公共文化服务平台

梁志清: 作品数：11 被引量：163H指数：5; 供职机构：香港大学更多>>; 发文基金：国家攀登计划国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

合作作者

传染性喉气管炎病毒北京E2株gC基因的克隆及其部分序列测定: 2000年; 根据传染性喉气管炎病毒美国 6 32株和英国Thorne株gC基因的序列设计 1对引物 ,以北京E2株为模板 ,用PCR方法扩增得到长度为 1 9kb的片段 ,并将其克隆至质粒pA T中 .用碱小量法制备质粒DNA ,以酶切和质粒PCR的方法对其进行了鉴定 ,并以正向和反向引物测定其两翼序列 ,结果正向引物测出 498个碱基 ,反向引物测出 499个碱基 ,将所得序列输入GenBank与其他毒株进行比较 ,结果发现其与美国 6 32株的同源性为 94 6 %～ 98 9% ,与英国Thorne株UL44的同源性为 5 5 1% .目前该基因序列已在GenBank中注册 ,代码分别为AF16 10 6 5和AF16 10 6 6 .; 吴红专刘福安朱道中陈义为梁志清; 关键词：传染性喉气管炎病毒 GC基因克隆

超强传染性法氏囊病病毒株宿主保护抗原的分子特征被引量：100: 1998年; 为了探索超强传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）株毒力增强的原因，采用反转录－聚合酶链反应技术，从中国广东、福建分离到的３株超强ＩＢＤＶ毒株中扩增到编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片段，并对ＶＰ２基因的高可变区进行了序列测定。序列分析和聚类分析表明，３株超强毒株与欧洲超强毒株非常相似，而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。将超强毒株ＶＰ２高可变区的氨基酸序列与其他血清Ⅰ型毒株进行比较，发现除了具有一般ＩＢＤＶ强毒株的分子特征之外，所有超强毒株在２２２、２５６、２９４和２９９位上的氨基酸均相同，分别为Ａ、Ⅰ、Ⅰ和Ｓ，与其他毒株均不相同。而２２２、２９４和２９９位上的特征性氨基酸使超强毒株ＶＰ２中诱导中和抗体的抗原决定簇的构象发生细微变化，从而导致毒力增强。; 曹永长毕英佐梁志清林文量; 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒株

传染性法氏囊病病毒变异株主要免疫原基因cDNA的克隆及鉴定被引量：33: 1997年; 采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从１株传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）本地分离株ＧＺ９０２中扩增到编码ＩＢＤＶ主要免疫蛋白ＶＰ２的ｃＤＮＡ片断，大小约为１３５０ｂｐ。将该ｃＤＮＡ片断插入ｐＢｓＫ质粒中，用重组质粒转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，成功获得重组质粒转化菌。对重组质粒ＤＮＡ进行酶切鉴定，证明插入的ＤＮＡ片断与ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段大小相符。对ＧＺ９０２高可变区进行了序列分析。其核苷酸序列与３株ＩＢ－ＤＶ变异株Ａ、ＧＬＳ、Ｅ的同源性分别达到９８．９％，９６．２％和９５．５％。而与其他Ⅰ型毒株的同源性较低。比较从ＤＮＡ序列推导出的氨基酸序列，发现ＧＺ９０２高可变区的两个亲水区均发生了一个氨基酸的变化，而在２４９和２５４位上的氨基酸分别为Ｋ和Ｓ，与以上３个变异株相同，但与所有标准Ⅰ型毒株不同。这两个氨基酸可以作为ＩＢＤＶ变异株的标志。; 曹永长毕英佐罗文新杨永成梁志清林文量; 关键词：变异株基因克隆 IBDV

转基因禽类的制备方法: 本发明描述了一种适用于将外源基因或DNA序列导入基因组中以制备包鸡、鸭、鹅和鹌鹑等的转基因禽类的方法。本方法采用了将外源DNA(或基因)包埋在中空螺旋状的脂质体中,与精子共同孵育,使脂质体与精子融合,再加之电击,增加精子...; 李建凡梁志清王小珂; 文献传递

转基因禽类的制备方法: 本发明描述了一种适用于将外源基因或DNA序列导入基因组中以制备包鸡、鸭、鹅和鹌鹑等的转基因禽类的方法。本方法采用了将外源DNA(或基因)包埋在中空螺旋状的脂质体中，与精子共同孵育，使脂质体与精子融合，再加之电击，增加精子...; 李建凡梁志清王小珂; 文献传递

一步法克隆传染性法氏囊病病毒前体多聚蛋白基因被引量：1: 2001年; Very virulent infectious bursal disease virus(vvIBDV)was isolated from chicken bursa and then the virus double stranded RNA was extracted After denaturation of dsRNA by heat in the presence of primers,the cDNA was synthesized by use of a reverse transcriptase lacking RNase H activity The RNA component of RNA cDNA hybrids was digested by RNase H By using an optimized PCR,a 3 05kb DNA fragment coding for precursor polyprotein of IBDV was produced in one step,which was inserted into pcDNA3 1(+) vector Two recombinant plasmids (pPP1 and pPP2)were screened and identified from eight XL1 blue colonies Partial sequencing for pPP1 plasmid indicated that the precursor polyprotein gene for IBDV was cloned successfully The method can simplify greatly the procedure to clone precursor polyprotein gene of IBDV; 刘存仁梁志清; 关键词：传染性法氏囊病病毒基因克隆

鸡生长激素基因内含子4新等位基因的序列分析被引量：16: 2002年; 试验以粤黄鸡矮脚黄系等不同肉鸡、蛋鸡品种 (系 )作为试验材料 ,对新发现的生长激素基因内含子 4等位基因的PCR产物作纯化后测序 ,研究多态性产生的机理及碱基变异情况。结果发现cGH内含子 4长约 1170bp ,内含子 4的A、B、C、D等位基因长分别为 1170bp、116 4bp、116 8bp和 116 6bp ,它们之间存在不同程度的碱基差异 ,而第 5 80碱基的突变 (A→G)和第 6 88碱基的突变 (A→G)分别产生了MspⅠ酶切位点 ,是多态性形成的根本原因。“PCR产物双带”的形成是由于cGH基因内含子 4其中一条链上第 42 0～ 470位碱基全部缺失。不同等位基因间存在碱基缺失、插入和替换 ,测序结果与酶切后电泳结果相吻合。; 聂庆华张细权杨关福梁志清; 关键词：生长激素基因等位基因

脂质体介导-精子载体-电穿孔法培育转基因鸡研究: 建立了一种用脂质体介导-精子载体-电穿孔法培育转基因禽类的方法,并用鸡做试验动物,增育出转基因鸡,用其中一公鸡繁殖了30只后代,用PCR法和Southern分子杂交法筛选出G1代阳性转基因鸡,G1代再繁殖,又得到第三代阳...; 李建凡梁志清王小珂沈孝宙许罕华陈雪秀陈英邝霞; 关键词：转基因鸡精子载体脂质体电穿孔; 文献传递

传染性法氏囊病病毒VP2-4-3 cDNA的分子克隆和序列分析被引量：1: 2002年; 从法氏囊组织分离IBDV超强毒株HK46并提取基因组RNA。以RNA为模板进行反转录合成cDNA第一链。采用长PCR扩增技术获得VP2 4 3cDNA全长片段。将PCR产物克隆到 pcDNA3 1(+)载体 ,得到重组质粒 pPP1。对 pPP1插入片段全长序列进行了测序并对其序列进行了分析。结果表明 ,VP2 4 3cDNA阅读框架由30 39bp组成 ,可编码 10 12个氨基酸组成的前体多聚蛋白。经比较得知 ,HK46超强毒株VP2 4 3氨基酸序列与经典毒株间存在 19～ 2 8个氨基酸的差异 ;与Harbin强毒株相差 32个氨基酸 ;而与超强毒株OKYM和UK6 6 1分别相差 2和 6个氨基酸 ,且它们的VP2序列完全相同。在HK46超强毒株所特有的 9个氨基酸中 ,3个位于VP2可变区 ,显示超强毒株其抗原性存在着变异。; 刘存仁梁志清; 关键词：分子克隆传染性法氏囊病病毒病毒蛋白

传染性囊病病毒CJ801 VP2基因cDNA的序列分析被引量：6: 1997年; 用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０、ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７４％、９７６％和９６９％，与变异株Ａ、Ｅ、ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６５％、９６３％和９６７％。而与Ⅱ型毒株的同源性只有８１％左右。从遗传进化树上看，ＣＪ８０１处于标准Ⅰ型毒株和变异株之间。根据ｃＤＮＡ序列推导出蛋白质序列，比较蛋白质序列发现，ＣＪ８０１与Ⅰ型ＩＢＤＶ毒株的同源性均在９６％以上，其中与５２／７０的同源性最高，为９８２％。ＣＪ８０１ＶＰ２高可变区的七肽区（Ｓ－Ｗ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｇ－Ｓ）未发生变化。以上结果说明ＣＪ８０１为ＩＢＤＶⅠ型强毒株。另外，ＣＪ８０１和所有ＩＢＤＶ强毒株在ＶＰ２的２５３、２７９和２８４位上的氨基酸均相同，分别为Ｑ、Ｄ和Ａ；而ＣＪ８０１的细胞适应株ＣＪ８０１ＢＫＦ和所有弱毒株一样，其相应位置的氨基酸分别为Ｈ、Ｎ和Ｔ。这３个氨基酸可能和ＩＢＤＶ的毒力有关。; 曹永长毕英佐梁志清周蛟林文量; 关键词：鸡病传染性囊病病毒基因克隆

梁志清

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

梁志清

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈