赵华路
- 作品数：13 被引量：36H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划美国中华医学基金更多>>
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- miR-196a-5p抑制小鼠胚胎干细胞的自我更新
- 2014年
- 目的研究miR-196a-5p在小鼠胚胎干细胞(m ESC)自我更新中的功能。方法定量PCR法确定miR-196a-5p在m ESC早期分化过程中的表达。在胚胎干细胞中过表达miR-196a-5p类似物,通过集落形成实验、细胞周期分析、碱性磷酸酶染色和Oct4染色确定miR-196a-5p过表达对m ESC自我更新及增殖的影响。结果 miR-196a-5p在m ESC早期分化过程中表达上升(P<0.05),在m ESC中过表达miR-196a-5p类似物后,ESC的集落形成及增殖能力被明显抑制(P<0.01),碱性磷酸酶活性下降,Oct4蛋白水平也出现明显下降。结论 miR-196a-5p具有抑制m ESC自我更新的能力,在m ESC早期分化过程中可能发挥重要作用。
- 赵华路姚南魏雪菊王兰兰张俊武黄粤余佳
- 关键词：小鼠胚胎干细胞自我更新
- miR-24通过靶基因Sp1调控β-类珠蛋白表达被引量：3
- 2013年
- 为了研究miR-24对于珠蛋白表达的调控作用,并明确其作用机制。首先采用定量PCR的方法确定miR-24在红系分化过程中的表达变化情况,以及miR-24过表达后珠蛋白的表达变化情况。进而通过报告基因实验以及Western blotting的方法确定miR-24的靶基因。通过表型回复实验证明miR-24是否通过靶基因调控珠蛋白的表达。结果发现在hemin诱导的K562细胞以及EPO诱导的造血干/祖细胞向红系分化过程中,miR-24表达上调,在K562细胞中过表达miR-24可以促进红系分化过程中ε-和γ-珠蛋白的表达上调,进一步的研究表明miR-24是通过靶基因Sp1来行使对珠蛋白的调控作用的。以上结果表明miR-24通过负调节其靶基因Sp1促进红系分化过程中珠蛋白的表达上调。
- 马艳妮王斌巩蓓王芳赵华路张俊武余佳
- 关键词：珠蛋白SP1红系分化K562细胞
- ZNF330促进红系分化
- 2015年
- 目的探索ZNF330对红系分化的影响及作用机制。方法用hemin诱导K562细胞向红系分化,用real-time PCR检测ZNF330的表达;ZNF330的RNAi慢病毒颗粒感染CD34+细胞并向红系诱导后用real-time PCR检测CD235a和γ-globin的表达。在293T/17细胞中,用双荧光报告系统检测ZNF330是否具有转录激活作用;在293T/17细胞中,用Co-IP检测ZNF330与mRNA降解途径中ZNF408的相互作用。结果在hemin诱导的K562细胞向红系分化过程中ZNF330表达逐渐升高;抑制ZNF330后,CD34+细胞中红系分化标志CD235a和γ-globin的表达下降(P<0.05);未检测到ZNF330的转录激活结构域;双向Co-IP证明ZNF330与ZNF408是相互作用蛋白。结论ZNF330促进红系细胞分化,一个可能的机制是通过与一个参与mRNA降解途径的因子ZNF408的相互作用。
- 刘晓玲包韩乌云赵华路肖体先杜鸿琳王芳
- 关键词：CD34+细胞K562细胞红系分化
- 氯化钠密度梯度离心法制备用于显微注射的外源DNA片段被引量：2
- 2003年
- DNA显微注射是生产转基因动物最可靠和最常使用的一种方法,外源DNA的纯度对显微注射的成功起着至关重要的作用。本文介绍用氯化钠密度梯度离心的方法制备用于显微注射的外源DNA片段。与传统的琼脂糖凝胶回收的方法相比较,用此方法制备的外源DNA片段对小鼠受精卵进行显微注射后,受卵体母鼠的胚胎存活率,以及子代小鼠的外源基因整合率均有明显的提高。这一方法可为进一步提高转基因动物的成功率,提供方法学上的参考。
- 刘立仁赵华路张俊武
- 关键词：显微注射胚胎存活率
- microRNA-144～451基因簇促进红系分化被引量：1
- 2015年
- 目的 探索microRNA-144～451基因簇在红系分化过程中的功能及调控机制.方法 用real-time PCR法检测microRNA-144和microRNA-451的表达;用ChIP结合real-time PCR的方法检测GATA-1和EKLF在microRNA-144～451基因簇上游的结合及调控;使用microRNA-144和microRNA-451模拟物转染K562细胞,并用联苯胺染色和real-time PCR方法检测K562细胞向红系分化;用Western blot方法检测红系分化抑制因子GATA-2表达.结果 microRNA-144和microRNA-451在K562细胞红系分化过程中呈现表达逐渐上升趋势;转录因子GATA-I和EKLF可以结合在microRNA-144 ～ 451基因簇并激活microRNA-144或microRNA-451的表达;在K562细胞中过表达microRNA-144或microRNA-451均可促进hemin诱导的红系分化;另一方面,microRNA-144和microRNA-451可以通过抑制GATA-2的表达促进细胞向红系分化.结论 microRNA-144～ 451基因簇在红系分化过程中受到GATA-1和EKLF的激活调控,同时通过抑制GATA-2的表达促进红系发育成熟.
- 刘晓玲王芳赵华路余佳
- 关键词：GATA-1GATA-2
- miR-34a-5p抑制K562细胞红系分化被引量：4
- 2015年
- 目的探索miR-34a-5p对K562细胞红系分化的影响。方法分别用miR-34a-5p模拟物和反义抑制寡核苷酸转染K562细胞,用real-time PCR法检测过表达或干扰效率,并进一步用流式细胞术和联苯胺染色法检测K562细胞向红系的分化情况;通过Western blot方法检测miR-34a-5p的靶基因。结果 miR-34a-5p在K562细胞红系分化过程中呈现表达下降趋势;在K562细胞中过表达miR-34a-5p可抑制hemin诱导的红系分化(P<0.05);反之,干扰K562内源的miR-34a-5p表达会对K562红系分化产生促进作用(P<0.01);另一方面,miR-34a-5p通过靶向抑制c-MYB的表达抑制细胞向红系分化。结论 miR-34a-5p通过抑制c-MYB在K562细胞早期红系分化过程中发挥促进作用。
- 赵华路卜雯婧李玉霞翟頔温馨余佳
- 关键词：K562C-MYB红系分化
- miR-29a和miR-142-3p促进髓系分化的基因调控网络被引量：1
- 2014年
- 目的深入了解miR-29a/miR-142-3p参与促进髓系分化的调控网络。方法首先实现miR-29a和miR-142-3p在HL-60细胞中的过表达,同时使用PMA以及ATRA分别诱导HL-60细胞向单核及粒系分化。May-GrünwaldGiemsa染色方法观察核形态变化,Real-time PCR检测细胞内CD11和CD14的表达。mRNA表达谱芯片分析获得表达模式相似的基因,利用DAVID和Gene MANIA进行GO categories和信号通路归类分析。Pic Tar和Target Scan进行靶基因预测,双荧光报告基因实验确定靶基因的真实性。结果 miR-29a/miR-142-3p过表达细胞与PMA/ATRA诱导分化细胞在整体基因表达模式上有较高的相似度,而表达模式相似的基因大多与细胞分化相关,且在GO分析中显著富集。同时,ZBTB5、Ca MKK2、SUV420H2、TRIB2和CANX被确定为miR-29a新的靶基因。结论 miR-29a/miR-142-3p通过调节其靶基因活性,引发整个基因表达调控网络的改变,使之趋向于髓系分化过程中的基因表达变化,从而促进髓系分化进程。
- 董贺马艳妮董磊赵华路张俊武王芳余佳
- 关键词：基因表达
- 载脂蛋白E ε4和ε2等位基因与胎儿宫内发育的关系被引量：3
- 2008年
- 目的研究载脂蛋白E（ApoE）ε4和ε2等位基因与胎儿宫内发育的关系。方法以聚合酶链反应．限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）方法检测1418名北京协和医院出生人群的ApoE基因型，计算等位基因频率，收集其出生时的相关指标。通过单因素分析和多因素Logistic回归分析比较ApoE ε4和ε2等位基因与新生儿发育状态的关系。结果本研究人群中ApoE ε2、ε3和ε4等位基因频率分别为8．11％、83．39％和8．50％。单因素分析结果表明，携带82等位基因者的出生体质量指数（ponderal index，PI）构成差异有统计学意义（χ^2=4．87，P=0．027），其头围、胎盘质量和孕周构成差异没有统计学意义。多因素分析结果表明，调整了性别、年龄、出生头围、胎盘质量、孕周、产次和产妇年龄等因素，携带ApoE ε2等位基因与小PI呈负相关（χ^2=5．077，P=0．024）。没有发现携带ApoE ε4等位基因与新生儿发育状态存在关联性。结论ApoE ε2等位基因对PT有保护作用，没有发现ApoE ε4等位基因与胎儿宫内发育有关。
- 郭峰张振馨许群张俊武赵华路
- 关键词：胎儿发育载脂蛋白E类等位基因人体质量指数
- 用天然突变体和正常β珠蛋白基因簇研究人γ珠蛋白基因调控和开关
- 张俊武刘立仁黄小东张雪青宋文风张昕阳学贤赵华路杜占文邱志明黄瑞彬吴冠芸刘晓玲赵艳君马艳妮王方年陈松森刘体超沈洁鞠丽梅乔军陈平龙桂芳方福德张宏元罗元明黄承乐候春江汪宁邱泽风
- 该本项目研究成果对揭示人胎儿γ珠蛋白基因表达调控和开关机制具有重要意义，并为发展通过重新活化在成人期已关闭的γ基因治疗β-地中海贫血和镰刀型贫血的方法提供了重要线索。但把成果实际应用于这类疾病的治疗，尚需大量深入的研究工...
- 关键词：
- 关键词：基因调控
- 载脂蛋白E基因多态性与阿尔茨海默病被引量：16
- 2003年
- 利用PCR RFLP方法分析了中国汉族人群中 16 0例散发性阿尔茨海默病 (Alzheimerdisease,AD)患者和 195例正常对照老年人中载脂蛋白E(APOE)基因多态性分布的差异。结果表明 ,APOE 3种等位基因ε2、ε3和ε4的频率在AD组和对照组分别为 0 0 5 6、0 713、0 2 31和 0 0 82、0 84 4、0 0 74。APOEε4等位基因携带个体患AD的危险为非携带个体的 3 82倍 (χ2 =2 8 7,P <0 0 0 1)。 6 5岁以上APOEε4携带个体患AD的危险为非携带个体的 5 38倍(χ2 =2 9 8,P <0 0 0 1) ,说明年龄因素可能影响ε4与AD间的相互作用。APOE等位基因和基因型频率在轻、中和重度痴呆病人间的分布无明显差异 (P >0 0 5 ) ,提示APOE基因多态性可能与AD患者的痴呆程度无关联。APOEε4基因型频率在女性AD病人中的分布略高于男性AD病人 (4 3 0 %对 36 5 % ) ,女性ε4携带个体患AD的危险也高于男性ε4携带个体 (4 3倍对 3 3倍 ) ,但统计学分析未检测到这些差异的显著性 (P >0 0 5 )。ε2等位基因频率在AD患者男性亚组明显低于女性亚组 ,也低于对照人群的男性亚组 (P <0 0 5 ) 。
- 陈等张俊武张振馨赵华路李晓青吴亚宁屈秋明
- 关键词：阿尔茨海默病载脂蛋白EPCR-RFLP
