吴东来
- 作品数：256 被引量：622H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生建筑科学更多>>
- 绵羊蓝舌病发病过程中病毒抗原定位及免疫活性细胞动态观察
- 1994年
- 用云南绵羊益舌病病毒（ＢＴＶ）人工摘种绵羊３０只，接毒后１～１５天．每天剖检２只，同时剖检健康对照羊２只，用免疫荧光和细胞化学技术对靶器官和免疫器官进行连续观察．在接毒后６～８天．绵羊血片中发现了荧光阳性反应红细胞．接毒后２天，口角毛囊上皮，７天，颊、鼻粘膜上皮棘细胞层棘细胞胞浆观察到病毒抗原，且越接近糜烂溃疡灶含病毒抗原的棘细胞和游走进来蚕噬抗原的巨噬细胞越多．在免疫器官从接毒后５～６天起就可见嗜酸性粒细胞增生，巨噬细胞胞浆有病毒抗原．且在嗜酸性粒细胞周围观察到荧光强度不一、均质、多形态的抗原－抗体复合物附着．免疫器官中免疫活性细胞在接毒后６～９天受损较重，Ｔ细胞数减少．Ｂ细胞中成熟型和衰竭型浆细胞大量增加．有分泌抗体能力的未成熟型浆细胞不能形成增殖高峰，１２天后，Ｔ、Ｂ细胞增殖均形成高峰．本文就上述观察结果与动物发病、耐过等临床表现的相关性进行了讨论．
- 褚桂芳尹训南吴东来李金璋
- 关键词：羊病绵羊蓝舌病抗原定位
- 蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定被引量：8
- 2014年
- 为制备蓝舌病病毒03TV）8型VP2蛋白的单克隆抗体（MAb）TL鉴定其抗原表位，本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0细胞进行融合，并以纯化的重组VP2蛋白为包被抗原，通过间接ELISA筛选出两株能够稳定分泌抗BTV8VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株（2G4和387）。间接免疫荧光结果表明：2G4和387与BTV8均呈阳性反应，与BTV1～7、BTV9-24、茨城病毒、中山病毒以及赤羽病毒均呈阴性反应。Westernblot结果显示，2G4和387均能够识别BTV8及BTV8重组VP2蛋白。Ig亚类鉴定2G4和387均为IgG1／κ链。利用原核表达的96条覆盖VP2全长的麦芽糖结合蛋白（MBP）融合短肽对MAbs的抗原表位进行鉴定，结果表明：MAb2G4识别的抗原表位为捌LCRLLSTIGRKMCNTE^296。本研究结果为BTV8型特异性检测方法的建立及VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础。
- 席娜赵国辉孙恩成秦永丽孙亮魏天徐青元杨涛孙晶刘二战钱爱东吴东来
- 关键词：VP2蛋白真核表达单克隆抗体抗原表位
- 抗东方马脑炎病毒E2蛋白的单克隆抗体(EEEV-5E4)及其识别的B细胞表位多肽和应用
- 本发明公开了一种抗东方马脑炎病毒（Eastern equine encephalitis virus,EEEV）E2蛋白的单克隆抗体（EEEV-5E4）及其识别的B细胞表位多肽和应用。本发明还公开了一株能够稳定分泌该单克...
- 吴东来徐青元刘霓红杨涛
- 文献传递
- 原位四聚体染色技术检测特异性CTL
- MHC-肽四聚体复合物可用于检测抗原特异性CTL,自该技术出现以来,主要结合流式细胞术应用于抗原特异性CD8+T细胞的分析研究.本文介绍一种四聚体研究的新技术--原位四聚体染色,主要包括新鲜组织、固定组织以及冰冻切片的间...
- 刘光亮吴东来
- 关键词：染色技术抗原特异性
- 文献传递
- 用套式RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的猪瘟病毒RNA被引量：5
- 2007年
- 利用套式反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对实验性感染猪瘟病毒猪的福尔马林固定石蜡包埋组织标本中的病毒RNA进行检测,将所扩增产物点样于尼龙膜上进行Dot-blotting鉴定,扩增结果与各器官的病理组织学变化进行了比较。从攻毒对照组猪的肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结和扁桃体中检出了猪瘟病毒RNA,未从免疫攻毒猪只的脏器中检出猪瘟病毒RNA;所有扩增产物经Dot-blotting鉴定均得到了阳性信号;病毒基因的检出率与猪瘟病毒导致的病理组织学变化程度相一致。本试验成功建立了套式RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的猪瘟病毒RNA方法,为猪瘟病毒的诊断和回顾性分析提供了技术手段。
- 肖一红尹训南仇华吉李娜吴东来
- 关键词：猪瘟病毒石蜡包埋组织病理变化套式RT-PCR
- 鸡β2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化
- 2微球蛋白(2-m)是组成MHC Ⅰ类分子复合体的轻链分子,对于MHC Ⅰ类分子在细胞表面稳定表达和有效递呈抗原肽必不可少。本试验从来航鸡全血细胞中克隆了鸡2m全基因,利用软件预测了其信号肽序列,并构建了表达成熟2m的重...
- 刘光亮童铁钢孟庆文吴东来
- 关键词：微球蛋白基因克隆纯化
- 文献传递
- 5种脑炎类人兽共患病病毒多重PCR检测方法的建立
- 蔡绪禹康晓平刘洪李裕昌孙恩成王凌凤杨涛刘霓红步志高李文京杨银辉吴东来
- 蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及功能预测被引量：7
- 2016年
- 蓝舌病病毒（bluetongue virus,BTV）编码4种非结构蛋白（NS1~NS4）,其中NS4是新发现的非结构蛋白。为深入探索该新型非结构蛋白的功能,本研究首先采用生物信息学分析其序列结构特征及可能的功能域,结果发现NS4蛋白的N端α-螺旋结构域中具有富含碱性氨基酸的核定位信号（NLS）,而C端α-螺旋结构域中具有亮氨酸拉链结构的核输出信号（NES）。为进一步证实NS4的亚细胞定位,本试验构建了表达NS4全长及其缺失突变体的重组质粒,结果显示缺失NLS的NS4重组蛋白弥散在胞浆,而缺失NES后NS4重组蛋白只定位于细胞核,表明NS4蛋白亚细胞定位具有核—胞浆穿梭过程。最后结合3D同源建模发现NS4与CCAAT增强子结合蛋白（C/EBPβ）等具有较高的同源性,据此推测NS4可能为转录调控蛋白,与DNA或其他转录因子存在相互作用。总之,本研究为NS4蛋白的功能研究提供了更多新线索和新思路,填补了BTV基础研究的空白。
- 吕爽杨涛孙恩成徐青元张继凯吴东来
- 关键词：蓝舌病病毒亚细胞定位同源建模
- 不同毒力PRRSV毒株感染猪体后的病毒抗原分布的比较
- 54头40-42日龄周龄左右的仔猪,分别接种HuN4-F80弱毒和HuN4强毒株,检测并比较病毒抗原的数量及分布。免疫荧光及免疫组化结果显示HuN4组各脏器的病理抗原阳性检出率均明显高于HuN4-F80组和对照组。阳性细...
- 张卓蔡雪辉田志军刘永刚安同庆吴东来胡守萍
- 关键词：PRRSV免疫荧光巨噬细胞
- 文献传递
- 果子狸SARS-CoV实验性感染的病理学研究被引量：2
- 2006年
- 目的为了明确实验性感染SARS-CoV的果子狸各器官的病理变化,进一步确定SARS-CoV与果子狸的关系,评价其作为SARS动物模型的可行性。方法在人源SARS-CoV分离株BJ01(有29个核苷酸的缺失序列)和GD01(无29个核苷酸的缺失序列)实验性感染果子狸的基础上,对其经福尔马林固定的肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾、气管、大脑、胰腺、性腺、胃、心组织进行病理组织学观察,同时用原位杂交技术(ISH)对SARS-CoV在组织器官中的分布进行检测。结果攻毒后不同时期,肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾和大脑有不同程度的病理变化,主要病变是肺脏为急性间质性肺炎:肺炎性水肿、肺泡腔浆液渗出以及肺泡壁充血、出血并因淋巴细胞、巨噬细胞增生、浆液渗出而显著增厚,肺内小血管增生、扩张。淋巴结、脾脏结构破坏,淋巴滤泡消失,脾小体萎缩,淋巴细胞明显减少,结缔组织增生。肝细胞脂肪变性,并见有多个淋巴细胞浸润灶。ISH结果显示,在肺、小肠、大脑中检测到SARS-CoV基因,其它器官中未检到,与SARS患者的检测结果基本相符。结论果子狸实验性感染SARS-CoV可导致与人类相似的病理学变化和病原分布,表明果子狸可以作为评价SARS-CoV疫苗及治疗药物的动物模型。
- 肖一红孟庆文尹训南关云涛刘永刚李昌文王牟平孔宪刚吴东来
- 关键词：SARS-COV果子狸冠状病毒感染原位杂交
