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利用SYBR Green检测衣原体Real-Time PCR方法的建立被引量：2: 2006年; 利用SYBR Green建立了检测种特异性衣原体的Real-Time PCR方法。本方法应用衣原体种特异性的高度保守特异引物，能够扩增627bp特异片段；使用定量标准基因组DNA，本方法能准确检测最少250fg衣原体DNA。Real-TimePCR方法与免疫荧光方法的检测结果表明：检测4种衣原体临床样本，Real-TimePCR敏感性均在96％～98%；特异性均为100％；这两种方法符合率达97％以上（n=60）；批内和批间重复性试验结果表明，本方法具有良好的准确性。本方法的建立对于快速、准确检测临床样本种特异性衣原体提供了一种切实有效的方法。; 杨建民郝永新赵德明何诚; 关键词：SYBR 衣原体 REAL-TIME PCR

PrPc重组蛋白脑内接种金黄地鼠对mRNA表达的影响: 目的为了观察PrPc重组结构蛋白的病原特征及病理组织改变特点,同时探求PrPc重组结构蛋白对PrPc基因表达的影响,为进一步研究PrPc生物学特性奠定基础。方法将PrPc重组蛋白颅内接种至金黄地鼠,临床观察记录。经过10...; 杨建民赵德明李宁吴长德宁章勇郝永新韩彩霞; 关键词：传染性海绵状脑病组织病理学分析实时荧光定量RT-PCR; 文献传递

PrP^c重组蛋白脑内接种金黄地鼠对mRNA表达的影响被引量：3: 2005年; 为明确将牛PrPc重组蛋白接种金黄地鼠脑内是否引起异常临床表现、脑组织病理学变化及对其mRNA表达产生影响,为进一步研究PrPc蛋白与异构体PrPsc的结构转换机制提供基础数据,将纯化的牛PrPc重组蛋白磷酸盐缓冲液制剂进行地鼠颅内接种,约3μL/只,对照接种磷酸盐缓冲液(PBS);102 d后取出脑组织:一部分福尔马林固定后进行常规H.E.染色观察,另一部分提取脑组织总RNA,进行实时荧光定量RT-PCR检测。结果表明:处理未见临床异常表现;大脑、小脑、脑干组织病理学检测未见海绵状空泡变性和淀粉样斑;大脑PrPcmRNA表达水平无显著性差异。上述结果表明,用PrPc重组蛋白接种,在检测时间102 d内未引起金黄地鼠行为和脑组织的异常改变。; 杨建民赵德明李宁吴长德宁章勇郝永新韩彩霞; 关键词：传染性海绵状脑病实时荧光定量RT-PCR MRNA表达水平

小脑颗粒神经元细胞模型材料制备被引量：3: 2005年; 小脑颗粒神经元是动物传染性海绵状脑病发生、发展过程中的主要反应性细胞之一,小脑颗粒神经元的体外分离、纯化和鉴定是建立动物传染性海绵状脑病细胞作用模型的关键步骤。根据大鼠小脑颗粒神经元的生存特性,按照抑制筛选的原理,对小脑颗粒神经元进行了体外分离和培养,经神经元特异性的烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色,表明体外培养的小脑颗粒神经元细胞纯度较高,可以用于细胞作用模型的建立。; 宁章勇赵德明杨建民崔亚利郝永新秦秀慧马李颖; 关键词：小脑颗粒神经元

弓形虫瞬时转染中不同启动子介导的双报告基因优化: 在弓形虫外源基因转染研究中,基于弓形虫不同启动子,对叩甲虫荧光素酶和荧光蛋白双报告基因可否在弓形虫转染中实现同时定性和定量检测至今未见尚报道。方法针对弓形虫3个不同启动子GRA1、DHFR和SAG1,构建了一系列荧光素酶...; 郝永新李雪莲陈丹刘群; 关键词：弓形虫瞬时转染荧光素酶荧光蛋白流式细胞术; 文献传递

牛PrPc结构蛋白基因亚克隆及原核表达: 目的制备PrPc重组结构蛋白,为研究与人和动物海绵状脑病发病有关的膜蛋白PrPc的生物学功用提供试验材料。方法采用PCR扩增并克隆奶牛PrPc基因,经DNA序列分析后,亚克隆至PET30a(+)表达质粒,优化条件进行目的...; 杨建民赵德明宁章勇李宁吴长德郝永新韩彩霞; 关键词：朊病毒奶牛 PRPC; 文献传递

实验动物恒河猴朊病毒基因分析: 2005年; 目的　通过对拟应用于航天飞船模拟试验的实验动物恒河猴进行朊病毒基因检测和分析 ,了解其朊病毒疾病易感性 ,进而为该试验所用实验动物质量提供朊病毒疾病的遗传数据。方法　根据已报道的猴朊病毒基因序列设计引物对 ,采用PCR方法扩增恒河猴朊病毒基因 ,将其克隆到T—VECTOR ,序列测定及分析。结果　序列测定及分析表明所克隆的恒河猴PRNP基因片段为 76 2bp ,该基因内无内含子 ,包含了PRNP完整编码区序列 ,编码 2 5 3个氨基酸的前体蛋白 ,推测其相对分子质量约 2 7 6× 10 3。与已报道的猴的相应序列作比较 ,核苷酸序列同源性分别为 95 %以上 ,其编码的氨基酸同源性均为 95 %以上。其中发现了已报道的多态性位点N97S ,H10 0N和未曾见报道的Q5 2E点突变位点 ,以及沉默突变位点A78G ,T84C ,T4 95C ,A5 6 4G ,C6 5 4 ,未发现与朊病毒敏感性连锁的氨基酸多态位点P10 2L、M12 9V ,N171S和E2 19K。结论　航天医学实验所用 17只恒河猴不存在朊病毒敏感性基因。; 杨建民赵德明郝永新阚广捍李宁秦秀慧马李颖; 关键词：恒河猴朊病毒实验动物航天医学传染性海绵状脑病

大熊猫朊病毒基因克隆与序列分析被引量：1: 2004年; 根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列设计引物对，采用PCR方法扩增了大熊猫的朊病毒基因，将其克隆到T-Easy载体，序列测定及分析表明所克隆的大熊猫PRNP基因(GeneBank收录号为AF327449)片段为795bp，编码264个氨基酸的前体蛋白，推测其分子量约28．5ku。与已报道的牛(GeneBank收录号为AF455119)、绵羊(GeneBank收录号为AF367623)的相应序列作比较分析，核苷酸序列同源性分别为99％和83％，其编码的氨基酸同源性均为100％。在所克隆的大熊猫PRNP基因中未发现与朊病毒敏感性连锁的氨基酸多态性位点。; 杨建民赵德明李宁宁章勇郝永新秦秀慧; 关键词：大熊猫朊病毒基因克隆

朊病毒致病机理研究进展被引量：5: 2004年; 朊病毒病是由一种新型蛋白感染因子引起的人和动物可转移神经退化性疾病 ,又称海绵状脑病 ,最终可导致患者死亡。作者就朊病毒的致病机理 ,从朊病毒学说 ,致病性、生物学特性进行阐述 ,并从病原基因遗传结构特点 ,致病蛋白的结构特点和形成机制作以综述 ,为该类疾病的防治提供理论依据。; 杨建民郝永新宁章勇赵德明; 关键词：朊病毒致病机理疾病特征分子生物学

贝氏隐孢子虫感染SPF鸡对禽流感疫苗的免疫抑制作用: 有研究报道,贝氏隐孢子虫感染鸡可引起鸡免疫反应改变,从而导致鸡对多种病原的易感性增强。鸡群中的C.baileyi感染较为普遍,呈世界性分布,且感染鸡群存在免疫抑制现象;目前禽流感疫区鸡群普遍接种禽流感疫苗,因此有必要了解...; 郝永新刘群; 关键词：禽流感贝氏隐孢子虫免疫抑制疫苗接种; 文献传递

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