张小丽
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HepG2、Hep3B细胞中肿瘤干细胞相关标志分子的表达被引量：4
- 2012年
- 目的富集培养肝癌干细胞,研究肝癌干细胞相关标志物CD90、CD133、八聚体4(Oct4)和ATP结合盒转运蛋白ABCG2在肝癌细胞HepG2、Hep3B中的表达,并初步分析其意义。方法使用流式细胞仪从肝癌细胞(检测HepG2、Hep3B两种细胞系)中分选肝癌干细胞并行无血清成球培养。设肝癌细胞组为对照组。单细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力。分别给予肝癌细胞及肝癌干细胞阿霉素处理,MTT法测阿霉素处理后各组细胞的存活率,Real-time PCR及Western blot分别检测各组细胞CD90、CD133、Oct4和ABCG2 mRNA及蛋白水平的表达。结果肝癌干细胞单个细胞增殖能力强于肝癌细胞,克隆形成分析显示培养第14天克隆形成率Hep3B细胞组低于Hep3B CSCs组[8/27(30%)vs 12/23(52%),P<0.05];HepG2细胞组克隆形成率也低于HepG2 CSCs组[7/38(18%)vs 9/26(35%),P<0.05]。用阿霉素处理肝癌细胞及肝癌干细胞48 h后,MTT法测定结果显示肝癌干细胞组细胞活性显著高于对照组(P<0.05):HepG2细胞组细胞活性为(38.17±6.92)%、HepG2 CSCs组为(69.88±5.43)%;Hep3B细胞组(50.16±4.89)%,Hep3B CSCs组为(78.53±7.86)%。Real-time PCR结果显示肝癌干细胞组中CD90、CD133、Oct4及ABCG2基因mRNA表达较亲代细胞组显著上调(P<0.05)。Western blot结果显示肝癌干细胞组Oct4及ABCG2蛋白水平显著上调,与亲代细胞组间表达差异有显著性(P<0.05)。结论肝癌干细胞相关标志CD90、CD133、Oct4及ABCG2均高表达于肝癌干细胞,并且Oct4及ABCG2基因的高表达有可能与肝癌干细胞耐药性相关。
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- 关键词：肝癌干细胞CD90OCT4ABCG2
- 肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受PI3K/Akt通路调节被引量：4
- 2013年
- 目的分离肝癌干细胞样细胞,初步探讨PI3K/Akt通路调节其对化疗药物阿霉素的敏感性。方法将人肝癌细胞株PLC、HepG2、Hep3B置于无血清条件培养基中培养,形成细胞球,选用PLC细胞株进行后续实验。采用流式细胞仪、克隆形成实验、SCID小鼠体内成瘤实验鉴定PLC细胞球(肝癌干细胞样细胞)的肿瘤干细胞特性。MTT法、流式细胞仪测定PLC细胞球对化疗药物阿霉素的敏感性。流式细胞仪分析加入PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002、阿霉素共同孵育细胞球后,其凋亡率的变化。Western blot法比较PLC细胞球、PLC贴壁细胞中p-Akt1(Ser473)蛋白分子表达量及加入抑制剂LY294002作用于细胞球后,p-Akt1(Ser473)、Akt1蛋白分子表达量的变化。结果肝癌干细胞标志物CD90在细胞球中的表达较贴壁细胞显著升高(P<0.01)。细胞球的克隆形成数目(123.00±28.48)为贴壁细胞(56.33±7.37)的2.18倍(P<0.05)。同样细胞数接种于SCID小鼠皮下7周后,细胞球的致瘤率明显大于贴壁细胞。以5μg/mL的阿霉素分别处理细胞球和贴壁细胞48 h后,细胞球的增殖率明显高于贴壁细胞[(71.83±12.30)%vs(45.68±5.95)%,P<0.05],凋亡率显著低于贴壁细胞[(11.73±3.77)%vs(41.22±6.73)%,P<0.01],而以阿霉素5μg/mL和LY294002共同孵育细胞球后,其凋亡率[(35.44±6.65)%]显著增加(P<0.01)。Western blot检测到细胞球的p-Akt1(Ser473)蛋白分子表达量显著高于贴壁细胞(P<0.01),加入抑制剂LY294002处理细胞球后,p-Akt1(Ser473)蛋白表达量明显降低(P<0.05),Akt1的表达量无明显变化(P>0.05)。结论肝癌干细胞样细胞对化疗药物阿霉素具有耐药性,其耐药机制与Akt信号通路第473位点磷酸化Akt1分子有关。
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- 关键词：肝细胞癌肿瘤干细胞表柔比星耐药性PI3K/AKT
