尤宝荣
- 作品数：50 被引量：181H指数：8
- 供职机构：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 石棉诱导细胞凋亡改变的研究被引量：3
- 1999年
- 目的探讨石棉诱导的细胞凋亡及其相关基因ｂｃｌ２及ｂａｘ表达的改变。方法大鼠石棉染尘。收集石蜡包埋的石棉作业工人肺癌组织块。ＴＵＮＥＬ法（ｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄ，末端脱氧核糖核酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法）观察凋亡细胞分布及数量。生物素抗生物素蛋白ＤＣＳ（ａｖｉｄｉｎＤｃｅｌｓｏｒｔｅｒ）间接免疫荧光法观察ｂｃｌ２及ｂａｘ表达改变，琼脂糖凝胶电泳进行ＤＮＡ梯状电泳分析。结果大鼠染尘后４０天，细胞凋亡增强、ｂｃｌ２表达减少、ｂａｘ蛋白含量升高，可见ＤＮＡ特征性梯度电泳条带；大鼠染尘后７０天，细胞凋亡明显减弱。在石棉作业工人肺癌组织中未见明显细胞凋亡。结论石棉可诱导肺组织细胞凋亡发生改变，这种改变有时段性。凋亡相关基因表达也有相应变化。
- 刘秉慈黄筚辉许增禄徐健徐健王海华缪庆尤宝荣
- 关键词：细胞凋亡BCL-2BAX肺癌
- 胶原蛋白的天狼星红测定法被引量：1
- 1993年
- 介绍了灵敏的测定胶原蛋白的天狼星红法。该方法较传统的胶原蛋白的羟脯氨酸测定法简便省时,适用于胶原蛋白的定量分析。
- 刘秉慈黄英刘玉英刘薇尤宝荣李玉瑞
- 关键词：胶原矽肺纤维化
- 石英对大鼠肺上皮细胞和成纤维细胞的增殖抑制及致hprt基因突变的研究被引量：1
- 2002年
- 目的探讨石英对大鼠肺泡II型上皮细胞和成纤维细胞的增殖抑制及致hprt基因突变的差异。方法采用(MTT噻唑蓝)比色法检测大鼠肺成纤维细胞和肺泡II型上皮细胞的增殖抑制毒性。以含6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的培养基筛选突变细胞克隆,检测hprt基因突变频率。结果在相同的染毒条件下,肺泡II型上皮细胞对石英刺激比成纤维细胞更易受损伤,上皮细胞半数增殖抑制浓度(IC50)约为140μg/cm2,成纤维细胞的IC50约为282μg/cm2。在致hprt基因突变方面,石英粉尘对两种细胞都有致突变作用。在同样剂量染毒条件下,肺泡Ⅱ型上皮细胞的hprt突变频率为84.2×10-6～156.6×10-6,较成纤维细胞(67.6×10-6～114.3×10-6)更容易发生hprt基因突变,差异有显著性(P<0.05)。结论石英对大鼠肺成纤维细胞和肺泡II型上皮细胞的细胞毒性及对hprt基因致突变作用强度存在明显差异。肺泡II型上皮细胞对石英刺激的反应敏感性高于成纤维细胞。
- 张绪超刘秉慈尤宝荣缪庆徐茗康宁
- 关键词：石英上皮细胞成纤维细胞增殖抑制HPRT基因基因突变
- 汉防己甲素及克矽平对矽肺大鼠Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的影响被引量：7
- 1995年
- 汉防己甲素（汉甲）及克矽平（Ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｉｄｉｎｅ－Ｎ－Ｏｘｉｄｅ，ＰＶＮＯ）是目前较为有效的抑制矽肺纤维化的药物。本文研究了其对胶原ｍＲＮＡ水平的影响．斑点杂交实验表明大鼠接尘６０天和１２０天后α１（Ⅰ）及α１（Ⅲ）ｍＲＮＡ水平明显上升，经汉甲或克矽平治疗１个月或３个月后，胶原ｍＲＮＡ水平明显下降。原位杂交结果表明胶原ｍＲ－ＮＡ银颗粒与细胞性结节和增厚的肺泡壁的成纤维细胞分布重合。汉甲或克矽平治疗后银颗粒数下降。提示汉甲及克矽平对矽肺进程中的胶原基因表达增强有抑制作用。
- 刘秉慈何玉先缪庆尤宝荣王海华
- 关键词：矽肺汉防己甲素克矽平MRNA
- 过量氟对大鼠骨骼I型胶原mRNA表达及纤维性状的影响被引量：10
- 2003年
- 目的观察过量氟对大鼠骨骼I型胶原mRNA表达的影响和对大鼠骨骼中胶原纤维性状的作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为6组,每组10只,分别为给氟0.5、1、2个月组及相应的对照组。给氟组饮用含221mg/LNaF的含氟水,对照组饮用蒸馏水。制备α1(Ⅰ)胶原cDNA探针,采用cDNA-mRNA原位杂交方法,检测大鼠骨组织中I型胶原mRNA的改变。采用苦味酸-天狼星红偏振光染色法对骨组织中胶原纤维进行观察。结果cDNA-mRNA原位杂交显示,大鼠给氟0.5个月后,I型胶原mRNA水平上升,但在给氟1个月及2个月时,阳性信号减弱。苦昧酸-天狼星红偏振光观察显示在肱骨、股骨、肋骨等骨组织中,胶原纤维发生断裂、变短、变细、排列紊乱,含量下降。结论过量氟对骨I型胶原mRNA表达有短期增强作用,继而抑制I型胶原mRNA合成。胶原mRNA水平下降可能是氟骨症胶原蛋白水平下降的原因之一。过量氟可导致大鼠I型胶原纤维正常结构破坏,交联下降。
- 许增禄刘秉慈缪庆徐园园徐茗钱晓菁尤宝荣袁伯华康宁
- 关键词：氟化物中毒原位杂交
- 汉防己甲素对矽肺大鼠肺中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响被引量：9
- 1994年
- 使用Ｐｒｏα１（Ⅰ）、Ｐｒｏα１（Ⅲ）人胶原ｃＤＮＡ探针，采用ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ班点杂交技术，观察了染尘２个月、４个月的矽肺大鼠及汉防己甲素治疗１个月和３个月的矽肺大鼠肺组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的ｍＲＮＡ水平的改变情况。实验结果表明，矽肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的含量比正常肺组织明显增加（Ｐ＜０．０５），汉防己甲素治疗后Ⅰ、Ⅲ型胶原正常含量则较矽肺组织显著减少。因此，我们认为矽肺病变组织中胶原纤维的积聚是由石英粉尘引起胶原基因表达改变所致；汉防己甲素能直接或间接地抑制胶原基因的转录，从而抑制矽肺病变中胶原蛋白的合成。
- 何玉先缪庆刘秉慈王海华尤宝荣
- 关键词：矽肺胶原基因汉防己甲素
- 全反式视黄酸阻断苯并(a)芘致成纤维细胞周期改变的通路被引量：2
- 2005年
- 目的观察全反式视黄酸(ATRA)逆转苯并(a)芘诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期紊乱过程中细胞周期素D1(cyclinD1)、细胞周期素依赖性激酶K4(CDK4)、转录因子E2F1和E2F4的作用。方法用0.1μmol/LATRA预处理细胞后,再用2μmol/L苯并(a)芘作用细胞,用Westernblotting方法测定其蛋白表达水平;建立稳定转染了反义cyclinD1质粒和反义CDK4质粒的细胞系,应用反义技术证明上下游关系;用流式细胞技术测定细胞周期。结果2μmol/L苯并(a)芘作用于HELF24h后,cyclinD1、E2F1蛋白表达水平明显增高,CDK4和E2F4蛋白表达水平无明显变化;用0.1μmol/LATRA预处理24h后,cyclinD1、E2F1蛋白表达水平明显下降;与相同作用的对照组相比,苯并(a)芘刺激反义cyclinD1或反义CDK4细胞后E2F1表达增加的幅度明显降低;与相同作用的对照组相比ATRA预处理的反义cyclinD1或反义CDK4细胞中,苯并(a)芘诱导的E2F1过表达水平降低的幅度明显降低;流式细胞术测定结果显示,苯并(a)芘诱导细胞从G1期进入S期,ATRA通过聚积G1期细胞而阻滞苯并(a)芘诱导的细胞周期进程。结论ATRA通过cyclinD1/E2F1途径阻断苯并(a)芘诱导的HELF的细胞周期改变。
- 贾效伟刘秉慈史香林高艾尤宝荣叶萌沈福海杜宏举
- 关键词：全反式视黄酸苯并(A)芘转录因子细胞周期细胞周期素依赖性激酶苯并(A)芘全反式视黄酸转录因子E2F-1阻断BLOTTING
- 细胞周期蛋白D1在石英致人细胞恶性转化中的作用被引量：4
- 2004年
- 目的探讨细胞周期蛋白D1在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)恶性转化过程中所起的作用。方法采用基因重组与基因导入的方法将表达正义和反义细胞周期蛋白D1RNA的pXJ41细胞周期蛋白D1导入石英恶性转化HELF细胞中。采用原位杂交和免疫组化的方法检测细胞中细胞周期蛋白D1基因表达情况,分析细胞周期蛋白D1导入前后细胞生长速度、倍增时间、细胞周期分布、软琼脂克隆形成能力的改变。结果石英诱导HELF细胞恶性转化过程中细胞周期蛋白D1基因过表达,反义细胞周期蛋白D1RNA可抑制石英恶性转化细胞的生长增殖。与石英恶性转化细胞相比,反义pXJ41细胞周期蛋白D1转染细胞培养至第8天时,生长速率下降5869%,倍增时间从210h延长到314h,G1期细胞比例从451%增加到527%,S期细胞比例由403%下降到331%,克隆形成率显著下降,克隆明显变小。结论细胞周期蛋白D1的异常表达与石英恶性转化细胞有密切的关系,高水平表达的细胞周期蛋白D1对维持恶性转化细胞的恶性性状起重要的作用。
- 闫克夏刘秉慈史香林尤宝荣徐茗康宁赵超英
- 关键词：细胞周期蛋白D1石英细胞恶性转化原位杂交
- 汉防己甲素抑制矽肺胶原mRNA表达的研究被引量：28
- 1995年
- 在制备Ｐｒｏα＿１（Ⅰ）、Ｐｒｏα＿１（Ⅲ）胶原ｃＤＮＡ探针的基础上，采用斑点及原位分子杂交技术，观察汉防己甲素对矽肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的ｍＲＮＡ的影响。结果表明染尘２、４个月的矽肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的含量比正常肺组织明显增加（Ｐ＜０．０５），经汉防己甲素治疗后增高的Ⅰ、Ⅲ型ｍＲＮＡ含量显著减少（Ｐ＜Ｏ．０５）。原位杂交显示，正常肺组织杂交颗粒主要分布于肺泡间隔的成纤维细胞中，而矽肺病变组织杂交颗粒分布于细胞性结节及增厚间质的成纤维细胞中。由此认为矽肺组织胶原积聚是由石英粉尘引起胶原基因的表达增强所致，汉防己甲素能直接或间接地抑制胶原基因的转录，从而减少病变组织中胶原蛋白的合成。
- 何玉先刘秉慈缪庆王海华尤宝荣
- 关键词：矽肺汉防己甲素MRNA基因表达
- 维生素C逆转苯并(a)芘致细胞周期改变的E2F通路被引量：1
- 2006年
- 目的探讨转录因子E2F1和E2F4在维生素c逆转苯并（a）芘引起人胚肺成纤维细胞（HELF）细胞周期改变中的作用，及其与细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）的上下游关系。方法接种细胞到培养瓶，待生长至70％一80％时，维生素c预处理细胞1h后，用苯并（a）芘刺激细胞24h，运用流式细胞术测定细胞周期时相分布，用免疫印迹法检测蛋白含节，用Gel-Pro 3．0软件对条带光强度进行分析，脂质体转染法建立稳定转染反义cyclin D1或反义CDK4的HELF系，应用反义技术证明通路的上下游关系。结果苯并（a）芘诱导HELF中cyclin D1、CDK4、E2F1和E2F4的蛋白表达升高，并伴随s期细胞百分率从（33．5±3．2）％上升至（41．1±0。2）％。维生素C可降低苯并（a）芘诱导的HELFS期细胞百分率至（33.2±0．6）％，并抑制苯并（a）芘诱导的HELF上述蛋白的表达。反义cyclin D1和反义CDK4均可抑制苯并（a）芘诱导的HELF上述蛋白的表达，反义cyclinD1可使苯并（a）芘诱导的HELFS期细胞百分率降低至（31．2±1．3）％。维生素C联合反义cyclinD1与单独反义cyclinD1相比，可进一步降低苯并（a）葩诱导的HELF上述蛋白的表达，且能够抑制苯并（a）芘诱导的HELF的s期细胞百分率，使其从（41．1±0．2）％下降为（34．0±0．3）％。维生素c联合反义CDK4可降低苯并（a）芘诱导的HELF的s期细胞百分率，使其从（41．1±0．2）％下降为（33．7±1．5）％，而且与单独反义CDK4相比，可进一步降低苯并（a）芘诱导的HELF的s期细胞百分率。结论维生素C可能通过cyclinD1-CDK4／E2F-1／4通路逆转苯并（a）芘引起的细胞周期改变。
- 高艾刘秉慈沈福海杜宏举黄传书贾效伟尤宝荣叶萌
- 关键词：抗坏血酸细胞周期蛋白D1
