本研究利用全细胞膜片钳技术探索丙泊酚对丘脑室旁核(paraventricular thalamus,PVT)谷氨酸能神经元活性的影响及作用机制。在8周龄C57BL/6J小鼠急性脑片上,用单细胞逆转录PCR技术鉴定PVT神经元类型。记录丙泊酚给药前、后和洗脱后PVT神经元的放电频率(firing frequencies before,during,and after,F_(B),F_(D)and F_(W))及给药前、后的膜电位(membrane potential before and during,MPB and MPD)。探索木防己苦毒素(picrotoxin,PTX)阻断γ-氨基丁酸A型(gamma-aminobutyric acid type A,GABAA)受体后对丙泊酚作用的影响,以及丙泊酚对PVT神经元上自发和微小抑制性突触后电流(spontaneous and miniature inhibitory postsynaptic currents,sIPSCs and mIPSCs)的影响。动物实验已获得复旦大学上海医学院动物实验伦理委员会批准。结果显示,在脂肪乳组和2μmol·L^(-1)丙泊酚组,F_(B)、F_(D)、F_(W)之间无统计学差异。在5、10、20μmol·L^(-1)丙泊酚组,FD与FB相比显著下降(P<0.01),F_(W)与FD相比显著升高(P<0.01),且这3个浓度组之间的抑制程度有显著差异(P<0.01)。MPD与MPB相比仅在20μmol·L^(-1)丙泊酚组有显著下降(P<0.01)。加入PTX后10μmol·L^(-1)丙泊酚不能抑制放电频率。10μmol·L^(-1)丙泊酚使sIPSCs的衰减时间延长(P<0.01),且使mIPSCs的衰减时间延长(P<0.05),幅度升高(P<0.01)。以上结果表明,丙泊酚呈浓度依赖和可逆性地抑制PVT谷氨酸能神经元活性,这种作用可能主要由突触后GABAA受体介导。
目的:本研究应用蛋白质组学技术建立化疗敏感性不同的结直肠癌组织总蛋白双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图谱,并鉴定部分差异表达蛋白,以发现与结直肠癌化疗敏感性有关的蛋白。方法:收集临床诊断为晚期结直肠癌的病例,肠镜活检获取新鲜结直肠癌标本后液氮保存备用,根据肿瘤药物敏感实验分为化疗高敏感组和化疗低敏感组。提取组织总蛋白,采用双向凝胶电泳技术得到各组凝胶图谱;采用PD-quest7.3软件进行图像的合成、对比和差异分析,识别化疗高敏感组和化疗低敏感组之间差异表达的蛋白斑点;选取差异蛋白质点,胶内酶解后行肽指纹图分析及网上数据库检索,鉴定差异蛋白质;应用Western印迹法检测部分差异蛋白的表达情况。结果:建立了化疗高敏感组和化疗低敏感组的双向凝胶电泳图谱,多数蛋白质点集中于pH4～8、相对分子质量为(20～100)×103。高敏感组和低敏感组的电泳图谱中平均蛋白质点数分别为(842±23)个和(793±19)个,2组平均匹配率为90.7%,2组间差异表达蛋白质点数为(79.00±13.56)个;选择30个差异蛋白质点进行质谱分析,经数据库查询鉴定出9个差异表达蛋白。结论:在化疗敏感性不同的结直肠癌中存在蛋白质表达的差异,这些差异表达蛋白可能与化疗敏感性有关,并可能用于化疗敏感性的预测。
