常亚军
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省科技计划项目协和青年科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 牛多瘤病毒PCR检测方法的建立及验证被引量：1
- 2021年
- 目的建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证。方法根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR。合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒。以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度。验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测。结果建立的PCR法可以BPyV-frag重组质粒为模板扩增出特异性条带,最适退火温度为60℃。2对引物的灵敏度均达2 fg/μL(558 copies/μL),引物对9PF、9PR的灵敏度略高于3PF、3PR;引物3PF、3PR和9PF、9PR以高浓度的BPV DNA(101.6 ng/μL)和BAV DNA(97.5 ng/μL)为模板时,均无扩增条带,微量BPyV-frag重组质粒产生扩增条带。Vero、MDBK、KMB17和BT细胞培养上清液中均未检出BPyV。结论成功建立了BPyV的PCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,可用于检测细胞培养上清液中的BPyV。
- 牛步青胡术然高有张海浩陈蕾西常亚军易力姚宇峰任芳芳
- 关键词：聚合酶链反应细胞培养上清液
- 兔抗肠道病毒71型血清制备中免疫剂量对抗体效价的影响被引量：1
- 2021年
- 目的研究兔抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)血清制备中不同免疫剂量对抗体效价的影响。方法将9只实验兔简单随机分为3组,每组3只。5、50和100μg 3个剂量EV71灭活疫苗和弗氏佐剂均匀混合后,通过肌内注射途径分别免疫3组动物,于第0、7、14及28天各免疫1次,每7天采血,分离血清,检测抗EV71中和抗体效价。结果100μg剂量组兔血清抗体效价显著高于5和50μg剂量组(第42天t值分别为-3.282和-2.486,P值均<0.05)。第42天时,兔血清抗体效价和免疫剂量(5~100μg范围内)呈线性关系,回归方程y=478.229x-2041.820。结论在本实验选择的3个免疫剂量中,随着免疫剂量升高,产生的血清抗体效价也升高,且呈线性关系。
- 张玉平胡云光殷安国李亚东杜宋婷王雯慧李晓颖常亚军段男宋杰
- 关键词：免疫血清肠道病毒71型抗体效价
- Triton X-114萃取法纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的应用被引量：6
- 2016年
- 采用Triton X-114替代高腐蚀性的苯酚,以探索b型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzaetype b,Hib)荚膜多糖的纯化新方法。将Hib粗制荚膜多糖溶于不同浓度的Triton X-114溶液中,加入(NH_4)_2SO_4,搅拌后,离心分层后,取下层溶液。重复多次,最后用100 k D膜进行超滤。结果,加入Triton X-114的质量分数为15%,(NH_4)_2SO_4的质量分数为30%,抽提次数为3次时,对蛋白杂质的去除效果较好。采用Triton X-114萃取法连续纯化3批Hib荚膜精制多糖,其各项检测指标均符合《中国药典》2015版(三部)规定。研究表明Triton X-114萃取法可应用于Hib粗制荚膜多糖的纯化,且纯化效果良好。
- 韦鹏翀魏茂琪常亚军靳伟华岳俊杨建波郑勇赵宏欧阳圣洁朱文勇廖国阳
- 关键词：B型流感嗜血杆菌荚膜多糖TRITON纯化
- Vero细胞无血清培养基的筛选及其培养流感病毒H5N1条件的优化被引量：3
- 2016年
- 目的筛选适宜Vero细胞培养的无血清培养基,并优化其培养流感病毒H5N1的条件。方法取VP-SFM培养的Vero细胞(SFM-Vero),以增殖速率为指标,筛选无血清培养基[VP-SFM、EX-CELL^(TM) VERO、Virus Pro ^(TM) VERO、自制无血清培养基1(SFM-1)和2(SFM-2)];采用中心组合实验(Box-Behnken)优化SFM-Vero培养流感病毒H5N1的pH、TPCK-Trypsin浓度和病毒接种MOI。结果 Vero细胞在VP-SFM和自制SFM-1培养基中生长情况好于其他无血清培养基;H5N1病毒株能够感染无血清适应的Vero细胞;SFM-Vero培养流感病毒H5N1较优条件为:p H 7.64,TPCK-Trypsin浓度0.68μg/ml,MOI 0.01。在该条件下培养的流感病毒HA滴度可达768 HAU/50μl,为正常培养基培养的Vero细胞的2.33倍。结论筛选出适宜Vero细胞生长的无血清培养基,优化了流感病毒H5N1 Vero细胞适应株无血清培养的条件。
- 李在晗苏杨起常亚军杨家方王婷婷杨耀云刘圆圆杨建波唐聪徐丽兰张恒廖国阳李卫东
- 关键词：无血清培养基H5N1
- 抗肠道病毒71型血清与病毒间的中和量效反应关系
- 2023年
- 目的探讨抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中和血清效价与EV71滴度之间的中和试验量效反应关系。方法将EV71收获液进行系列梯度稀释后,加入不同动物来源的不同效价的血清进行中和试验,观察细胞病变情况,找到能够完全中和不同滴度病毒所需的最低血清效价。结果随着病毒滴度的增加,需要完全中和病毒所对应的血清效价也相应增加,但血清效价增加的趋势较病毒增加的趋势慢,当病毒滴度增加约120000倍时,所需的血清效价增加约1000倍。不同来源的血清对EV71的中和能力相当。结论初步确立了EV71中和血清与EV71滴度间的中和量效关系。
- 李亚东解裕萍徐敏郎磊赵勇杜宋婷贺凌煜宋杰宋杰
- 关键词：肠道病毒71型量效关系
- 用无血清适应的Vero细胞培养H5N1型流感病毒条件的优化被引量：5
- 2015年
- 目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、48 h)、培养液基础培养基(DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM:DMEM/F12混合液)、培养温度(33、33.5、34、34.5、35和37℃)、收获时间(24、36、48、60和72 h)、培养液p H值(6.8、7.1、7.4、7.7、8.0和8.3)和TPCK胰酶浓度(0.5、1.0、1.5μg/ml)进行优化,并检测最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价及形态。结果 H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性。最佳无血清培养条件为:MOI=0.1和0.15,细胞培养时间36 h,以DMEM/F12为基础培养基,病毒培养温度33.5和34.5℃,病毒收获时间60 h,培养液p H 7.7,TPCK胰酶浓度为1.0μg/ml。最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价为1∶512,电镜下观察病毒形态完整。结论确定了H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性,并优化了SFMVero细胞培养流感病毒的适宜条件,为更具有生物安全性流感疫苗的研发奠定了基础。
- 马磊耿兴良苏杨起杨家方常亚军段男邹俊如刘圆圆刘婧戴宗祥李卫东廖国阳
- 关键词：无血清培养VERO细胞
- 微量动态显色法定量检测EV71灭活疫苗内毒素含量的可行性被引量：1
- 2023年
- 目的研究微量鲎试剂动态显色法定量检测肠道病毒71型灭活疫苗(inactivated enterovirus 71 vaccine,iEV71)内毒素含量的可行性。方法使用微量鲎试剂动态显色法,进行标准曲线可靠性验证、干扰试验及3批成品测定,同时与凝胶法检测结果比对。结果标准曲线可靠性验证线性范围为0.0050~5.0000内毒素单位(endotoxin unit,EU)/ml,标准曲线决定系数为0.999,线性良好;干扰试验结果显示,供试品稀释10倍加入0.5 EU/ml标准内毒素测定回收率,回收率为94.4%,满足回收率50%~200%的要求。说明该稀释倍数下供试品对反应无干扰。另外,3批成品检测结果均符合标准限要求,且与凝胶法检测结果一致。结论微量鲎试剂动态显色法可用于iEV71成品内毒素含量的定量检测。
- 常亚军赵王丽葛绕玲乔燕杨宝嘉段男易力易力
- MF59佐剂对肠道病毒71型灭活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响
- 2015年
- 目的探讨MF59佐剂对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分成10组:MF59佐剂+不同含量EV71灭活抗原(50 EU、100 EU)组、Al(OH)3佐剂0.5 mg+不同含量EV71灭活抗原(50 EU、100 EU)组和PBS阴性对照组,每组10只,分别经小鼠后肢肌肉和腹腔注射,200μl/只,共免疫2次,间隔4周(0、28 d)。分别于初免和加强免疫后28 d,采集小鼠尾静脉血,分离血清,采用微量中和试验法检测小鼠血清抗体水平。结果除阴性对照组外,各组小鼠血清抗体阳转率及中和抗体GMT值均随免疫剂量和免疫时间的延长呈升高趋势。初免后28 d,抗原含量为50 EU(低剂量)和100 EU(高剂量)各组中和抗体GMT均较低,组间差异均无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后28 d,低剂量各组小鼠血清中和抗体GMT与初免比较均略有升高(P>0.05);高剂量各组小鼠血清中和抗体GMT与初免比较均明显升高,其中MF59佐剂肌肉注射组血清中和抗体GMT值最高(274.40),显著高于铝佐剂肌肉注射组(P<0.05)。结论 MF59佐剂可显著增强EV71灭活疫苗诱导小鼠的体液免疫应答。
- 张雪梅吴忠香徐婧雯常亚军邓新强李宁徐小宁董少忠
- 关键词：体液免疫
- 兔抗新型冠状病毒血清制备中佐剂对抗体效价的影响
- 2023年
- 目的制备高效价兔抗新型冠状病毒血清并研究佐剂对抗体效价的影响.方法将9只新西兰兔随机分为a、b、c组,分别皮下注射新型冠状病毒混合弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂或单磷酰脂A佐剂进行免疫,0、28、42 d各免疫1次.每次免疫前及初次免疫后14 d于耳中央动脉采血,初次免疫后49 d经颈动脉采血,分离血清,进行中和抗体效价检测以及中和试验.结果经过整个免疫程序后,a、b、c组均能产生高效价抗血清,且a组(6144.00)最终产生的血清中和抗体效价高于b组(4437.33)和c组(3754.67);3组血清均可在中和试验中有效中和KMS2株新型冠状病毒,中和后培养细胞均未发生病变.结论3种不同佐剂疫苗在新西兰兔体内均可产生高水平的免疫应答.
- 胡云光英志芳英志芳殷安国殷安国常亚军李亚东易力常亚军
- 关键词：新型冠状病毒抗血清佐剂抗体效价
