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大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶与tRNA^(Leu)的相互作用头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组(英文): 2003年; 第一部分:为得到大量的大肠杆菌tRNALeu1 和tRNALeu2 ,研究tRNA与亮氨酰 tRNA合成酶(LeuRS)的相互作用,用基因克隆的方法高表达并纯化了它们;测定了接受活力和被LeuRS催化的动力学常数;改进了RNA体外转录必需的T7RNA聚合酶的纯化方法,优化了转录条件,转录序列比文献值高 1 0倍.用体外转录方法得到了各种在接受茎突变的tRNALeu变种,研究了一个在CP1结构域插入 40个氨基酸残基的变种LeuRS A对tRNALeu2种等受体的识别,证明了tRNA Leu1 和tRNA Leu2 接受茎上的第一对硷基对是否摆动是LeuRS A识别的关键.　　第二部分:在大肠杆菌中高表达头孢菌素酰化酶基因 1 0倍以上.研究了它的α 亚基的N 端变化(LAEP →MGIP )对酶学动力学常数的影响.构建了带有不同抗菌素抗性和启动子的高表达质粒,研究了它们表达的特点,分析了这些质粒的不同用途.用含有编码该酶两个亚基的基因的相容质粒共转化的方法.研究了它们在体内的重组和前体的加工.研究结果表明,该酶可能属于一类新的N; 李勇王恩多; 关键词：大肠杆菌亮氨酰-TRNA合成酶相互作用

大肠杆菌等受体tRNA^(Leu)的T7 RNA聚合酶转录: 1999年; 用化学方法合成编码 2个大肠杆菌tRNALeu(tRNALeu1和tRNALeu2 )的基因和T7启动子 ,分别克隆到pUC1 9载体上 ,并在纯化的T7RNA聚合酶的体外转录系统中转录出不含修饰核苷酸的tRNALeu.在T7转录体系中 ,亚精胺对转录有负影响 .在最适转录条件下 ,可以得到有活力的RNA转录物的量是模板DNA的 2 5 0倍左右 .在大肠杆菌亮氨酰 tRNA合成酶的催化下 ,2种经体外转录产生的未修饰等受体tRNALeu(tRNALeu1和tRNALeu2 )的亮氨酸接受能力基本相同 ,但只有从体内纯化对应的tRNALeu的四分之一左右 ,表明修饰核苷酸在tRNALeu氨酰化过程中起着较为重要但非关键的作用 .; 李勇陈剑峰王恩多王应睐; 关键词：TRNA 大肠杆菌

戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶的蛋白质工程: 王恩多李勇陈剑峰郑勇刚姜卫红毛翔杨蕴刘赵国屏; 本发明公开了一种获取戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶基因的方法，目的是提供一种快速从土壤中获取戊二酰-7-氨基头孢烷酸(GL-7-ACA)酰化酶基因的方法。本发明所提供的方法是在提取土壤微生物的戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化...; 关键词：; 关键词：7-氨基头孢烷酸酰化酶蛋白质工程

带有氯霉素抗性的分泌高产戊二酰－7－氨基头孢烷酸酰化酶的菌株: 本发明提供了一种从假单胞菌中克隆并经基因工程改造得到的长为2.5kb的重组GL－7ACA酰化酶基因及其表达元件和信号肽的序列。构建了该基因的高分泌表达重组质粒pSuperCA1S,该质粒转化至大肠杆菌菌株TG1中,得到的...; 王恩多李勇郑勇刚陈剑峰姜卫红赵国屏杨蕴刘; 文献传递

戊二酰－7－氨基头孢烷酸酰化酶: 一种从假单胞菌中克隆的并经基因工程方法改造的,长为2.3kb的GL－7ACA酰化酶基因,并测得其全序列。构建了该基因的高表达重组质粒pKKCAl,该质粒转化至大肠杆菌菌株JM109,得到的基因工程菌株JM109/pKKC...; 王恩多李勇姜卫红赵国屏杨蕴刘; 文献传递

氨酰-tRNA合成酶对tRNA的识别被引量：3: 1997年; 氨酰 tRNA合成酶 (aaRS)与tRNA的相互作用保证了蛋白质生物合成的忠实性 .氨酰 tRNA合成酶对tRNA识别的专一性依赖于aaRS特定的催化结构域和tRNA分子特异的三级结构构象 .反密码子和接受茎 (包括 73位 )在大多数aaRS对tRNA分子的识别过程中起着关键作用 ,其他部位如可变口袋、可变 (茎 )环等。; 李勇李彤王恩多; 关键词：合成酶 TRNA

镧离子对溶液中tRNA构象影响的拉曼光谱研究: 1999年; 得到了大肠杆菌亮氨酸转移核糖核酸（ｔＲＮＡＬｅｕ）及镧离子对溶液中ｔＲＮＡ构象影响的激光拉曼光谱，实验发现拉曼光谱能够提供溶液状态中ｔＲＮＡＬｅｕ的核糖磷酸骨架构象、碱基堆积的相对程度、碱基对的一些特殊信息。; 涂华民杨燕生李勇王恩多; 关键词：拉曼光谱转移核糖核酸镧离子 TRNA

头孢菌素酰化酶被引量：3: 1998年; 氨基头孢烷酸（７ａｍｉｎｏｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒａｎｉｃａｃｉｄ，７ＡＣＡ）是医药工业合成大多数头孢菌素的重要原料．头孢菌素酰化酶（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎａｃｙｌａｓｅ，ＣＡ）催化头孢菌素Ｃ（ＣＰＣ）和戊二酰７氨基头孢烷酸（ＧＬ７ＡＣＡ）的水解反应，生成７ＡＣＡ．根据ＣＡ催化底物的不同，可将其划分为两类：ＣＰＣ酰化酶和ＧＬ７ＡＣＡ酰化酶．由ＣＡ的同源性、分子质量大小和基因结构，可以把头孢菌素酰化酶划分为五种；讨论了酶的基本性质．通过ＣＡ与Ｎ端亲核水解酶（Ｎｔｎ水解酶）的比较，推测ＣＡ属于Ｎｔｎ水解酶，并由此可以进一步理解它们的生理功能．; 李勇王恩多; 关键词：头孢菌素酰化酶 7-氨基头孢烷酸

稀土离子对tRNA熔融曲线和熔融温度的影响被引量：3: 1997年; 采用光谱技术就稀土离子对大肠杆菌tRNALeu和酵母tRNAPhe的熔融曲线和熔融温度的影响进行了研究，结果表明：在低浓度（1-50μmol／L）条件，tRNAs在260nm的吸光度值随温度的升高而升高，稀土高于对tRNA分子结构起稳定作用；在较高稀土离子浓度，如在5mmol／RE3+或5mmol／LRE3+和2mm01／L精胺共同存在下，tRNAs在260nm的吸光度数值随温度的升高而降低，tRNA分子展现出的这种低色效应和反Tm现象说明结合到tRNA上的稀土离子对tRNA分子的二级结构起稳定作用。; 涂华民杨燕生李勇王恩多; 关键词：TRNA 稀土离子大肠杆菌酵母

分泌表达戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶基因的新菌株: 王恩多郑勇刚陈剑峰李勇姜卫红杨蕴刘赵国屏; 研究了一种含有从假单胞菌（Pseudomonas sp.130）中克隆的戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶基因及带有卡纳霉素抗性的重组表达质粒以及该基因在大肠杆菌中分泌的高表达。其表达的GL-7ACA酰化酶直接分泌到周质空间...; 关键词：; 关键词：基因工程菌分泌表达

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李勇