李丽娥
- 作品数：19 被引量：59H指数：5
- 供职机构：苏州大学医学部更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目江苏省科委资助项目江苏省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>
- 人Epsilon干扰素(hIFN-ε)的基因克隆和表达
- 目的:构建表达hIFN-ε基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达具有抗病毒活性的rhIFN-ε蛋白。方法:用TNFα刺激HeLa 人宫颈癌细胞,抽提总RNA,经PT-PCR 获得全长cDNA,与pcDNA3.1/m...
- 马丽丽盛伟华谢宇锋缪竞诚王金志庄文卓李丽娥杨吉成
- 关键词：克隆COS-7细胞
- 文献传递
- 抗病毒蛋白MxA的诱导和检测方法的实验研究被引量：9
- 2002年
- 目的 研究抗病毒蛋白ＭｘＡ的表达及其活性。方法用ＩＦＮα２ｂ或３型腺病毒（Ａ＿３）分别对ＷＩ－３８细胞或人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）作用 １２或２４ ｈ，并用Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ法或ＦＡＣＳ法，分别对Ｍ蛋白的表达进行定性和定量检测。采用微量细胞病变抑制法，对重组的ＭｘＡ和ＩＦＮα２ｂ进行抗病毒效应实验。结果 （１）低浓度的 ＩＦＮα２ｂ（＞ １×1０～＃ＩＵ／Ｌ）和Ａｄ＿３（＞２００ ＴＣＩＤ＿５０），均可诱导相应细胞表达 ＭｘＡ；（２）１０μｇ／Ｌ ＭｘＡ可抵抗２０个 ＴＣＩＤ＿（５０）的 ＨＳＶ－Ｉ、Ｐｏｌｉｏ． Ｖ感染 Ｖｅｒｏ细胞、Ａｄ＿３感染ＨｅＬａ细胞，抵抗２００个ＴＣＩＤ＿（５０）的ＶＳＶ感染Ｗｉｓｈ细胞。结论ＭｘＡ只能由干扰素（ＩＮＦα2ｂ）或病毒诱导产生，其具有广谱的抗病毒活性。
- 杨吉成盛伟华李丽娥贡海蓉徐仑
- 关键词：MXA基因表达调控腺病毒
- 骨髓基质细胞的体外培养和向成骨及软骨分化的实验研究被引量：7
- 2002年
- 目的研究骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）的成骨及软骨分化功能。方法 采用细胞静置贴壁培养法，体外培养了兔和儿童的ＢＭＳＣ，用传至２－３代兔ＢＭＳＣ和Ⅱ型胶原联合治疗兔膝关节软骨缺损；采用成骨诱导培养法研究儿童ＢＭＳＣ的成骨效应。结果（１）Ⅱ型胶原和ｂＦＧＦ对兔ＢＭＳＣ的贴壁和生长是有效的。（２）用兔ＢＭＳＣ和Ⅱ型胶原治疗１２周后，能使兔膝关节软骨缺损获得恢复，其软骨细胞分化明显。（３）用成骨诱导培养法，可使儿童ＢＭＳＣ骨钙素分泌水平比常规对照组升高８～１０倍，并可见有典型的成骨化的黑色矿化细胞区。结论骨髓基质细胞具有成骨和软骨分化功能。
- 盛伟华杨吉成李丽娥董宁征王晓东戴连生
- 关键词：骨髓基质细胞成骨分化软骨分化
- rhIL-18在不同原核表达系统中的表达和活性比较被引量：2
- 2006年
- 目的研究rhIL-18包涵体、可溶性(His融合型)两种形式蛋白的生物学活性。方法从已构建的pBV220-IL-18重组质粒中双酶切获取IL-18基因,回收后重组至pLHis质粒构建重组载体。42℃热诱导pBV220-IL-18表达,产生rhIL-18包涵体,IPTG诱导pLHis-IL-18表达,产生可溶性rhIL-18蛋白。两者分别刺激人外周血单个核细胞,ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。结果两种重组表达载体均表达产生了rhIL-18,且均可刺激人PMBC上清产生IFN-γ,可溶性rhIL-18刺激人外周血产生IFN-γ的能力高于包涵体形式的rhIL-18。结论可溶性rhIL-18具有比包涵体形式的rhIL-18更强的活性,这为IL-18原核表达基因工程药物的开发提供了新思路。
- 张海峰李丽娥盛伟华缪竞诚谢宇锋王金志杨吉成
- 关键词：IL-18包涵体可溶性蛋白IFN-Γ
- 人脑源性神经营养因子成熟肽基因克隆及表达
- 2004年
- 目的 构建表达人脑源性神经营养因子hBDNF的基因工程菌。方法 人工合成 1对含EcoRI和BamHI限制性酶切位点的特异引物 ,以人血白细胞基因组DNA为模板。应用PCR技术扩增hBDNF成熟肽基因 ,用A T克隆法与 pUCm T载体连接后 ,再定向插入原核表达载体 pBV2 2 0 ,将重组体pBV2 2 0 hBDNF转化大肠杆菌DH5a,经 4 2℃热诱导表达。结果 经限制性酶切和DNA测序证明重组入载体中的DNA片段确为hBDNF ,并成功表达出hBDNF蛋白。结论 该研究成功地克隆出hBDNF基因编码序列并在大肠杆菌中获得稳定表达 ,表达效率达 2 5 % ,为今后生物学活性的研究和神经系统疾病的基因治疗奠定了基础。
- 张虎杨吉成盛伟华缪竞诚李丽娥王金志白艳艳谢宇锋
- 关键词：脑源性神经营养因子PCR基因表达
- 重组人IL-18在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤作用被引量：2
- 2006年
- 目的:获取rhIL-18原核表达产物并研究其活性。方法:用本室构建的含基因重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌DH5α,经42℃热诱导表达和包涵体提取纯化后获取rhIL-18蛋白;采用ELISA试剂盒检测rhIL-18刺激PBMC分泌IFN-γ的活性及MTT法检测其对NK细胞杀伤K562细胞自然杀伤活性;同时用荷瘤小鼠模型检测其体内抗瘤功能。结果:诱导含重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌DH5α后,蛋白电泳显示出一条相对分子量(Mr)为18 000的蛋白条带;10μgrhIL-18蛋白体外刺激PBMC后,其分泌IFN-γ的能力与对照组相比提高了8倍,细胞毒性提高3倍;同时rhIL-18蛋白能明显抑制肿瘤生长和延长荷瘤鼠生存期。结论:获得了有免疫调节功能和抗肿瘤活性的rhIL-18蛋白,为今后IL-18重组产物的研制和开展肿瘤的生物治疗提供了实验依据。
- 张海峰盛伟华缪竞诚谢宇锋李丽娥马丽丽庄文卓杨吉成
- 关键词：白介素18免疫调节功能抗肿瘤活性
- 人脑源性神经营养因子成熟肽基因克隆及表达
- 目的:构建表达人脑源性神经营养因子的基因工程菌。方法:人工合成一对含EcoRI 和BamHI 限制性酶切位点的特异引物,以健康成人末梢白细胞基因组DNA 作为模板。应用PCR 技术扩增hBDNF 成熟肽基因,用A-T 克...
- 张虎杨吉成盛伟华缪竞诚李丽娥王金志白艳艳谢宇锋
- 关键词：脑源性神经营养因子
- 文献传递
- 人β-NGF基因在CHO细胞中表达的生物学活性及分离纯化被引量：9
- 2003年
- 目的 :检测人 β NGF基因转染CHO细胞后培养上清中所表达的 β NGF的生物学活性及分离纯化。 方法 :采用脂质体介导的真核细胞转染 ,运用形态学观察和MTT法进行检测做定性定量分析 ,蛋白观察用SDS PAGE电泳。结果 :转染 β NGF基因的CHO细胞可分泌能促进PC12细胞生长的活性 β NGF ,且可透过血脑屏障。 结论 :转染 β NGF基因的CHO细胞所分泌的 β NGF ,接近自然合成的蛋白 ,具有较高生物学活性 ,为NGF的生物制药奠定了实验基础。
- 白艳艳杨吉成缪竞诚盛伟华韩晓枫李丽娥谢宇锋周忆新
- 关键词：CHO细胞生物学活性纯化
- 人Epsilon干扰素(hIFN-ε)的基因克隆和表达
- 目的:构建表达hIFN-ε基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达具有抗病毒活性的rhIFN-ε蛋白.方法:用TNFα刺激LeLa人宫颈癌细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得全长cDNA,与pcDNA3.1/myc...
- 马丽丽盛伟华谢宇锋缪竞诚王金志庄文卓李丽娥杨吉成
- 关键词：人干扰素基因克隆真核表达载体抗病毒活性
- 文献传递
- 人β-NGF基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2004年
- 目的 为 β NGF的基因制药选择一种新方法。 方法 直接从人血细胞基因组DNA中PCR扩增出 β NGF基因片段 ,将构建的重组体 pBV2 2 0 β NGF转化大肠杆菌DH5α,并将筛选的阳性克隆通过 4 2℃诱导表达。结果 经限制酶酶切电泳和DNA测序证实 ,确为 β NGF全长序列 (约 380bp) ;全菌经SDS PAGE电泳显示表达了 β NGF蛋白。结论 成功克隆了 β NGF基因全长序列并在大肠杆菌中获稳定表达。
- 白艳艳杨吉成李丽娥盛伟华谢宇锋缪竞诚
- 关键词：神经生长因子大肠杆菌基因表达
