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刘铖: 作品数：10 被引量：15H指数：2; 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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脑红蛋白重组腺病毒表达载体的构建与鉴定: 2006年; 目的:为进一步研究脑红蛋白(NGB)的生理功能并为基因治疗缺血性脑损伤提供有效的表达载体,应用细菌内同源重组方法分别构建含NGB及绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒表达载体,并对其进行鉴定。方法:用电转方法将腺病毒基因组质粒pAdEasy-1导入B J5183细菌,制备B J5183-pAdEasy-1细菌,再以后者作为电感受态细菌,与线性化质粒pShuttle-CMV-NGB进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAdEasy-NGB,转染293细胞,制备含脑红蛋白基因的重组腺病毒。结果:通过PCR、序列测定和W estern印迹杂交鉴定,确认该重组腺病毒表达载体可正确表达脑红蛋白。结论:成功地构建了表达NGB基因的重组腺病毒载体,为深入开展脑红蛋白的功能研究以及用于缺血性脑损伤疾病的基因治疗奠定了基础。; 刘铖高艳秦树桐文圣梅王立生张成岗; 关键词：神经系统疾病脑红蛋白腺病毒科腺病毒载体基因表达基因疗法

肝细胞生长因子延长原代培养大鼠脊髓神经元的生存时间被引量：1: 2006年; 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对原代培养脊髓神经元的保护作用。方法原代培养脊髓神经元转染不同滴度的绿色荧光蛋白或肝细胞生长因子重组腺病毒(Ad-GFP or Ad-HGF),用流式细胞仪检测转染率,PI-Hoechst双染色观察神经元生长状况。用ELISA、中性红、MTT和NSE-ELISA等方法分别检测Ad-HGF转染脊髓神经元后HGF的表达,以及HGF对神经元的保护和迁移作用。结果在转染复数(MO I)为50时,Ad-GFP可高效转染脊髓神经细胞,且细胞生长状态好。转染Ad-HGF后,HGF能有效表达,同时HGF作用后的神经元活性明显高于对照组(P<0.05)。并观察到HGF对脊髓神经元有明显促迁移作用。结论HGF对体外培养的脊髓神经元有保护和迁移作用。; 刘铖阙海萍靳继德刘少君吴祖泽; 关键词：肝细胞生长因子脊髓神经元基因治疗腺病毒载体迁移

肝细胞生长因子促进脊髓组织块离断神经突起再生的体外观察(英文): 2006年; 背景:肝细胞生长因子可促进体外培养的皮层神经细胞突起生长,在无血清条件下支持皮层神经元的存活,因此被认为是一种新发现的神经营养因子。目的:采用半固体培养基系统培养脊髓组织块,原位观察脊髓组织块神经突起再生及肝细胞生长因子对组织块神经突起再生的作用。设计:观察对比实验。单位:解放军军事医学科学院放射医学研究所实验血液学研究室。材料:实验于2004-08/2005-05在解放军军事医学科学院放射医学研究所实验血液学研究室和基础医学研究所神经生物学研究室完成。选用40只Wistar胚胎大鼠,孕期14-16d,由解放军军事医学科学院动物中心提供。鼠尾胶原取自成年250±50g雄性Wistar大鼠。方法:①用自备的鼠尾胶原制作半固体培养基系统,无菌条件下快速分离出孕期14-16d胚鼠的脊髓,剪成0.5-1.0mm3的小块,置于半固体培养基中作为原代培养,组织块生长5d时,将发出的神经突起在距离脊髓组织块约200mm处离断,并在离断远端将约2mm2大小的鼠尾胶去除,用2mL鼠尾胶原重新铺缺损区,待新铺鼠尾胶原固化后加液体培养基作为二代培养,在离断后0,1,6,12和24h,通过显微镜原位连续观察神经突起再生。②将突起离断后的培养基改为含0.5%的N3条件培养基,以加入10μg/L肝细胞生长因子作为实验组,加入含0.5%N3的无血清的DMEM培养基作为对照组,用每个组织块再生突起最长的3根突起长度均值代表这个组织块神经再生情况,每组分别观察12个组织块,24h后观察计算两组神经再生突起长度,比较两组神经突起再生情况。主要观察指标:①原位神经突起再生情况。②对照组与实验组神经突起再生状况比较。结果:①原位神经突起再生情况:刚离断时在离断部位两侧神经突起开始崩解,持续时间约1-2h,在离断近端延伸的距离约20mm。此后近端神经突起逐渐变得增粗、肿胀,神经突起�; 刘铖阙海萍舒翠莉刘少君吴祖泽; 关键词：脊髓肝细胞生长因子

肝刺激物促肝细胞增殖信号转导途径的初步研究: 2005年; 目的:探讨新生牛肝肝刺激物(hepaticstimulatorsubstance,HSS)促进SMMC7721肝癌细胞增殖的信号转导途径。方法:对新生牛肝进行多步分离,采用3H TdRDNA掺入法检测分离物的促增殖活性,从而获得具增殖刺激活性的HSS;Western印迹方法检测其对肝癌细胞MAPKThr202/Tyr204的磷酸化作用并检测其对SPK的激活作用。结果:经多步分离纯化,获得了活性较高的HSS粗提物,Western印迹法结果显示HSS粗提物能明显提高MAPK的磷酸化水平,并能激活细胞内的SPK活性。结论:HSS对细胞的增殖刺激可能是通过SPK和MAPK途径发挥作用。; 崔春萍石炳兴刘铖段海峰王立生王清明吴祖泽; 关键词：肝细胞增殖信号转导

携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒对大鼠局灶性脑缺血治疗的实验研究: 随着现代社会医疗条件的提高和老龄化趋势,脑血管病已成为危害人类生命的三大杀手之一,其中又以缺血性疾病最为多见,它的发生率和致残率都很高,给社会和家庭带来极大的负担。目前由于它发病急及神经元的非分裂性,临床治疗效果并不理想...; 靳继德刘铖哈小琴李元敏吴祖泽; 关键词：肝细胞生长因子重组腺病毒局灶性脑缺血; 文献传递

携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒对大鼠局灶性脑缺血治疗的实验研究被引量：8: 2003年; 目的 :观察携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒 (Ad_HGF)对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用。方法 :建立大鼠局灶性脑缺血动物模型。携带人肝细胞生长因子基因的穿梭质粒与携带复制缺陷的人血清 5型腺病毒基因组的质粒在 2 93细胞进行同源重组 ,构建Ad_HGF。携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒 (Ad_GFP)载体注射到局灶性缺血大鼠的缺血侧侧脑室 ,观察其在脑内的表达部位和持续时间。动物给药治疗后 3d ,取大脑 ,平均切成 4片 ,用TTC染色评价Ad_HGF对缺血的治疗效果。结果 :Ad_GFP仅在大鼠双侧侧脑室壁及脑室内的脉络膜细胞表达 ,表达持续两周左右 ;Ad_HGF治疗组动物大脑缺血区明显小于非治疗组动物 (P <0 .0 5 )。结论 :Ad_HGF能显著缩小大鼠局灶性脑缺血区。; 靳继德刘铖哈小琴吴祖泽; 关键词：腺病毒科重组腺病毒局灶性脑缺血

口服地衣芽孢杆菌对肠型放射病小鼠存活的影响被引量：1: 2008年; 大剂量意外全身照射或腹部局部放疗均可导致肠型放射病的发生。此类病例常因严重腹泻和继发感染而死亡，因此，控制肠源性感染已成为治疗肠型放射病的常规措施之一。然而，研究发现，肠管免疫的稳定有赖于其内天然存在的益生菌，口服广谱抗生素清除肠管益生菌反而会缩短肠型放射病动物的存活时间。; 侯冰刘铖李稚锋徐志伟杨超文高艳张成岗; 关键词：肠型放射病存活时间小鼠肠源性感染广谱抗生素局部放疗

HGF基因治疗下颌骨缺损修复的实验研究被引量：2: 2005年; 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对下颌骨缺损修复的促进作用。方法:新西兰大耳白兔30只,平均分为10组,在兔下颌骨体部造成直径5mm圆形贯通性骨缺损,其中5组将含有人HGF全长cDNA片段的表达型质粒-pUDKH按照每只250μg的剂量直接应用于骨缺损局部,另外5组应用等剂量空质粒pUDK作为对照。于手术后第2、4、6、8、12周分批处死两组动物,拍摄骨缺损区的X线片,并记录X线片的相对骨密度值,比较两组骨缺损愈合的情况。结果:手术后X线片示,HGF组优于对照组。两组间相对骨密度(RBD)差异显著(P<0.05)。手术后第2、4周HGF组高于对照组(P<0.05)熏第6、8、12周两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:pUDKH对下颌骨缺损的修复具有促进作用,HGF基因治疗有望用于促进骨缺损的修复。; 刘少华魏奉才哈小琴刘铖吴祖泽刘云生; 关键词：肝细胞生长因子基因疗法下颌损伤

胶质瘢痕与脊髓损伤修复被引量：3: 2004年; 脊髓损伤修复过程中不仅缺乏生长促进物质,而且存在大量抑制性基质。胶质瘢痕是脊髓损伤后所面临的主要抑制环境,参与胶质瘢痕主要的细胞成分有星形胶质细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞的前体细胞,有时还包括脊膜细胞和干细胞,而每一种细胞又分泌许多抑制性基质。有效地防止瘢痕形成,减少抑制性基质的分泌,就能为神经再生提供更有利的微环境。目前的方法有去除产生抑制性分子的细胞,防止合成抑制性分子,封闭抑制性分子和降解抑制性分子或增加营养因子。; 刘铖吴祖泽; 关键词：胶质瘢痕脊髓损伤神经再生

下颌骨骨缺损基因治疗动物模型的建立: 2005年; 目的:建立用于研究下颌骨骨缺损基因治疗的实验动物模型及基因导入方法。方法:用30只新西兰大白兔作为实验动物,在左侧下颌骨体部造成直径5mm圆形贯通性骨缺损,以明胶海绵作为载体,将含有人肝细胞生长因子全长cDNA片段的表达型质粒(pUDKH)直接应用于15只兔骨缺损的局部,对另外15只应用等量空质粒(pUDK)作为对照,对骨缺损的愈合情况进行大体形态学、X线和组织学评价。结果:下颌骨骨缺损修复过程中,在形态学、X线和组织学等方面,应用pUDKH组的骨愈合情况优于pUDK组。结论:此实验建立的下颌骨骨缺损实验动物模型,以及通过直接应用细胞因子裸DNA治疗下颌骨骨缺损的基因导入途径,为骨再生和骨缺损的基因治疗研究提供了新的方法。; 刘少华魏奉才哈小琴刘铖吴祖泽王勇张仁华; 关键词：骨缺损基因治疗下颌骨肝细胞生长因子

刘铖

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