杜刚
- 作品数:9 被引量:20H指数:3
- 供职机构:重庆医科大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生艺术更多>>
- 人FAM33A基因启动子的克隆与鉴定被引量:6
- 2009年
- 目的鉴定人FAM33A基因的启动子,为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法采用5’RACE技术(5’端cDNA快速扩增)鉴定FAM33A的转录起始位点。采用PCR定向克隆、酶切亚克隆等策略,构建FAM33A启动子荧光素酶报告基因。采用Lipofeetamine^TM2000转染H1299细胞,并通过Dual-Lu-ciferase@ Reporter Assay System进行荧光素酶报告基因活性检测。结果确定了FAM33A的转录起始位点,构建了覆盖FAM33A 5’端ATG附近约2kb区域的一系列FAM33A启动子荧光素酶报告基因。启动子活性分析表明,这些重组体均具有较高的启动子活性,同时含有典型的GC盒以及Sp1、E2F和GATA-1等潜在的转录因子结合位点。结论FAM33A启动子区域主要定位于转录起始位点附近约590bp的区域内。
- 杜刚卜友泉杨正梅兰欢崔涛镇磊刘革力宋方洲
- 关键词:启动子转录调控细胞周期
- 新基因PRR11与FAM33A共享双向启动子区域的鉴定与初步分析
- PRR11基因是我们最近鉴定的一个参与细胞周期和细胞增殖调节的肿瘤相关新基因。生物信息学分析表明,该基因的上游邻接基因FAM33A也是一个最近鉴定的参与细胞增殖和细胞周期的肿瘤相关新基因,且这两个基因的转录方向恰好相反,...
- 卜友泉杜刚兰欢艾青崔涛易发平刘革力宋方洲
- 关键词:启动子转录调控细胞周期
- 文献传递
- 人PRR11启动子的结构与功能初步分析被引量:9
- 2011年
- PRR11(proline-rich protein 11,PRR11)是我们最近发现的一个新的肿瘤相关基因.初步研究表明,PRR11参与细胞增殖、细胞周期和细胞癌变等多种生物学过程.为了进一步研究PRR11基因的转录调控机制并全面解析其功能,本研究对PRR11基因的启动子进行了克隆鉴定和初步分析.首先,应用5'RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了PRR11基因的转录起始位点,发现了其具有多个转录起始位点.通过PCR定向克隆和DNA blunting技术,构建了6个相互重叠并覆盖PRR11基因转录起始位点附近约2.0 kb区域的PRR 11基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,PRR 11基因启动子主要定位于转录起始位点附近-563 bp~+341 bp的区域内.采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明,PRR 11基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒、CCAAT盒以及潜在的经典转录因子E2F1和MYB的结合位点,提示Sp1、NF-Y、E2F1和MYB等经典转录因子可能参与PRR 11基因的转录调控.
- 艾青卜友泉刘竹兰欢吉颖杜刚杨正梅刘革力宋方洲
- 关键词:PROTEIN启动子转录调控肿瘤相关基因
- 人β3肾上腺素受体激动剂快速筛选模型的建立被引量:1
- 2011年
- 目的:β3肾上腺素受体(beta-3 adrenergic receptor,ADRB3)是β肾上腺素受体的一个亚型,是一个公认的减肥药和抗2型糖尿病药物研发的重要分子靶点,构建其激动剂筛选模型具有重要意义。方法:以ADRB3发挥作用的细胞内信号通路为理论依据,在细胞水平上构建了以荧光素酶为报告基因的人ADRB3激动剂药物筛选模型,并对部分实验条件进行了快速简易优化。结果:已知的ADRB3激动剂异丙肾上腺素和倍他福林均能够有效激活该筛选模型中pCRE-luc报告基因质粒的表达,使其表达增加3倍以上。结论:该筛选模型构建成功。目前该模型已用于以ADRB3为靶点减肥新药筛选。
- 刘竹杜刚曾凡新兰欢艾青刘革力宋方洲卜友泉
- 关键词:Β3肾上腺素受体减肥药药物筛选荧光素酶
- 新基因PRR11的克隆、原核表达及鉴定被引量:5
- 2009年
- 克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其原核表达载体,并进行表达检测及鉴定。以Hela细胞cDNA为模板,RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入原核表达载体PET-28a中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a-PRR11。然后把PET-28a-PRR11重组载体转化到BL21中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。结果表明成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到原核表达载体PET-28a中,目的蛋白成功表达。成功构建的PRR11基因的原核表达载体,及PRR11的重组蛋白表达产物,为进一步研究PRR11的基因功能奠定了基础。
- 崔涛兰欢杜刚刘革力易发平卜友泉宋方洲
- 关键词:原核表达
- FAM64A基因对宫颈癌细胞周期调控的影响被引量:1
- 2013年
- 目的观察FAM64A基因对宫颈癌细胞周期调控的影响,探讨其作为分子靶点在肿瘤治疗中的潜在价值。方法阿霉素(ADR)处理HeLa细胞,半定量RT-PCR方法检测DNA损伤后FAM64A表达水平的变化;胸腺嘧啶脱氧核苷/诺考达唑阻断法将细胞阻断在M期,并依次释放入G1、S、G2、M期,半定量RT-PCR方法检测FAM64A在不同细胞周期中的表达情况;化学合成法合成特异性的短链siRNA,脂质体转染法将siRNA分别导入HeLa细胞,RT-PCR法检测其对FAM64A表达的抑制效果;选取特异性的FAM64A siRNA,转染入HeLa细胞,采用流式细胞仪分析FAM64A表达被抑制后对HeLa细胞周期的影响。结果 FAM64A的表达水平在ADR处理后期约24 h呈现明显下调,到48 h时表达量几乎为零。FAM64A的表达水平在G2/M期表达升高,G1、S期表达降低。半定量RT-PCR结果表明,合成的特异性短链FAM64A siRNA能高效、特异性地抑制HeLa细胞中FAM64A的表达。流式细胞分析结果表明,FAM64A表达被抑制后,细胞周期被阻滞在G1期。结论 FAM64A基因参与了宫颈癌HeLa细胞周期的表达和调控,是一个潜在的肿瘤治疗靶点。
- 徐瑲杜刚艾青兰欢
- 关键词:子宫肿瘤细胞周期HELA细胞
- 人HAS3启动子的结构与功能初步分析被引量:1
- 2009年
- 透明质酸合酶3(hyaluronan synthase3,HAS3),是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了HAS3基因的转录起始位点,发现了丰度和转录起始位点不同的两种新的HAS3基因剪接变异体.通过PCR定向克隆策略,构建了覆盖HAS3基因5′端侧翼区起始密码子ATG上游约4.3kb区域的一系列HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,HAS3基因启动子定位于转录起始位点附近约450bp的区域内.转录因子结合位点分析表明,HAS3基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒以及C/EBP等其它潜在的转录因子结合位点.结果提示,Sp1和C/EBP等转录因子可能参与HAS3基因的转录调控.
- 镇磊卜友泉杜刚杨正梅兰欢崔涛刘革力宋方洲
- 关键词:CDNA末端快速扩增启动子转录调控
- 人FAM33A基因启动子的克隆与鉴定
- FAM33A(family with sequence similarity33 A),也称Ska2(spindle and KT associated2),是一个最近鉴定的参与细胞增殖和细胞周期的新分子。PRR11(p...
- 杜刚
- 关键词:启动子转录调控细胞周期细胞增殖
- 文献传递
- PRR11与SKA2"基因对"共享一个受NF-Y调控的双向启动子并参与肺癌发生发展
- "头对头"基因对是真核生物中一种独特的基因排列方式,约占人类基因总数的10%.对此类基因对的鉴定与功能研究尚刚刚开始.我们前期发现PRR11是一个参与细胞周期和肺癌发生的肿瘤相关新基因.在本研究中,我们证实PRR11与其...
- 王义涛张莹张春冬翁华丽李轶蔡伟谢濛宇龙银江艾青刘竹杜刚王森牛毓龙宋方洲尾崎俊文卜友泉
- 关键词:双向启动子NF-Y细胞周期肺癌