刘颖
- 作品数：7 被引量：38H指数：2
- 供职机构：华中农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家重点基础研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 细胞凋亡的主要检测方法研究进展被引量：24
- 2011年
- 细胞凋亡是生理性细胞死亡过程,凋亡在维持动物机体内环境平衡中扮演着极其重要的角色。细胞凋亡的准确检测是研究细胞凋亡相关机制,以及评价细胞凋亡在相应组织或疾病中影响的第一步。形态学是检测细胞凋亡的最直观的方法,至今一直作为细胞凋亡检测的金标准。DNA片段化检测主要有DNA ladder,TUNEL检测法和ELISA检测法。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡的早期事件。凋亡相关基因的检测包括促凋亡基因的检测和抑制凋亡基因的检测。流式细胞术检测细胞凋亡是近些年发展的简单快捷的方法,即可定性又可定量。Ca2+作为细胞内重要的信号分子其浓度和细胞凋亡关系密切相关。
- 张广智胡长敏陈颖钰刘颖李帅罗雨王金勇郭爱珍陈焕春
- 关键词：细胞凋亡线粒体膜电位流式细胞术
- 奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析被引量：2
- 2010年
- 提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素对VSV的抗病毒活性为4.26×105U/mL,对IBRV的抗病毒活性为8.91×104U/mL。结果表明,重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。
- 刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：奶牛Α-干扰素融合蛋白抗病毒活性
- 梅花鹿γ-干扰素在牛型结核病中的应用研究进展
- 2009年
- 梅花鹿γ-干扰素是细胞因子超家族中干扰素家族的特殊重要成员之一,具有广泛的生物学功能。其功能的多样性是通过诱导细胞表达多种蛋白质实现的。对梅花鹿γ-干扰素的诱导与产生、结核病特异性基因、梅花鹿γ-干扰素用于牛型结核病的检测原理及γ-干扰素优劣的研究进展进行综述。
- 刘颖王冰陈伟郭爱珍
- 关键词：梅花鹿Γ-干扰素结核杆菌
- 奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析被引量：2
- 2010年
- 提取经植物血凝素诱导培养的中国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL,7.5×104U/mL。结果表明,重组奶牛β-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。
- 刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：奶牛Β-干扰素融合蛋白抗病毒活性
- 梅花鹿IFN-γ基因的克隆表达及其在结核病诊断中的初步应用
- 梅花鹿为东亚特产,是中国一级保护野生动物,被国际自然与自然资源保护联盟(IUCN)红皮书列为濒危物种。梅花鹿全身是宝,集药用、肉用、皮用和观赏用等功能于一身,如鹿茸、鹿血、鹿鞭等药用价值很高。 结核病(Tuberculo...
- 刘颖
- 关键词：梅花鹿结核病IFN-ΓELISA牛分枝杆菌
- 文献传递
- 梅花鹿γ干扰素克隆表达及抗病毒活性测定被引量：7
- 2009年
- 提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104U/mL和4.61×104U/mL。结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。
- 刘颖刘冬光廖娟红于清龙熊家军杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：梅花鹿Γ干扰素抗病毒活性
- 梅花鹿γ-干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究被引量：2
- 2010年
- 提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI-neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI-neo-CerIFN-γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK-21)和牛肾细胞(MDBK)中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。
- 刘颖王冰于清龙熊家军杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：梅花鹿Γ-干扰素细胞系真核表达
