孙启鸿
- 作品数：84 被引量：210H指数：8
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 烯脂酰辅酶A水解酶单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:制备小鼠抗人烯脂酰辅酶A水解酶(enoyl CoA hydratase,ECHS1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA、Western blot、免疫沉淀、免疫组化和间接免疫荧光等方法对mAb进行特异性鉴定,通过Uni-ZAP XR正常成人肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原。结果:获得1株可稳定分泌抗人ECHS1 mAb的杂交瘤细胞株BGB095。该mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),可用于ELISA检测、Western blot、免疫沉淀、免疫组化等实验。结论:成功制备了抗人ECHS1的mAb,为代谢疾病和肿瘤的研究提供了有力的工具。
- 刘蓉鞠艳芳杨金菊杜雪梅陈勇刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体线粒体
- 抗PLA2G13多克隆和单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:制备分泌型的磷脂酶A2 G13(group XIII se-cretedphos pholipaseA2,PLA2G13)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PLA2G13(即PLA2G13-GST)和pET-32a-PLA2G13(即PLA2G13-His)。PLA2G13-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb和鼠mAb。采用Western blot鉴定兔抗人PLA2G13 pAb的特异性。采用Western blot和Immunohistochemistry鉴定鼠抗人PLA2G13 mAb的特异性。结果:PLA2G13-GST和PLA2G13-His融合蛋白在均大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。Western blot鉴定表明,兔抗人PLA2G13 pAb可特异地识别HepG2细胞系中相对分子质量(Mr)约19700的蛋白,与文献报道中PLA2G13的实际Mr相符。通过筛选共获得8株可稳定分泌抗PLA2G13的杂交瘤细胞株,Western blot鉴定表明6株可识别重组人PLA2G13蛋白,免疫组织化学鉴定显示2株可特异性识别正常肝组织中的PLA2G13蛋白。结论:成功地制备了抗人PLA2G13兔pAb和鼠mAb,为进一步研究PLA2G13的功能提供了特异性检测工具。
- 李淑珍刘莹陈苗柳晓兰唐小波高建恩朱大岭孙启鸿
- 关键词：原核表达融合蛋白抗体制备
- 应用单克隆抗体鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白
- 2010年
- 对线粒体蛋白质组的鉴定和分析有助于理解线粒体的功能和相关疾病的发病机制,包括能量代谢、凋亡、自由基产生、产热作用、钙离子信号通路等.本实验旨在鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白.用线粒体蛋白质作为免疫原,经过细胞融合、筛选和克隆,制备了240多个单克隆抗体杂交瘤细胞系.单克隆抗体识别的线粒体蛋白抗原通过人类肝脏cDNA表达文库筛选方法鉴定,相应的线粒体蛋白质的亚细胞定位通过免疫组化证实.发现了肝脏线粒体中6个抗原优势蛋白,分别被至少两种特异性的单克隆抗体所识别.这6个蛋白分别是乙酰辅酶A酰基转移酶(线粒体3-酮酯酰辅酶A硫解酶)2、醛脱氢酶1家族A1、氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺S乙酰转移酶(丙酮酸脱氢酶复合物的E2组分)、烯酰辅酶A水合酶1和羟基类固醇(11β)脱氢酶1.这些单克隆抗体有望应用于人类肝脏蛋白质组计划的相关研究,如去除优势蛋白、蛋白与蛋白之间相互作用的研究和验证等.
- 鞠艳芳杨金菊刘蓉柳晓兰杜雪梅刘莉陈志成迟俊刘淑娥高媛高建恩贺福初孙启鸿
- 关键词：线粒体单克隆抗体肝脏
- 整合素的构象变化与亲和力调控被引量：4
- 2005年
- 整合素(integrin)是由α、β两个亚单位通过非共价键连接而组成的异源二聚体。每种α、β亚单位都是含有多种结构域的大分子量Ⅰ型穿膜糖蛋白。它在细胞与细胞间、细胞与基质间相互作用的过程中发挥着十分关键的作用。整合素多种结构域的空间排列决定了其构象特征,而整合素的不同构象状态与其亲和力呈高度相关。对αVβ3整合素晶体结构的解析使我们对整合素的结构与功能有了更进一步的理解。
- 李发慧王兆卿孙启鸿陈毓荃
- 关键词：整合素构象变化
- γ-射线对Smad 3基因剔除小鼠免疫功能影响的初步分析被引量：1
- 2006年
- 目的:观察5．0 Gyγ-射线全身照射对Smad 3基因剔除小鼠免疫组织和外周血淋巴细胞亚群的影响及其机制。方法:应用TUNEL和FCM方法观察照射后不同Smad 3基因型小鼠胸腺、脾脏、淋巴结和外周血淋巴细胞亚群和淋巴细胞凋亡率的变化。结果:(1)照后Smad 3+/+、Smad 3+/-和Smad 3-/-三种基因型小鼠外周血WBC和淋巴细胞绝对数均迅速下降,直至照后10d均未恢复到对照组水平,而Smad 3-/-小鼠恢复速度较快。(2)三种基因型小鼠外周血CD3+细胞照后10d明显降低,分别约为对照组的40．2％、31．7％和49．3％,而CD8+细胞亚群的降低的更为明显,分别约为对照组的10．1％、10．6％和27．4％,Smad 3-/-小鼠降低的幅度小于Smad 3+/+和Smad 3+/-组。(3)小鼠胸腺和脾脏照射后T细胞亚群明显降低,而三种基因型小鼠中以Smad 3-/-小鼠各细胞亚群的降低幅度较小。(4)照后三种基因型小鼠CD19+细胞在免疫组织中降低的幅度不同,在淋巴结中CD19+细胞的降低更为明显。(5)照后小鼠淋巴细胞的凋亡率显著增加,然而无论是在外周血、胸腺,还是脾脏、淋巴结,三种基因型小鼠中均以Smad 3+/+淋巴细胞凋亡率的升高最为明显,而Smad 3-/-小鼠显示出相对的辐射不敏感性。结论:5．0 Gyγ-射线能诱发不同Smad 3基因型小鼠外周血和免疫组织淋巴细胞的明显凋亡,导致外周血WBC、淋巴细胞数量的明显减少和免疫细胞功能亚群的损伤;然而对多种指标观察的结果均首次表明, Smad 3基因敲除后导致了小鼠相对的辐射不敏感性,可能与TGF-β信号转导通路的抑制有关,其调节机制尚需进一步阐明。
- 崔玉芳徐菡靳巍姜竺君董波安晓霞柳晓兰吕雅歆毛春明孙启鸿
- 关键词：基因剔除小鼠免疫功能影响细胞凋亡率全身照射小鼠淋巴细胞免疫细胞功能
- VEGFR-3与肿瘤淋巴转移的研究进展被引量：2
- 2006年
- 肿瘤转移通常是人类癌症致死的主要原因之一。淋巴转移是肿瘤特别是癌的常见转移途径,肿瘤细胞转移至淋巴结通常作为肿瘤转移的信号,同时也是患者预后的重要指标。在肿瘤转移过程中,血管内皮生长因子及其受体家族发挥了重要的作用。尤其是淋巴内皮特异性的受体——血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)及其配体VEGF-C/D在促进淋巴管生长具有关键的作用。本文就VEGFR-3与肿瘤淋巴转移的研究进展进行综述。
- 陈浩高媛孙启鸿
- 关键词：VEGFR-3肿瘤转移肿瘤治疗
- 抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbon-yl/L-xylulosereductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Westernblot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人DCXRmAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Westernblot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。
- 鞠艳芳杨金菊刘蓉高媛柳晓兰高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体
- 用定量荧光微球作对照的流式细胞术对细胞表面抗原分子数的测定
- 1997年
- 定性、定位和定量地确定细胞表达的各种重要分子是在分子水平上认识细胞功能的前提,其中以确定特定分子在细胞膜表面的绝对数目较为困难。
- 张双喜孙启鸿陈勇孙瑛勋于鸣沈倍奋
- 关键词：流式细胞术
- 高功率微波辐照小鼠免疫组织基因表达谱初步分析被引量：8
- 2005年
- 目的：观察一定强度高功率微波(HPM)诱发的小鼠胸腺及淋巴结免疫组织差异基因表达谱的变化,揭示非热效应在分子水平上的作用机制。方法：应用cDNA基因芯片技术分析微波非热效应的分子机制。结果：(1)淋巴结上调的差异表达基因519个,下调基因305个；胸腺上调基因149个,下调基因205个。(2)差异表达基因的生物学功能主要涉及免疫反应及防御、细胞凋亡、DNA修复与复制、应激反应、信号转导、细胞粘附、细胞生长及周期、组织器官发生、物质代谢、细胞增殖等多个方面。结论(1)胸腺差异表达基因总数少于淋巴结,且胸腺差异基因上调及下调的幅度也低于淋巴结,表明淋巴结对HPM辐照的敏感性要高于胸腺。(2)HPM对机体免疫组织的影响可能属非热效应的作用机制,且涉及的差异基因范围也较为广泛。
- 崔玉芳杨姝雅徐菡郭瑛姜竺君柳晓兰孙启鸿
- 关键词：微波基因表达谱免疫组织
- 蛋白质微阵列芯片技术及其在抗体筛选中的应用
- 2004年
- 微阵列是一种可用于生物学研究的大规模、高通量的重要分析技术.近年来,蛋白质微阵列技术已经在蛋白质组的功能研究、疾病诊断以及药物开发中显示出巨大的潜力[1,2],例如可用于抗原-抗体、蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸、蛋白质-脂质、蛋白质-小分子以及酶-底物等之间相互作用的分析等.影响蛋白质微阵列分析性能的主要因素包括蛋白质分子识别的特异性、蛋白质的固定化技术以及检测方法等.……
- 何为刘志红许丹科李明孙启鸿
- 关键词：微阵列芯片荧光标记球蛋白
