张继增
- 作品数：6 被引量：0H指数：0
- 供职机构：北京市结核病胸部肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肺结核患者环腺苷酸反应元件结合蛋白与γ-干扰素基因启动子区的关系
- 2010年
- 目的 研究活动性肺结核患者环腺苷酸反应元件结合蛋白（CREB）与γ-干扰素基因近端启动子的关系.方法 2007年1-12月北京胸科医院结核科收治的25例肺结核患者（肺结核组）和18例PPD阳性健康人（对照组）为研究对象.分离外周血中CD3＋细胞,采用凝胶电泳迁移率变化（EMSA）和竞争性EMSA分析CREB及γ-干扰素基因近端启动子结合情况,染色质免疫共沉淀（ChIP）技术研究MTB抗原在体内状态下能否诱导CREB产生并与γ-干扰素基因近端启动子结合.Western blot法检测CREB表达水平及MTB抗原诱导CREB磷酸化.结果 肺结核组25例中有18例缺失低迁移率条带,说明其缺少与γ-干扰素基因近端启动子结合的蛋白,竞争性EMSA试验结果证实该蛋白复合体中含CREB;对照组中10例有204 bp的PCR产物,肺结核组中有12例缺失该产物,提示其缺少与γ-干扰素基因近端启动子结合的CREB;肺结核组有20例未见CREB表达,且所有病例CD3＋T细胞在MTB抗原刺激时不能诱导磷酸化CREB蛋白的产生.结论 CREB蛋白可与γ-干扰素基因近端启动子区结合,肺结核患者缺少与γ-干扰素基因近端启动子结合的CREB蛋白.
- 刘洋张继增王甦民傅瑜张宗德
- 关键词：结核CAMP反应元件结合蛋白质
- 结核分枝杆菌glcB基因原核表达载体的构建、表达和纯化
- 2009年
- 目的构建结核分枝杆glcB基因原核表达载体，并进行表达，纯化。方法用PcR扩增结核分枝杆菌glcB基因，并克隆入pTA2质粒。测序正确后，再亚克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：glcB重组体。结果以重组体转化BL21（DE3）后，经0．4mM异丙基硫代-β．D．半乳糖苷（IPTG）诱导，表达出分子量为92KD重组蛋白。SDS—PAGE分析显示，IPTG诱导4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中，表达量占全菌蛋白质的50％。经Ni-NTA柱纯化，获得纯度为90％的重组蛋白。结论成功地构建原核表达载体pET30a（＋）：glcB，并获得GIcB重组蛋白，为血清学诊断活动性结核病奠定了基础。
- 陈曦贾红彦古淑香李自慧刘忠泉郑小静邢爱英杜博平张继增张宗德
- 关键词：分枝杆菌
- 肺结核患者环腺苷酸反应元件结合蛋白与Y-干扰素基因启动子区的关系
- 2010年
- 目的研究活动性肺结核患者环腺苷酸反应元件结合蛋白（CREB）与Y-干扰素基因近端启动子的关系。方法2007年1—12月北京胸科医院结核科收治的25例肺结核患者（肺结核组）和18例PPD阳性健康人（对照组）为研究对象。分离外周血中CD3＋T细胞，采用凝胶电泳迁移率变化（EMSA）和竞争性EMSA分析CREB及Y-干扰素基因近端启动子结合情况，染色质免疫共沉淀（ChIP）技术研究MTB抗原在体内状态下能否诱导CREB产生并与Y-干扰素基因近端启动子结合。Westernblot法检测CREB表达水平及MTB抗原诱导CREB磷酸化。结果肺结核组25例中有18例缺失低迁移率条带，说明其缺少与Y-干扰素基因近端启动子结合的蛋白，竞争性EMSA试验结果证实该蛋白复合体中含CREB，对照组中10例有204bp的PCR产物，肺结核组中有12例缺失该产物，提示其缺少与Y-干扰素基因近端启动子结合的CREB；肺结核组中20例未见CREB表达，且所有病例CD3＋T细胞在MTB抗原刺激时不能诱导磷酸化CREB蛋白的产生。结论CREB蛋白可与Y-干扰素基因近端启动子区结合，肺结核患者缺少与Y-干扰素基因近端启动子结合的CREB蛋白。
- 刘洋张继增王甦民傅瑜张宗德
- 结核分枝杆菌特异性分泌蛋白的原核表达、纯化和免疫原性分析
- 2009年
- 目的构建结核分枝杆菌rv1837c、rv3803c基因原核表达重组质粒,进行表达、纯化,并分析其免疫原性。方法PCR扩增结核分枝杆菌H37Rv rv1837c、rv3803c基因,并克隆入pTA2质粒。测序正确后,再亚克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c重组体。然后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),经0.4mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导;分别与组氨酸标签单克隆抗体及结核患者血清进行Western blot,鉴定Rv1837c、Rv3803c重组蛋白。经镍离子螯和氮川乙酸-组氨酸标签亲和树脂纯化,将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,取兔血清与纯化蛋白通过Western blot方法,检测家兔血清中的抗体。结果pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c重组体表达相对分子质量为92000及38000的重组蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中,表达量分别占全菌蛋白质的30%及50%。获得纯度为90%的重组蛋白。纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性。结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv1837c、pET30a(+):rv3803c,并获得Rv1837c及Rv3803c重组蛋白,为血清学诊断活动性结核病奠定了基础。
- 陈曦古淑香贾红彦李自慧郑晓静刘忠泉邢爱英杜博平张继增张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌mpt51基因原核表达载体的构建、表达和纯化
- 2009年
- 目的 构建结核分枝杆菌mpt51基因原核表达载体并进行表达、纯化。方法用PCR扩增结核分枝杆菌mpt51基因，并克隆人pTA2质粒。测序正确后，再亚克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：rapt51重组体。结果以pET30a（＋）：mpt51转化BL21（DE3）后，经0．4mmol／I．异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导，重组菌表达出相对分子质量为38000的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导4小时重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中，表达量占全菌蛋白质的30％。经Ni—NTA树脂纯化，获得纯度为90％的重组蛋白。结论成功地构建原核表达载体pET30a（＋）：mpt51，并获得MPT51重组蛋白，为血清学诊断活动性结核病奠定了基础。
- 陈曦古淑香贾红彦李自慧郑小静刘忠泉邢爱英杜博平张继增张宗德
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌glcB基因原核表达质粒的构建、表达和纯化
- 2009年
- 目的构建结核分枝杆菌glcB基因原核表达工程株,并进行表达、纯化。方法用PCR扩增结核分枝杆菌glcB基因,并克隆入pTA2质粒。测序正确后,再亚克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):glcB重组体,转化宿主菌大肠埃希菌BL21(DE3)。结果结核分枝杆菌glcB基因工程株经0.4 mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,表达出相对分子质量为92 kD重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4 h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中,表达量占全菌蛋白质的50%。经Ni-NTA柱纯化,获得纯度为90%的重组蛋白。结论成功地构建了结核分枝杆菌glcB基因工程表达株,并获得GlcB重组蛋白,为研究新型血清学诊断活动性结核病奠定了基础。
- 陈曦贾红彦古淑香李自慧刘忠泉郑晓静邢爱英杜博平张继增张宗德
- 关键词：重组蛋白质类
