徐志庆
- 作品数：13 被引量：57H指数：5
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- 不同刺激剂对健康人和结核患者外周血T细胞产生γ干扰素和肿瘤坏死因子-α的影响被引量：1
- 2016年
- 目的：检测健康人和结核患者外周血经不同刺激剂刺激后T细胞亚群产生γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的变化。方法：12名健康人和12例结核患者的外周血单个核细胞用佛波醇脂（PMA）＋钙离子霉素（IM）、结核杆菌耐热抗原（Mtb-HAg）、植物血凝素（PHA）刺激,莫能霉素阻断,流式细胞仪检测产生IFN-γ和TNF-α的T细胞亚群比例。结果：PMA＋IM刺激健康人外周血αβT细胞产生IFN-γ的比例明显高于结核患者（P〈0.01）;PMA＋IM、Mtb-HAg和PHA刺激健康人外周血γδT细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者（P〈0.05～P〈0.01）。PMA＋IM和PHA刺激健康人外周血αβT细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者（P〈0.05）;PMA＋IM和PHA刺激健康人外周血γδT细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者（P〈0.05）。结论：经不同刺激剂刺激后,健康人γδT细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者γδT细胞产生IFN-γ的比例。经PMA和PHA刺激后,健康人αβT和γδT细胞产生TNF-α的比例高于结核患者。
- 徐志庆夏惠李柏青
- 关键词：Γ-干扰素流式细胞仪
- 结核分枝杆菌蛋白抗原刺激人γδT细胞的活性单位的计算方法被引量：2
- 2013年
- 目的以检测和计算结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)蛋白抗原激活人γδT细胞增殖的活性单位为指标,比较不同提取分离方法制备的Mtb抗原制剂激活人γδT细胞的活性效价。方法培养的Mtb-H37Ra菌株通过高温和超声方法处理,分别获取Mtb耐热抗原(Mtb-HAg)和超声处理抗原(Mtb-SoAg),采用超滤离心管(3 K,10 K,30 K)和快速液相蛋白层析(FPLC)分组和分离,获取不同相对分子质量组分的抗原。采集健康成年人外周血分离获取PBMC,加入不同质量浓度梯度的Mtb蛋白抗原或其分离组分,并加IL-2培养12 d后荧光抗体染色,流式细胞仪检测和分析扩增T细胞中γδT细胞的比例,以扩增γδT细胞最高比例的50%(EC50)所对应的质量浓度计算为1个活性单位。结果用活性单位计算法分析发现,某批次的Mtb-HAg(591μg/ml)刺激γδT细胞扩增的EC50为1.4μg/ml,计算其活性单位为0.71 U/μg;某批次低分子Mtb-SoAg(3 K～10 K)(221μg/ml)的EC50为0.8μg/ml,其活性单位为1.25 U/μg。结论通过比较Mtb蛋白抗原不同批次及其不同组分在不同质量浓度下刺激γδT细胞扩增数量的活性,可以计算获得相应的活性单位,为检测Mtb蛋白抗原制剂刺激γδT细胞增殖活性建立了标准化的计算方法。
- 孙悝陈勇徐志庆陈立李柏青
- 关键词：结核分枝杆菌ΓΔT细胞活性单位
- NLRP3炎症小体与真菌感染被引量：5
- 2017年
- 在真菌感染时,宿主免疫细胞通过模式识别受体(PRR)识别β-葡聚糖等多种病原体相关分子模式(PAMP)引发抗真菌天然免疫。NLR家族中的NLRP3与ASC和caspase-1共同组成NLRP3炎症小体,参与或调控真菌感染。该文就近年来关于NLRP3炎症小体在真菌感染中的作用作一综述。
- 徐志庆吴大强邵菁汪天明汪长中
- 关键词：白念珠菌天然免疫模式识别受体病原体相关分子模式
- 结核分枝杆菌抗原和TCRγδ抗体诱导人γδT细胞分化并产生IL-17被引量：3
- 2015年
- 目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原（MTB—HAg）和抗T细胞受体γδ单克隆抗体（TCRγδ／5mAb）在刺激人γδT细胞诱导分化产生IL-17中的作用。方法健康人外周血单个核细胞经过免疫磁珠分选得到纯化的γδT细胞后，加入MTB-HAg或包被的TCRγδ 5mAb，再加或不加CD28mAb进行刺激，同时加或不加IL-17极化细胞因子组合（CK）（IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23），极化诱导培养10—12d。然后收集诱导极化培养的γδT细胞，经佛波醇酯和离子霉素再刺激6h后，用ELISPOT法检测产生IL—17的细胞数。结果经刺激和诱导分化培养的γδT细胞用ELISPOT法检测产生IL-17的细胞数发现，TCRγδ 8mAb联合CK组与TCRγδ／8mAb组相比明显增加，TCRγδ mAb联合CD28mAb组与TCRγδ mAb同时联合CD28mAb和CK组相比明显减少。TCRγδ 8mAb同时联合CD28mAb和CK组与TCRγδ mAb联合CK组相比明显增多。MTB—Hag同时联合CD28mAb和CK组与TCRγδ mAb同时联合CD28mAb和CK组相比显著减少，但与MTB—HAg联合CD28mAb组相比明显增多。结论诱导Th17分化的CK（IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23）也能诱导人γδT细胞分化产生IL-17，TCRγδ 8mAb刺激γδT细胞增殖后诱导分化产生IL—17的活性比MTB—HAg更强。另外，CD28在TCRγδ 8mAb激活γδT细胞诱导产生IL-17的过程中也有重要作用。
- 陈立夏惠汪洪涛盛玲玲徐志庆孙垚唐洁李柏青
- 关键词：结核分枝杆菌ΓΔT细胞IL-17
- 盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响被引量：5
- 2021年
- 探讨盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。以微量液基稀释法检测盐酸小檗碱对白念珠菌标准株与临床株的最低抑菌浓度(MIC);spot assay检测白念珠菌落形成;XTT法检测白念珠菌丝代谢;荧光显微镜观察白念珠菌丝活力;扫描电镜观察白念珠菌丝形态;透射电镜观察白念珠菌丝细胞壁结构;流式细胞术检测白念珠菌细胞壁β-葡聚糖暴露程度;qRT-PCR法检测白念珠菌丝特异性基因ECE1及β-葡聚糖合酶调控基因FKS1和FKS2的表达。结果显示,盐酸小檗碱对白念珠菌临床株及标准株的MIC为64~128μg·mL^(-1);512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱干预下能抑制白念珠菌落生长,64~512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能抑制菌丝代谢,512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能抑制白念珠菌丝活力,256~512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能抑制形态转化,512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能明显损伤细胞壁结构,128~512μg·mL^(-1)盐酸小檗能促进细胞壁β-葡聚糖暴露,512μg·mL^(-1)盐酸小檗碱能下调白念珠菌丝特异性基因ECE12.72倍及β-葡聚糖合成酶调控基因FKS1与FKS2分别3.49,3.26倍。研究表明,一定浓度的盐酸小檗碱可能通过下调白念珠菌丝特异性基因及β-葡聚糖合成酶相关基因的表达,从而破坏白念珠菌细胞壁的结构并促使β-葡聚糖暴露,进而影响整个细胞壁的完整性。
- 杨玉王亚东王艳王艳吴大强徐志庆邵菁吴大强
- 关键词：盐酸小檗碱白念珠菌菌丝Β-葡聚糖
- 白头翁汤正丁醇提取物主要组分对中性粒细胞趋化抑制作用的比较研究被引量：4
- 2021年
- 比较白头翁汤正丁醇提取物主要组分秦皮甲素、盐酸小檗碱、白头翁皂苷B4对中性粒细胞趋化抑制作用的影响。将HL60细胞培养于配制好的1640完全培养基中培养,按2×105个/mL细胞密度置于6孔板中,每孔4 mL,按体积分数1.3%加入DMSO培养5 d,于倒置显微镜检查细胞形态变化;流式细胞术分析DMSO诱导后细胞CD11b的表达;采用CCK8法检测秦皮甲素、盐酸小檗碱、白头翁皂苷B4对DMSO诱导后细胞增殖的影响;采用Transwell法检测秦皮甲素、盐酸小檗碱、白头翁皂苷B4对DMSO诱导后细胞迁移的影响;采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测秦皮甲素,盐酸小檗碱,白头翁皂苷B4对DMSO诱导后细胞F-actin的产生及其极化的调节;Western blot检测PI3K/Akt的表达。结果表明,HL60细胞经DMSO诱导后,细胞呈典型的中性粒细胞形态。流式细胞术分析表明诱导后细胞CD11b的表达水平明显增加。100μg·mL^(-1)秦皮甲素,8μg·mL^(-1)盐酸小檗碱,80μg·mL^(-1)白头翁皂苷B4可有效地抑制中性粒细胞的迁移,明显降低F-actin的表达;其中盐酸小檗碱可显著地降低磷酸化PI3K/Akt蛋白水平。上述结果表明,BAEB 3种主要组分对中性粒细胞趋化均有抑制作用,其中盐酸小檗碱的作用最明显,该作用可能与抑制F-actin及PI3K/Akt通路相关。
- 云云姜晶晶王亚东王亚东张梦翔徐志庆邵菁张梦翔
- 关键词：秦皮甲素白头翁皂苷B4中性粒细胞趋化
- 白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌细胞壁抑制作用研究被引量：4
- 2018年
- 目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of BaiTouWeng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞壁的抑制作用。方法以spot assay检测BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;流式细胞仪和酶标仪检测BAEB对白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖及几丁质变化;qRT-PCR检测白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖合成相关基因FKS-1及几丁质合成相关基因CHS1、CHS2、CHS3、CHS8的表达;透射电镜观察BAEB对白念珠菌细胞壁结构影响。结果 BAEB干预后白念珠菌活性降低,256、512、1 024μg/mL BAEB组白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖暴露与几丁质暴露逐渐增多(P<0.05);1 024μg/mL BAEB干预组FKS1、CHS1、CHS2、CHS3、CHS8分别下调5.57、2.96、3.29、4.47、3.00倍;透射电镜观察BAEB干预后白念珠菌细胞壁结构有破损。结论 BAEB可通过增加β-1,3-葡聚糖和几丁质的暴露,抑制β-1,3-葡聚糖、几丁质及其生物合成相关基因的表达,进而破坏白念珠菌细胞壁完整性。
- 胡唐玲施高翔徐志庆段强军邵菁汪天明吴大强汪长中
- 关键词：白念珠菌细胞壁Β-1,3-葡聚糖几丁质
- 白头翁汤正丁醇提取物抑制白念珠菌细胞膜被引量：9
- 2017年
- 该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞膜的抑制作用。以Spot assay观察BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;酶标仪检测BAEB干预后白念珠菌细胞内渗透压变化;荧光显微镜观察BAEB对白念珠菌细胞膜通透性的影响;高效液相检测白念珠菌细胞膜麦角甾醇的含量;q RT-PCR法检测细胞膜麦角甾醇生物合成相关基因的表达。结果显示,256,512,1 024 mg·L^(-1)BAEB干预下白念珠菌活性逐渐降低;512,1 024 mg·L^(-1)BAEB组白念珠菌胞内甘油含量显著性增多(P<0.05),与白念珠菌胞内渗透压相关的基因HOG1分别下调9.1,9.3,5.5倍;512,1 024 mg·L^(-1)BAEB组白念珠菌红色荧光细胞明显增多;1 024 mg·L^(-1)BAEB干预后麦角甾醇峰面积为35.884 95,有显著性差异(P<0.05);1 024 mg·L^(-1)BAEB干预组ERG1,ERG2,ERG3,ERG4,ERG5,ERG6,ERG10,ERG11,ERG13,ERG24,ERG25,ERG251,ERG26与UPC2分别下调6.58,4.89,4.15,9.24,3.41,9.84,3.08,7.50,5.53,5.90,2.45,3.25,1.98,10.07倍。BAEB可通过抑制麦角甾醇及其生物合成相关基因的表达,进而抑制白念珠菌细胞膜完整性。
- 胡唐玲云云徐志庆段强军邵菁汪天明汪长中
- 关键词：白念珠菌细胞膜麦角甾醇
- 荧光定量RT-PCR技术检测健康人外周血γδT细胞细胞受体分子Vδ1～8亚群分布
- 2015年
- 目的：检测和分析健康成人外周血中γδT细胞的T细胞受体（ TCR）分子Vδ1~8亚群分布情况。方法：采集16名健康成人外周血，荧光定量反转录聚合酶链式反应检测其γδT细胞TCR分子Vδ1~8亚群的基因相对表达量，计算各亚群所占百分比。结果：健康成人外周血γδT细胞TCR分子Vδ1~8亚群的比例分别为：Vδ1（7.19±0.33）%、Vδ2（54.27±7.9）%、Vδ3（20.23±0.03）%、Vδ4（3.80±0.02）%、Vδ5（2.08±0.02）%、Vδ6（0.81±0.25）%、Vδ7（7.21±0.02）%、Vδ8（4.41±0.04）%。 Vδ2亚群均明显高于其他亚群（P〈0.01）。结论：我国健康成年人外周血γδT细胞TCR分子Vδ1~8亚群分布由多到少依次为Vδ2〉Vδ3〉Vδ1〉Vδ8〉Vδ7〉Vδ4〉Vδ5〉Vδ6。
- 孙垚汪洪涛陈立徐志庆宋传旺李柏青
- 关键词：ΓΔT细胞
- 基于NLRP3炎症小体研究白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植下小鼠溃疡性结肠炎的作用机制被引量：12
- 2022年
- 目的研究白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对白念珠菌异常定植下的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用,以及对Dectin-1/脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法将105只C57BL/6小鼠随机分为对照组、DSS组、DSS+白念珠菌组及BAEB低、中、高剂量(20、40、80 mg/kg)组和美沙拉嗪(200 mg/kg)组。对照组小鼠每日自由饮水;DSS组予3%DSS溶液,自由饮用连续7 d;其他组在DSS组基础上,在第1、3、5、7天ig白念珠菌(1×108 CFU/只)。第8天开始分别ig相应药物,1次/d,连续7 d。每天称定小鼠质量,观察一般状态,收集粪便,采用平板培养法检测粪便真菌载荷。末次给药次日,处死小鼠,测量结肠长度,苏木素-伊红(HE)染色法进行结肠组织学分析;ELISA法检测结肠组织炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18水平;免疫组化法检测结肠组织Occludin和闭锁连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)表达;Western blotting检测结肠组织Dectin-1、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、Syk、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cleaved cysteinasparate protease-1,cleaved Caspase-1)和NLRP3蛋白表达。结果与对照组和DSS组比较,DSS+白念珠菌组小鼠粪便培养出更多的白念珠菌(P<0.01);结肠黏膜损伤程度严重(P<0.01);结肠组织炎症因子IL-1β、IL-18水平明显升高(P<0.01);结肠组织Occludin和ZO-1蛋白表达明显下降(P<0.05);结肠组织NLRP3、NF-κB和Dectin-1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),ASC、cleaved Caspase-1和Syk蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01)。与DSS+白念珠菌组相比,BAEB组小鼠肠道白念珠菌显著减少(P<0.01);结肠组�
- 王亚东徐志庆徐志庆张梦翔夏丹邵菁张梦翔
- 关键词：白念珠菌溃疡性结肠炎
