宋艳华
- 作品数：99 被引量：117H指数：6
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- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 家兔γ干扰素基因的原核表达及其表达产物的单克隆抗体的制备
- 2014年
- 将PCR扩增的家兔γ干扰素基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体上,构建重组载体pET-28a(+)-IFN-γ。重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、HisTrap亲和柱纯化,获得IFN-γ重组蛋白。以IFN-γ重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术获得4株抗IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为3H8、4G4、4F10、6C12,它们的亚型分别为IgG1、κ链,IgG2b、κ链,IgG1、κ链,IgG1、κ链。分别制备单克隆抗体腹水,结果,4株单克隆抗体腹水的间接ELISA效价在10-4~10-5之间。本试验通过制备抗家兔IFN-γ单克隆抗体,为研究和检测IFN-γ提供了一种重要的工具。
- 彭伟宋艳华胡波范志宇魏后军王芳王芳
- 关键词：家兔Γ干扰素原核表达单克隆抗体
- 兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的表达及鉴定
- 在兔出血症病毒主要结构蛋白VP60的N端插入双串联OVA CD8+T细胞表位(ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体...
- 张燕胡波宋艳华范志宇魏后军姜平王芳
- 关键词：兔出血症病毒嵌合体疫苗研制
- 文献传递
- 一种产气荚膜梭菌α毒素基因工程疫苗及其制备方法
- 本发明提供一种产气荚膜梭菌α毒素基因工程疫苗及其制备方法。本发明的产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白与野生型α毒素相比，其氨基酸序列第176位组氨酸突变为天冬酰胺。本发明的产气荚膜梭菌α毒素基因工程疫苗采用自诱导分泌表达的去毒产...
- 魏后军王芳范志宇胡波宋艳华薛家宾仇汝龙
- 文献传递
- 兔出血症病毒杆状病毒载体、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗及其制备方法
- 本发明涉及兔出血症病毒杆状病毒载体、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗及其制备方法，属于免疫技术领域。将重组兔出血症病毒VP60杆状病毒接种Sf9昆虫细胞，于27～28℃培养，待细胞病变达85%以上时，收获细胞培养物并灭活，以...
- 范志宇王芳胡波魏后军宋艳华仇汝龙陈萌萌朱伟峰薛家宾
- 文献传递
- 一株新型家兔肠炎沙门氏菌的分离鉴定及其治疗研究
- 2016年2月至5月期间,山东省某规模化兔场发生以仔兔脾脏肿大,母兔流产为特征的传染病。本研究对发病濒死兔进行细菌的分离,并利用16S rRNA基因扩增技术、特异性PCR方法和生化试验对致病细菌进行鉴定(添加治疗及疫苗相...
- 范志宇魏后军仇汝龙胡波宋艳华陈萌萌徐为中王辉薛家宾王芳
- 关键词：肠炎沙门氏菌
- 文献传递
- 一种兔出血症病毒1型和2型VP60二价重组杆状病毒载体灭活疫苗及其制备方法和应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种兔出血症病毒1型和2型VP60二价重组杆状病毒载体灭活疫苗及其制备方法和应用。本发明通过反转录PCR分别扩增兔出血症病毒1型和2型衣壳蛋白VP60基因，并将两种PCR产物克隆至具有双启...
- 宋艳华王芳胡波范志宇魏后军陈萌萌仇汝龙朱伟峰薛家宾
- 文献传递
- 兔出血症病毒2型的分离鉴定与序列分析被引量：21
- 2020年
- 兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种具有高度传染性、急性致死性兔病。兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的RHD主要在欧洲流行,病兔的死亡率高达90%,而用经典RHDV毒株制备的疫苗几乎不能预防家兔感染RHDV2,从而给世界养兔业造成了巨大的经济损失。2020年4月,中国四川省某兔场首次发生由疑似RHDV2引起的RHD,笔者所在实验室通过红细胞凝集试验(Hemagglutination,HA)、逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增、vp60基因序列分析和病毒复制试验,对采集的病死家兔肝脏样本进行病原鉴定。HA结果显示,部分病死家兔的肝脏样本不能引起血凝现象;RT-PCR结果显示,样品中出现了RHDV2的特异性条带。对新发现毒株cDNA的RT-PCR产物进一步分析发现,所扩增vp60基因核苷酸序列与经典RHDV vp60基因核苷酸序列的一致性为77.5%~80.1%,与RHDV2 vp60基因核苷酸序列的一致性为93.6%~96.1%,并且与RHDV2处于同一个进化分支。病毒复制试验结果显示,用病死家兔肝脏组织与磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffer saline,PBS)按1 g∶10 ml混合后制成的悬液分别人工感染5只非免疫25日龄未断奶仔兔和5只2月龄兔,在24~48 h全部死亡。基于以上试验结果,确定本研究新发现的RHDV毒株为RHDV2,并将其命名为SC2020,这是在中国首次发现RHDV2毒株,应引起高度重视。
- 魏后军胡波范志宇宋艳华仇汝龙陈萌萌薛家宾王芳
- 关键词：兔出血症VP60基因
- 家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定被引量：2
- 2019年
- 通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序确定全长为550bp;预测软件分析,与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain,PRD)高度同源;随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中,成功构建重组体报告基因质粒后,瞬转RK-13细胞,利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示,克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性,为研究兔出血症病毒对宿主IFN-β基因的转录调控机制提供了有效的工具。
- 陈萌萌范志宇胡波宋艳华魏后军仇汝龙朱伟峰徐为中王芳
- 关键词：家兔兔出血症病毒启动子荧光素酶
- 兔出血症病毒2型TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3
- 2021年
- 以新发生的兔出血症病毒2型(RHDV2)SC 2020/04株VP60基因序列为参考,设计出1对特异性引物和TaqMan探针,建立了一种快速、灵敏且特异的用于检测新型病毒的荧光定量RT-PCR检测方法。试验结果显示:本研究建立的方法,标准曲线线性关系良好,R^(2)值达到0.999;其特异性较好,与兔出血症病毒1型(RHDV1)、仙台病毒(SV)和轮状病毒(RRV)病原均无交叉反应;灵敏性高,最低检出量为1μl 1×10拷贝;且重复性良好,批内和批间试验的变异系数平均值均小于2%。临床检测结果表明,利用该方法对108份临床病料进行检测,检出RHDV2阳性样品72份,检出率为66.7%,明显高于常规的RT-PCR方法(62.0%)。结果证明,新建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法适合于RHDV2感染的特异性诊断。
- 陈萌萌仇汝龙范志宇胡波宋艳华魏后军朱伟峰徐为中王芳
- 关键词：TAQMAN探针荧光定量RT-PCR敏感性特异性
- 猪IL-10的原核表达及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 为了制备猪IL-10的单克隆抗体(MAb),本研究根据GenBank登录的猪白细胞介素10(PIL-10)基因序列设计两对特异性引物,利用套式PCR扩增PIL-10成熟蛋白编码基因(490bp),构建原核表达载体pET28a-PIL-10,并转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE和western blot分析鉴定,证明PIL-10重组蛋白获得表达。提取纯化该重组蛋白包涵体,免疫BALB/c小鼠,经过3次细胞融合,间接ELISA方法筛选,获得一株能稳定分泌抗猪IL-10MAb的杂交瘤细胞,将其命名为2F4。Western blot结果证明该MAb能够与重组蛋白发生特异性反应。间接ELISA测定细胞上清抗体效价为1∶1024,腹水效价为1∶128000,该MAb为IgG3亚型,轻链为λ型。杂交瘤细胞连续传代20代,分泌抗体的效价基本一致,从而为进一步建立猪IL-10的检测方法奠定了物质基础。
- 刘婷婷王兴龙李玉峰宋艳华张国龙姜平
- 关键词：原核表达单克隆抗体
