刘美玲
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
- 供职机构：国家人口计生委科学技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- LM23调控细胞周期蛋白CDKs在大鼠精子发生过程中具有重要作用
- 目的：借助本研究室建立的活体LM23基因沉默大鼠动物模型，制备LM23蛋白的合成肽多克隆抗体和生物信息学等方法，研究LM23蛋白的功能。
方法：利用互联网公共信息数据库PROSITE，Protfun serve...
- 成毅明刘美玲贾孟春
- 关键词：基因沉默动物模型精子发生过程细胞周期蛋白
- 文献传递
- 小RNA分子与精子发生调控被引量：11
- 2011年
- 近来研究发现小RNA(small RNAs)可作为转录后及翻译水平上基因表达调节的重要调节因子,利用小RNA来阐明调节精子发生的分子机制取得了显著进展。这些小RNA主要分为3类,即小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)以及与piwi蛋白相互作用的RNA(piRNA)。在减数分裂和精子发生过程中,小RNA具有多种生物学功能,如利用siRNA体外转染或体内注射来敲低特定基因从而研究该基因在精子发生过程中的作用;miRNA可能参与精子发生中有丝、减数及后减数分裂阶段的基因表达调节;piRNA主要参与调节雄性生殖细胞减数及后减数分裂的过程,在精子发生中起抑制反转录转座子(retrotransposons)的作用。文章对小RNAs合成、作用机制、功能及展望等最新进展进行了综述。
- 孟雅楠孟丽军宋亚娟刘美玲张秀军
- 关键词：精子发生减数分裂基因表达调控
- Spyda基因过表达转基因小鼠品系的建立被引量：1
- 2014年
- 目的建立Spyda基因过表达转基因小鼠品系用于深入研究Spyda基因的功能。方法利用Gateway技术构建Spyda表达载体,通过DNA显微注射的方式获得Spyda基因过表达的首建鼠。首建鼠与野生型鼠杂交,所得子代中的阳性鼠同窝交配,已传3代以后的阳性小鼠经SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测外源基因的起始模板量,通过与杂合子比较来预测小鼠的基因型,再用传统育种方式验证SYBR Green实时荧光定量PCR的结果。结果获得7只首建鼠,通过与野生型鼠杂交获得阳性子代,进行同窝交配,传至第3代,经实时荧光定量PCR方法筛选出4只纯合子的小鼠,经测交验证,其与正常小鼠交配所生的后代均为阳性,证明实时定量PCR的结果是正确的。建立了2个独立的Spyda转基因小鼠纯合子品系。结论建立了稳定遗传的纯合子Spyda基因过表达转基因小鼠品系,可作为工具鼠进一步深入研究Spyda基因的功能。
- 张瑶楠丁宁石心泉贾孟春刘美玲
- 关键词：转基因小鼠实时荧光定量PCR纯合子
- LM23调控细胞周期蛋白CDKs在大鼠精子发生过程中具有重要作用
- 2009年
- 目的借助本研究室建立的活体LM23基因沉默大鼠动物模型,制备LM23蛋白的合成肽多克隆抗体和生物信息学等方法,研究LM23蛋白的功能。方法利用互联网公共信息数据库PROSITE,Protfun server,PSORT server和BLAST等生物分析工具软件对LM23进行生物信息学分析。
- 成毅明刘美玲贾孟春
- 关键词：细胞周期蛋白质依赖激酶类
- LM23基因沉默引起大鼠睾丸生精细胞凋亡被引量：3
- 2010年
- 目的研究LM23基因敲低后生精细胞的凋亡状况及与凋亡相关基因表达改变。方法用TUNEL方法检测睾丸细胞的凋亡情况,用大鼠全基因组表达谱芯片检测LM23基因敲低后凋亡相关基因的表达改变。结果 TUNEL结果显示,LM23基因敲低侧大鼠睾丸生精小管内大量生精细胞发生凋亡。大鼠全基因组表达谱芯片分析结果显示,许多促凋亡基因如Bcl-2家族的促凋亡基因表达上调,而抗凋亡基因如Faf1和Zfp91基因的表达明显下调。结论敲低大鼠的LM23基因,启动了Bcl-2家族介导的线粒体凋亡途径,引发了生精细胞发生大量凋亡。
- 石心泉贾孟春刘美玲
- 关键词：生精细胞细胞凋亡CASPASE-3
- 大鼠睾丸特异表达基因Ube1的分离鉴定及生物学特征(英文)被引量：3
- 2008年
- 本研究采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)和cDNA快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从大鼠A型精原细胞和粗线期精母细胞中成功克隆出大鼠泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme)基因Ube1(GenBank登录号EF690356)。该基因序列全长3433bp,其中开放阅读框有3171bp,编码一个含1057个氨基酸的蛋白质。Blast比对显示,Ube1与小鼠泛素激活酶基因Ube1y1的同源性为93%,与人泛素激活酶基因UBE1的同源性为82%。Ube1基因编码的蛋白质含泛素激活酶信号位点和泛素激活酶活化位点,这些位点也存在于人类和小鼠的泛素激活酶1中。RT-PCR分析显示,Ub e1在睾丸中大量表达,而在心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脑、卵巢中没有表达。荧光定量PCR分析不同生精细胞中Ube1的表达,显示Ube1在A型精原细胞中大量表达,在粗线期精母细胞、圆形精子细胞和支持细胞中微弱表达。以上结果提示,Ube1是大鼠睾丸特异表达基因,可能通过参与泛素/蛋白酶体途径来影响精子发生。
- 杜颖刘美玲贾孟春
- 关键词：精子发生抑制性消减杂交逆转录-聚合酶链反应
- 兔抗大鼠LM23蛋白合成肽多克隆抗体的制备与初步应用被引量：2
- 2009年
- 目的制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体,对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用。方法利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列。应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1～20和第274～291个氨基酸多肽(接近C端),经C18的RP-HPLC纯化后,通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体。用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价。通过Western blot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位。结果化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1～20,第274～291个氨基酸多肽,纯化后两条多肽纯度都达到90%以上,符合免疫用抗原标准。将多肽与KLH交联,用于免疫动物。经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1:64 000和1:128 000。应用大鼠睾丸组织切片进行LM23-18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核。Western blot研究证实,LM23-18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子量(Mr)约为36 kD的LM23蛋白。结论所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Western blot及免疫组化研究。LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持。
- 成毅明刘美玲石心泉王介东贾孟春
- 关键词：合成肽精子发生多克隆抗体
- 精子发生过程中基因表达转录水平的调控被引量：8
- 2011年
- 哺乳动物精子发生于睾丸的生精小管,是一个高度复杂的细胞分裂和分化过程,涉及到错综复杂的基因表达调控过程,包括转录和转录后水平的调控,其中任何一个环节出错都可能导致雄性不育。因此,揭示精子发生过程中的分子调控机理,对发现新的男性避孕方法及治疗不育症有重要意义。文章重点综述了近年有关雄激素及其受体、雌激素及其受体、转录因子和染色质相关因子在精子发生转录水平调控的研究进展。
- 张秀军刘美玲贾孟春
- 关键词：精子发生转录调控转录因子
- LM23基因降调激活Fas-FasL和线粒体通路使精母细胞凋亡被引量：3
- 2011年
- 目的通过LM23基因RNA干扰(RNAi)动物模型,探讨LM23基因降调对大鼠生精细胞凋亡的影响。方法使用本实验室建立的LM23基因RNAi大鼠动物模型,分别通过苏木精-伊红染色(HE)和原位末端标记方法(TUNEL)检测LM23基因降调后生精细胞的凋亡发生情况;基因芯片技术,分析LM23基因降调后凋亡相关基因的差异表达;免疫组织化学技术检测LM23基因降调后caspase3蛋白分子在生精细胞中的表达。结果 TUNEL结果显示,LM23基因降调后大量精母细胞发生凋亡;基因芯片分析结果,LM23基因降调后Fas-FasL信号转导通路和线粒体信号转导通路被激活;免疫组织化学技术发现,LM23基因降调后,caspase3蛋白分子在大鼠睾丸精母细胞中的表达量显著增加。结论 LM23基因降调后,可能激活Fas-FasL信号转导通路和线粒体信号转导通路,从而导致大量精母细胞发生凋亡。
- 成毅明刘美玲王介东贾孟春
- 关键词：生精细胞凋亡
