赖良学
- 作品数：85 被引量：353H指数：12
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国科学院院长基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 小型猪体细胞克隆试验被引量：1
- 2010年
- [目的]建立体细胞克隆小型猪的技术平台并了解克隆效率。[方法]运用体细胞核移植技术,以小型猪胎儿成纤维细胞作为核移植供体细胞,以体外成熟卵母细胞作为核移植受体细胞进行体细胞克隆猪生产,并利用STR序列对所出生的克隆猪进行个体识别。[结果]将重构胚胎移植到5头代孕母猪体内,其中一头代孕母猪成功产下2头克隆小型猪。经过个体识别试验证实克隆小型猪来自供核细胞,与代孕母猪无直接亲缘关系。[结论]克隆小型猪的成功出生表明所建立的技术平台适于小型猪的克隆。
- 黄永业李小平周焱谢万华段新平谭广云李栋袁婷高飞谢光洪赖良学欧阳红生逄大欣
- 关键词：体细胞核移植小型猪克隆猪性别鉴定
- 小鼠精原干细胞的形态结构及其细胞化学和免疫组化特性被引量：49
- 1999年
- 应用光镜、电镜观察了 ７～８ ｄ 小鼠精原干细胞的形态结构特点；应用细胞化学、免疫组织化学方法研究了体外培养小鼠精原干细胞的细胞化学和免疫组织化学特性。结果显示，精原干细胞呈圆形，直径（９±１） μｍ ，核大，呈圆形或轻微卵圆形，胞质较少；核内常染色质占绝对优势，异染色质极少；胞质内核糖体、线粒体较丰富，其他细胞器不发达；精原干细胞 Ａ Ｋ Ｐ染色呈阳性或强阳性，胞质内脂滴很少或没有；精原干细胞表达特异的 ｃｋｉｔ 受体；体外培养的小鼠精原干细胞常呈不完全的胞质分裂，细胞间由细胞间桥相连而呈链状或团状的细胞群丛，细胞群常由偶数细胞组成。
- 张学明李德雪李子义赖良学文兴豪杜惜明杨盛华岳占碰邹啸环
- 关键词：精原干细胞细胞化学免疫组织化学小鼠
- 影响体外培养兔胚发育和兔类ES细胞分离的若干因素被引量：23
- 1996年
- 本试验系统地比较了影响兔囊胚体外培养和免类ＥＳ细胞系分离的几个主要因素。结果表明，３种不同糖浓度（４．５，１．０，０．２ｇ／Ｌ）在４８ｈ内对胚胎贴壁均无显著影响。在高糖ＤＭＥＭ中，早期胚胎内细胞团（ｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓ，ＩＣＭ）增殖速度最快，分化也快；超低糖组，ＩＣＭ增殖缓慢，分化出现时间较晚；低糖组，ＩＣＭ既能保持较快的增殖速度，又能维持较长时间的未分化状。高糖组和低糖组的ＥＳ细胞样集落的传代能力相似，可达６～７代，超低糖组中不超过２代。胰岛素能促进ＩＣＭ的增殖，并可提高传代过程中ＥＳ细胞样克隆的形成率。在小鼠胚胎原代成纤维细胞（ＭＥＦ）和一种经白血病抑制因子转化了的小鼠成纤维细胞系（ＳＮＬ）上，ＩＣＭ都能维持较快的增殖速度，在家兔胚胎原代成纤维细胞（ＲＥＦ）中ＩＣＭ增殖较慢，无饲养细胞条件下，ＩＣＭ存活率低，生长状况不佳。传代能力，ＲＥＦ要比ＭＥＦ和ＳＮＬ低，且主要形成上皮样集落。作者根据以上实验结果认为，用低糖ＤＭＥＭ为基本培养基，再加入胰岛素，在ＭＥＦ或ＳＮＬ上培养切割胚胎和连续传代的技术路线是较为可行的。
- 赖良学郑瑞珍秦鹏春孙方臻
- 关键词：ES细胞胰岛素胚胎发育
- sgRNA表达载体的构建及牙釉质钙化不全模型的建立
- 一种sgRNA表达载体的构建及牙釉质钙化不全模型的建立，属于生物技术领域。本发明的目的是采用CRISPR‑CAS9基因敲除技术成功获得人类牙釉质钙化不全模型的sgRNA表达载体的构建及牙釉质钙化不全模型的建立。本发明sg...
- 高宇姚浩彬李占军赖良学
- 文献传递
- 精原干细胞体内转染途径建立转基因小鼠的可行性研究被引量：9
- 1997年
- 目前,生产转基因动物的难度很大,成功率很低,这是因为制备转基因动物的主要方法是向受精卵原核中注射DNA。这种方法有其弱点,首先作为外源基因受体细胞的受精卵数量有限;其次外源基因的整合和表达的筛选工作不能在细胞水平上进行,只能在子代动物出生后,即在个体水平上进行选择,这就增加了工作量,而且周期长,成功率低,成本大,在大动物上实施起来尤其困难。这就要求我们找到一种更为有效而又简捷的转基因动物的制备方法。
- 赖良学张学明安靓岳军明扈荣良殷震
- 关键词：精原干细胞转基因动物体内转染外源基因小鼠曲细精管
- 人组织型纤溶酶原激活剂c-DNA乳腺定位表达载体的构建及其在兔乳腺中的表达被引量：2
- 1997年
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是一种用于治疗血栓性心血管疾病的特效药物,它能激活血纤维蛋白酶原,后者使血块溶解,所以这种药物的开发为社会普遍重视。t-PA在人体血液中的含量极低,很难从天然材料中提取。如果应用转基因技术,将人t-PA基因转入动物体内,使其在乳腺中高效表达,从乳汁中提取大量的t-PA,将具有可观的经济效益和社会效益。 转基因动物建立的前提条件是构建乳腺定位高效表达载体。为此,我们先将本所保存的t-
- 赖良学王凯付殿国黄伟民岳军明李银聚扈荣良殷震
- 关键词：人组织型纤溶转基因动物
- 肌注组织型纤溶酶原激活剂基因在小鼠体内表达
- 1997年
- 组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是人体内重要的丝氨酸蛋白酶,它能特异地激活血栓中的纤溶酶原,使之成为具有溶解纤维蛋白能力的纤溶酶,临床上将提纯的t-PA作为心血管栓塞性疾病急救和康复治疗的首选药物。由于t-PA在天然材料中含量甚微,难以大量制备,基因工程产品产量有限,临床应用货源紧缺且价格昂贵。
- 李银聚扈荣良赖良学岳军明殷震
- 关键词：组织型基因治疗小鼠纤溶酶原丝氨酸蛋白酶
- 猪MSTN基因敲除载体的构建及细胞筛选被引量：3
- 2013年
- 构建猪肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因的打靶载体并获得敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞。以Puro为正筛选基因,白喉毒素-A(DT-A)为负筛选基因。将同源长臂和同源短臂分别插入Puro基因的两侧。同源长短臂分别为4 294bp和1 015bp,定点敲除MSTN基因的部分内含子2和部分外显子3。采用FugeneHD转染法将打靶载体转入37d的猪胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用嘌呤霉素筛选。结果显示,成功构建了对猪MSTN基因部分区域进行敲除的打靶载体,共得到48个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,获得2个正确同源重组的细胞克隆。
- 高飞唐成程全龙泉戴祯苏佰通赖良学逄大欣欧阳红生
- 关键词：MSTN基因基因敲除打靶载体
- 稳定表达植物甜味蛋白基因的哺乳动物细胞系及构建方法
- 本发明提供了一种植物甜味蛋白基因稳定表达哺乳动物细胞系及构建方法，将构建的pCAG-neo-Thauamtin载体线性化后，利用脂质体LipofectamineTM2000转染HEK-293细胞，经G418压力筛选10天...
- 赖良学闫森欧阳红生逄大欣李莉李小平高飞王海军宋娜周杨
- 文献传递
- 去乙酰化酶抑制剂Scriptaid显著提高西藏小型猪克隆胚胎体外发育囊胚率
- 引言供体核移入去核MⅡ期卵母细胞后表观遗传学的不完全重编程和重编程异常被认为是体细胞克隆技术效率低的一个重要原因。研究表明以去乙酰化酶抑制剂trichostatin A(TSA)处理小鼠,猪,牛,兔等克隆胚胎
- 樊娜娜赵本田欧阳振宋军杨东山赖良学
- 关键词：去乙酰化酶抑制剂体细胞核移植
- 文献传递
