潘红春
- 作品数：6 被引量：41H指数：2
- 供职机构：重庆大学生物医学工程联合学院生物流变科学与技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划四川省教育厅资助科研项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 重组人干扰素ω在对数生长期毕赤酵母中的高效表达特性研究被引量：1
- 2006年
- 用不同比生长速率μ的毕赤酵母探讨其表达外源重组蛋白的差异性，通过起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、菌体浓度、装液量等实验，优化具有较高μ的对数生长期毕赤酵母表达rhlFNω的摇瓶条件。结果表明，μ对毕赤酵母表达rhlFNω有显著影响。μ为0．1612h^-1的毕赤酵母表达rhlFNω最高为558mg／L，较μ为0．1321、0．0505和0．0052h^-1的毕赤酵母分别提高50％、68％和99％。对数生长期的毕赤酵母表达rhlFNω的最适摇瓶表达条件为：250mL摇瓶装入30mL BMMY，控制菌体浓度达到200～300g／L（WCW），起始pH值自然，每24h添加甲醇15g／L一次。诱导表达周期为4d。通过表达条件的优化，rhlFNω的表达量达到1070mg／L。较优化前提高149％。
- 潘红春刘红王伯初陈真文郑小峰杨红涛肖中元
- 关键词：毕赤酵母比生长速率
- pH对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其控制被引量：2
- 2005年
- pH对大肠杆菌L-天冬酰胺酶的产生有很大的影响。通过对不同缓冲体系试验和对摇瓶发酵过程pH变化的分析,了解摇瓶发酵过程中pH对L-天冬酰胺酶合成的影响。采用流加磷酸自控L-天冬酰胺酶发酵过程的pH,可延长发酵周期,有效地防止菌体的过早自溶,大大促进L-天冬酰胺酶的合成,较分批发酵提高产酶 83%,达到 110u/mL。发酵动力学特性分析表明,该发酵方式L-天冬酰胺酶的合成与菌体生长不相关,控制比生长速率μ为 0. 15~0. 30h-1,均有利于L-天冬酰胺酶的合成,可使比产酶速率的最大值Qpmax达到 3 922u/(g·h)。
- 潘红春王伯初刘红陈真文周玲李玉林
- 关键词：PH值大肠杆菌L-天冬酰胺酶发酵动力学
- 发酵条件对毕赤酵母表达重组人干扰素ω糖基化的影响被引量：21
- 2005年
- 发酵条件是影响毕赤酵母 (P .pastoris)表达外源重组糖蛋白时糖基化的重要因素。通过菌体浓度、起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、装液量等摇瓶发酵实验 ,研究不同发酵条件对毕赤酵母表达分泌型重组人干扰素ω(rhIFNω)过程中糖基化的影响 ;同时 ,在连续培养过程中考察pH值变化对rhIFNω糖基化的影响和分批发酵过程中rhIFNω糖基化的变化。结果表明 ,控制菌体密度 2 5 0g L(WCW)、起始pH值 6 0、装液量小于 30mL、甲醇诱导浓度 15g L、甲醇诱导 3次 (每 2 4h诱导一次 )等发酵条件 ,有利于摇瓶发酵过程中rhIFNω的糖基化 ;控制pH值 7 0～ 7 5可促进rhIFNω的糖基化 ;分批发酵过程中 ,糖基化与非糖基化rhIFNω的含量有同比变化趋势 ,但糖基化rhIFNω所占比例明显低于摇瓶发酵实验的结果 ,其原因有待进一步研究。
- 刘红潘红春蔡绍皙陈真文郑小峰杨红涛肖中元
- 关键词：糖基化毕赤酵母发酵条件
- 酶解-超声法破碎大肠杆菌提纯包含体被引量：16
- 2004年
- 大肠杆菌的破碎方法对包含体的纯度有较大影响。采用酶解和超声波相结合的方式进行了大肠杆菌的破碎实验研究,考察了溶菌酶用量、酶解温度、超声处理功率和时间等因素对菌体破碎程度的影响,通过测定破碎液的A650,A280,A260nm来反映细胞的破碎程度和胞内蛋白及核酸物质的释放情况。在优化的条件下,每克湿菌体添加2mg溶菌酶,30℃酶解60min、500W超声破碎50次后,经分离洗涤可获得纯度达57%的包含体。本方法可获得纯度更高的包含体,利于重组蛋白的进一步纯化。
- 刘红潘红春蔡绍皙李玉林杨红涛
- 关键词：酶解超声波大肠杆菌包含体
- 大肠杆菌重组人成骨蛋白-1的非诱导表达特性
- 2004年
- 目的 研究大肠杆菌重组人成骨蛋白 1的非诱导表达特性。方法 通过水质、起始pH、接种量、葡萄糖添加量、甘油添加量、装液量、转速等实验研究不同营养条件和培养条件对OP 1非诱导表达的影响。通过传代实验 ,考察该系统OP 1表达的稳定性。结果 水质对OP 1的表达没有明显影响 ,2 %～ 4 %的接种量有利于OP 1的表达 ,起始pH以 6 0为宜。葡萄糖对OP 1的表达有较大影响 ,2 %～ 4 %的葡萄糖添加量可以获得较高表达。甘油的添加能明显促进OP 1的表达 ,最适添加量为 0 3% ,较对照提高表达 81 7%。该表达系统对溶氧的需求不大 ,装液量和转速分别以 12 5～ 15 0ml和 15 0r min为宜。在优化条件下 ,最适表达时间为 2 4～ 2 6h ,OP 1的表达量可达到菌体蛋白的 4 0 %。优化的营养条件和培养条件对本系统OP 1的表达和质粒的稳定有利 ,10次传代可保持 90 %表达。结论 建立了非诱导表达的摇瓶发酵工艺 ,对其非诱导表达特性有了较为深入的了解 ,为进一步放大研究奠定了基础。
- 刘红潘红春蔡绍皙杨红涛朱列文
- 关键词：大肠杆菌
- 重组人成骨蛋白-1基因在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达被引量：1
- 2005年
- 目的 研究重组人成骨蛋白 -1(rhOP -1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达。方法 利用RT -PCR技术 ,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP- 1成熟肽基因片段 ,再将rhOP- 1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX- 4T- 2中 ,构建表达质粒pCCBC- OP- 1,并转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)中 ,在发酵过程中不添加任何诱导剂。表达产物经SDS -PAGE分析。结果 扩增的目的基因序列与文献报道一致。表达的目的蛋白相对分子质量为 14 0 0 0 ,表达量达到菌体蛋白的 4 0 %。结论 克隆了人OP -1成熟肽基因 ,并实现了rhOP- 1的非诱导高效表达。
- 潘红春刘红王伯初杨红涛陈喜文周玲
- 关键词：成熟肽基因成骨克隆大肠杆菌正常胎儿骨蛋白
