以东农47和α′蛋白亚基缺失型大豆为原料提取大豆分离蛋白(soy protein isolates,SPI),通过十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfonate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)技术确定其亚基缺失型,然后对微观形态、溶解度、表面疏水性和流变性质进行分析,探究β-伴大豆球蛋白(7S,β-conglycinin)中α′亚基对大豆分离蛋白微观形态及水溶液特性的影响。结果表明:α′亚基缺失型SPI的微观形态为颗粒较小且分布均匀的圆形聚合物,其水溶液的溶解度和表面疏水性相对更大;2种SPI的剪切速率对黏度的影响较小,剪切应力随剪切速率的增大而增大,但剪切应力与剪切速率之间为非线性增长关系,2种不同SPI水溶液均表现为非牛顿液体。
大豆疫霉根腐病是由大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)引起的危害大豆生长的严重病害。课题组前期研究表明具有P-loop结构域的GmPR10(Gene Bank accession no.FJ960440)和具有P-loop、Bet v1结构域的Gly m 4l(Gene Bank accession no.HQ913577.1)抑制大豆疫霉菌生长,并且过表达GmPR10和Gly m 4l的转基因大豆植株可以提高对大豆疫霉根腐病的抗性。为研究GmPR10和Gly m 4l抑菌机理,本研究利用点突变技术,获得了GmPR10的P-loop结构域突变体(Gly48/Thr48和Gly^51/Arg^51)、Gly m 4l的P-loop结构域突变体(Gly^49/Ile^49和Lys^55/Pro^55)、GmPR10和Gly m 4l的P-loop结构域以及Gly m 4l的Bet v1结构域缺失突变体,并纯化回收相应突变体蛋白,进行体外抑制大豆疫霉菌试验。结果表明,突变或缺失P-loop,Bet v1结构域的GmPR10和Gly m 4l失去了抑制大豆疫霉菌(Race 1)生长的能力,说明P-loop、Bet v 1结构域对GmPR10和Gly m 4l行使抑菌功能至关重要。
