李大强
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Rab27A对人乳腺癌细胞生物学特性的影响被引量：3
- 2007年
- 背景与目的:Rab蛋白属Ras超家族中有超过60个成员的最大的一个亚家族。Rab27A是这一家族中唯一一个明确涉及到人类遗传性疾病的成员。本研究探讨Rab27A对人乳腺癌细胞生物学特性的影响及其机制。方法:构建含有Rab27A开放阅读框的真核表达质粒,通过脂质体转染的方法将其导入乳腺癌细胞MDA-MB-231,同时采用RNA干扰的方法下调Rab27A的表达。测定Rab27A上调及下调表达后乳腺癌细胞生长曲线、细胞周期分布、凋亡细胞比例、体外侵袭等生物学特性的变化,并采用RT-PCR方法来探讨Rab27A发挥作用的分子机制。结果:①Rab27A的表达水平随乳腺癌细胞侵袭转移能力的增强而增高。②上调Rab27A表达后导致乳腺癌细胞生长加速、S期细胞比例增多、凋亡细胞比例下降、体外侵袭能力增强。③CyclinD1、MMP-7和MMP-9基因表达水平与Rab27A表达呈正相关,而p16的表达与Rab27A的表达呈负相关。结论:Rab27A通过调节Cyclin D1、MMP-7、MMP-9和p16基因的表达,从而在乳腺癌细胞增殖、细胞周期分布、凋亡和侵袭中发挥作用。
- 王劲松王福宾狄根红侯意枫李大强王磊张强鸽李文凤吴炅陆劲松沈镇宙朱学良邵志敏
- 关键词：乳腺癌凋亡肿瘤侵袭
- 5-aza-2’deoxycytidine联合trichostatin A抑制乳腺癌细胞增殖能力的研究被引量：7
- 2006年
- 背景与目的:晚近报道应用DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-2’deoxycytid ine(AZA)联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂trichostatin A(TSA)作用于多种肿瘤,可以达到治疗肿瘤的目的。本文在此探讨通过AZA联合TSA作用,抑制乳腺癌细胞株增殖能力。方法:联合应用两种药物作用于肿瘤细胞,应用RT-PCR的方法检测MDA-MB-435细胞株p21和p27的mRNA转录水平的改变。通过W ST方法来检测乳腺癌细胞的增殖能力变化,将MDA-MB-435细胞根据药物处理共分四组:①对照组;②AZA+TSA组;③AZA+TSA+4-OH TAM组;④4-OH TAM组。并且采用流式细胞仪来分析肿瘤细胞周期分布的改变,将MDA-MB-435分成另外四组:①对照组;②AZA+TSA组;③AZA+TSA+E2组;④AZA+TSA+E2+4-OH TAM组。结果:TSA以及AZA联合应用能使肿瘤细胞MDA-MB-435的p27的mRNA水平增加,而p21mRNA水平略减弱。增殖分析的四个组中:AZA+TSA组细胞增殖能力减弱(P<0.01),同时出现细胞阻滞于S期,加入雌激素后细胞阻滞稍减弱。AZA+TSA+4-OH TAM组增殖能力进一步减弱(P<0.01)。4-OH TAM组增殖能力没有改变。细胞周期分析的四个组中:AZA+TSA组出现细胞阻滞于S期,AZA+TSA+E2组细胞阻滞稍减弱。AZA+TSA+E2+4-OH TAM组细胞阻滞再次提高。结论:两种药物联合应用能使得乳腺癌肿瘤细胞增殖能力下降,对于肿瘤细胞有一定抑制作用。
- 范江陆劲松王磊吴炅侯意枫李大强狄根红沈镇宙邵志敏
- 关键词：乳腺肿瘤TRICHOSTATIN肿瘤细胞增殖能力
- 药物诱导MDA-MB-435细胞表达ERα及其对内分泌治疗的敏感性被引量：1
- 2006年
- 目的通过药物诱导雌激素受体(ER)阴性的乳腺癌细胞株MDA-MB-435恢复ER的表达,探讨其对内分泌治疗的敏感性。方法采用HDAC抑制剂古曲抑菌素(TSA)联合DNMT抑制剂5-AZA-CdR(AZA)作用于MDA-MB-435细胞;以RT-PCR方法检测细胞ERα及其下游基因产物孕激素受体(PR)、雌激素调节蛋白(pS2)的mRNA水平;以水溶性四氮唑盐-8(WST-8)方法检测诱导前后细胞增殖水平。将药物诱导后的MDA-MB-435细胞接种裸小鼠,观察其在体内增殖能力的改变。结果药物诱导后,MDA-MB-435细胞恢复ERα表达,ERα下游基因产物PR和pS2的表达增加。2．5μmol／L AZA和100 ng／ml TSA诱导MDA-MB-435细胞后,其ERα表达最强。诱导后的MDA- MB-435细胞在不同浓度的雌激素中表现出不同的增殖能力。与未经诱导的细胞相比,诱导后的MDA-MB-435细胞增殖能力下降(P<0．01);经诱导的细胞联合4-羟基三苯氧胺后,其增殖能力进一步下降(P<0．01);而单用4-羟基三苯氧胺不能抑制未经诱导的细胞的增殖(P>0．05)。在裸鼠体内,诱导处理后的MDA-MB-435移植瘤较未经处理的细胞增殖能力下降(P<0．01)。去除雌激素后,诱导后肿瘤细胞在体内增殖能力进一步受到抑制(P<0．01)。结论通过TSA和AZA联合诱导作用,MDA-MB-435细胞株中沉默的ER恢复表达ERα,并且该ERα是具有功能的。经过诱导的细胞株在体内及体外对雌激素均恢复反应。联合应用HDAC抑制剂以及DNMT1抑制剂可以恢复乳腺癌细胞MDA-MB-435对内分泌治疗的敏感性,这为ER阴性的乳腺癌患者治疗开辟一条新的思路,具有重要的临床意义。
- 范江陆劲松殷文瑾王磊吴凤英吴炅侯意枫李大强狄根红沈镇宙邵志敏
- 关键词：雌激素受体Α雌激素内分泌治疗
- PARP1通过调节RNF144A抑制乳腺癌细胞凋亡被引量：2
- 2019年
- 背景与目的:乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,但其发病机制尚不清楚。我们前期研究发现环指蛋白144A(ring finger protein 144A,RNF144A)调节多聚ADP核糖聚合酶1[poly(ADP ribose)polymerase 1,PARP1]的稳定性,进而影响乳腺癌细胞对PARP抑制剂olaparib的敏感性。该研究旨在探讨PARP1是否对RNF144A具有调节作用及其对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法:利用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中PARP1的表达水平,并分析PARP1表达水平与乳腺癌患者预后的关系。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测过表达或者敲低PARP1对RNF144A蛋白水平的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测敲低PARP1对RNF144A转录水平的影响。利用AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果:在乳腺癌组织中PARP1表达阳性率为68%,且高表达PARP1的患者预后较差。在敲低或过表达PARP1的HEK-293T和乳腺癌细胞中,RNF144A在mRNA水平无明显变化,但其蛋白水平与PARP1表达呈负相关。Olaparib诱导细胞凋亡时,过表达PARP1细胞凋亡率较低,在过表达PARP1的细胞中重新过表达RNF144A后凋亡率有一定程度的恢复。结论:PARP1在乳腺癌细胞的表达水平与乳腺癌患者的预后相关,可能在乳腺癌的发生、发展中扮演着癌基因的角色。PARP1调节RNF144A的蛋白水平但不影响其mRNA水平。PARP1可能通过负向调节RNF144A抑制乳腺癌细胞凋亡。
- 曹金玲张烨张方淋李大强
- 关键词：乳腺癌预后凋亡
- 达菲抗原趋化因子受体在不同转移性人乳腺癌细胞中的差异表达被引量：2
- 2005年
- 目的 研究不同转移潜能乳腺癌细胞株中达菲抗原趋化因子受体 (Duffyantigenreceptorforchemokines,DARC)mRNA表达和蛋白质水平的差异 ,探讨DARC与乳腺癌细胞转移潜能的相关性。方法 培养高低转移潜能的人乳腺癌MDA MB 4 35细胞株 ,并将其接种到裸鼠体内 ,以体外培养细胞和裸鼠体内原位异种移植瘤为标本 ,用RT PCR法检测DARCmRNA的表达 ,同时在细胞涂片上 ,用抗Fy3单抗检测DARC的蛋白质水平。结果 高转移潜能MDA MB 4 35细胞的DARC表达显著性地低于低转移潜能MDA MB 4 35细胞 ,并且在接种高转移潜能MDA MB 4 35细胞而形成的裸鼠体内原位移植瘤中的DARC表达也显著性地低于低转移潜能MDA MB 4 35细胞来源的移植瘤。结论 本研究首次揭示趋化因子清除槽DARC的表达差异与人乳腺癌细胞的不同转移潜能有关 ,有望成为抑制乳腺癌转移的新靶点。
- 魏思方王杰欧周罗李大强侯意枫罗建民邵志敏
- 关键词：人乳腺癌细胞达菲体外培养细胞异种移植瘤原位移植瘤细胞涂片
- 乳腺癌不同肺转移潜能细胞株表达差异蛋白及其临床意义被引量：3
- 2006年
- 背景与目的：使用蛋白质组技术，我们鉴定出不同肺转移潜能MDA—MB-435乳腺癌细胞之间11个表达存在差异的蛋白，本研究试图探讨其中3个蛋白，dB—crystatlin（CRAB）、热休克蛋白60（HSP60）和peroxiredoxin 6（PDX6），与乳腺癌转移的关系。方法：使用实时定量RT—PCR的方法验证3个蛋白在不同肺转移潜能细胞株之问mRNA水平的差异。进一步使用免疫组化的方法检测2003年1月～2004年1月，32例乳腺癌标本中3个蛋白的阳性率。结果：肺高转移潜能细胞株CRAB，HSP60和PDX6的mRNA水平分别为其亲代细胞的0．24倍，3．15倍和2．43倍。CRAB在淋巴结阴性乳腺癌患者和淋巴结阳性乳腺癌患者中的阳性率分别为52．9％和33．3％；HSP60在2组患者中的阳性率分别为35．3％和73．3％；PDX6在2组患者中的阳性率分别为29．4％和60．0％。结论：HSP60水平的升高可能与乳腺癌侵袭能力增加相关，具体机制尚待进一步研究。
- 王磊李大强侯意枫罗建民范江吴炅陆劲松狄根红沈镇宙邵志敏
- 关键词：乳腺肿瘤热休克蛋白60PEROXIREDOXIN
- SF3A2在三阴性乳腺癌治疗和化疗疗效评估中的应用
- 本发明提供了选择性剪接因子SF3A2作为生物标志物在制备用于乳腺癌诊断、治疗、预后评估、化疗敏感性评估试剂中的应用。提供了选择性剪接因子SF3A2基因或蛋白表达水平的检测试剂在制备用于乳腺癌诊断、预后评估、化疗敏感性评估...
- 李大强张方淋邓玲张银玲
