结膜充血、角膜水肿较对照组轻,炎症指数多西环素组分别为0.45±0.03、0.22±0.14,地塞米松组分别为0.50±0.14、0.22±0.07,炎症指数均明显低于对照组(均为P<0.05),多西环素组、地塞米松组间差异无统计学意义(P>0.05);14d、21d地塞米松组炎症指数分别为0.44±0.30、0.47±0.19,显著高于多西环素组(0.04±0.06、0.19±0.11),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。多西环素组、地塞米松组各时间点角膜新生血管面积小于对照组(均为P<0.05),3d、7d地塞米松组角膜新生血管面积小于多西环素组(均为P<0.05),14d、21d两组比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。地塞米松组前房出血12.5%,对照组为43.8%,多西环素组为6.3%。对照组角膜溃疡5眼,地塞米松组为8眼,多西环素组为1眼。除多西环素组无一眼发生眼内炎外,余两组均有眼内炎发生。结论碱烧伤后短期内地塞米松抑制大鼠角膜新生血管的作用强于多西环素,但长期效果后两者无显著差异。
- 邹文进刘祖国刘曼丽付馨余赵静博王松黄海
- 关键词：多西环素地塞米松碱烧伤角膜新生血管
- 眼表化学伤28例的治疗体会被引量：1
- 2012年
- 目的观察羊膜移植、睑内翻矫正、角膜移植等综合疗法治疗中重度眼化学伤的临床疗效。方法对28例(33眼)中重度眼化学伤患者,早期给予抗感染、人工泪液、羊膜移植等综合治疗,并对晚期并发症给予相应治疗。结果 28例(33眼)中,治疗后视力≥0.3者2眼,视力0.1～0.3者3眼,因眼球大范围穿孔、眼内容脱出行眼内容物剜除术1眼,无光感1眼,其余26眼视力在光感和指数之间。羊膜移植术后角膜完成上皮化31眼,1眼因角膜溶解、眼球萎缩,1例因角膜穿孔、眼内容物脱出摘除眼球而未上皮化。并发症:31眼并发角膜混浊及角膜新生血管;5眼行角膜移植术后视力提高;并发假性胬肉18眼;并发白内障14眼;继发性青光眼4眼;并发眼睑内翻、倒睫8眼,其中7眼行睑缘切开术、睑内翻矫正术后好转;睑球粘连7眼,行睑球粘连分离术联合羊膜移植术后好转。眼睑皮肤瘢痕导致轻度眼睑外翻2眼。结论眼表化学伤施行羊膜移植可以促进眼表上皮化,对改善患者视力有益;及时矫正眼睑畸形可以重建眼表,后期角膜移植可以提高视力。
- 邹文进刘曼丽付馨余赵静博
- 关键词：眼化学伤羊膜移植睑内翻角膜移植
