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弓形虫SAG1基因在HeLa细胞表达的研究: 2001年; 目的 :研究弓形虫 SAG1基因在 He L a细胞中的表达 ,为研制弓形虫疫苗奠定基础。方法 :采用磷酸钙 -DNA共沉淀转化法将重组质粒 pc DNA3- SAG1导入 He L a细胞 ,用 G418进行选择培养 ,筛选出表达阳性的细胞克隆 ,再通过培养和加压 ,建立稳定分泌 SAG1抗原的阳性 He L a细胞克隆株 ,分离表达产物 ,进行 SDS- PAGE、Western blot分析。结果 :采用钙沉淀法成功地将重组质粒 SAG1导入 He L a细胞 ,通过 G418选择和加压培养 ,获得稳定分泌 SAG1抗原的阳性 He L a细胞 ,表达的蛋白经 SDS- PAGE、Western blot分析 ,显示其分子量 30 k Da蛋白 ,与理论值相符。结论 :成功构建重组质粒 pc DNA3- SAG1,建立稳定分泌 SAG1抗原的阳性 He L; 周永安乔巨陈观今郭虹吕芳丽; 关键词：弓形虫 HELA细胞疫苗控制基因表达

弓形体SAG1基因DNA诱导小鼠体液免疫应答及保护性研究: 2001年; 目的 :用重组真核表达质粒 pc DNA3- SAG1直接免疫 BAL B/ c小鼠 ,观察其 DNA免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用。方法 :大量制备重组质粒 pc DNA3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内。抗体滴度用 EL ISA法进行测定 :采用 PCR方法对小鼠的血液组织外源基因进行检测 ;对试验组及对照组进行 RH株攻击感染 ,并对其进行分析。结果 :用 EL ISA法检测的抗体 Ig G滴度为 1∶ 2 5 6 0 ;免疫后三周、六个月从免疫鼠的血液组织中用 PCR仍可检测到特异的SAG1基因的存在 :体外弓形虫攻击感染实验组和对照组 ,可见实验组的存活时间较对照组时间延长 (P<0 .0 5 )。结论 :重组质粒 pc DNA3- SAG1免疫 BAL B/; 周永安高宝英陈观今郭虹吕芳丽; 关键词：弓形体 DNA免疫免疫应答小鼠

弓形虫速殖子分泌排泄抗原研究进展: 1999年; 弓形虫分泌排泄抗原具有重要功能。本文综述了近年来速殖子棒状体、致密颗粒及微线体的主要分泌排泄抗原在分子生物学方面的研究进展。; 郭虹; 关键词：弓形虫分泌排泄抗原分子生物学速殖子

SAG1和IL-2基因佐剂混合免疫诱导鼠抗弓形虫感染的研究被引量：14: 2002年; 目的　了解编码SAG1的重组质粒和IL 2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应 ,评价该疫苗对弓形虫的保护作用。方法　编码SAG1的质粒和鼠源性IL 2表达载体以 10 0 μg的剂量免疫小鼠 ,3w后两次以相同的剂量加强免疫 ,分别以PBS和空质粒 pcDNA3 感染。采用ELISA法测定抗体水平、亚型、IFN γ和IL 4的含量 ,PCR及原位杂交检测感染鼠中DNA的整合及降解。所有鼠均由强毒力RH株弓形虫感染。结果　SAG1表达质粒 3次免疫后鼠体内特异IgG水平明显增高 ,IL 2表达质粒的联合使用导致IgG2a水平升高和IFN γ的产生。混合质粒注射的小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长。结论　由SAG1DNA诱导的免疫应答因IL - 2表达质粒的共同注射而增强。; 陈观今陈海峰郭虹郑焕钦汪琦; 关键词：DNA免疫弓形虫基因佐剂

弓形虫侵入相关分子棒状体蛋白1基因重组质粒的克隆及其DNA免疫研究(英文)被引量：4: 2001年; 目的　构建含编码弓形虫棒状体蛋白 1基因的重组质粒 ,将该重组质粒DNA免疫小鼠 ,观察其所诱导的免疫保护性反应。方法　用PCR技术从弓形图ZS2分离株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白 1(ROP1)的基因片段 ,重组入pUC18 ROP1中的ROP1外源基因片段经酶切 ,连接等反应 ,亚克隆入pcDNA3真核表达载体 ,再经含氨苄LB培养基筛选 ,酶切 ,PCR鉴定 :获取阳性克隆并大量制备 ,肌注法DNA免疫BALB/C小鼠 ,每只鼠 10 0 μg ,两周后同量加强免疫一次 ,以pcDNA3空质粒及生理盐水组为对照。分别于加强免疫后 30d ,5 0d ,70d ,用MTT法测定小鼠睥脏NK细胞活性 ,T淋巴细胞增殖活性 ,间接免疫荧光法记数T细胞亚群及ELISA检测血清IgG抗体。结果　从ZS2株基因DNA中扩增出特异的ROP1基因片段并经TaqI酶切鉴定 :克隆成功pcROP1重组质粒。用该质粒免疫小鼠 30天后 ,脾脏明显增大 ;三次测定结果免疫组脾T淋巴细胞增值活性明显高于生理盐水及空质粒对照组。NK细胞杀伤活性免疫组钧高于对照组。T细胞亚群 ,CD4 + 细胞数与对照组相比 ,无明显变化 ,而CD8+ 细胞数显著增高 (P <0 0 5 )。血清抗体IgG 70d内检测结果 8,与对照相比 ,无明显增高 ;而免疫后 90d检测 ,明显增高。抗体滴度为本 :1∶10 0。结论　构建成功弓形虫pcROP1重组质粒 ,; 陈观今郭虹吕芳丽郑焕钦; 关键词：弓形虫克隆 DNA免疫

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅲ.免疫鼠肌组织表达产物免疫酶法定位及血清IgG抗体测定被引量：9: 1999年; 目的　用所构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１真核表达重组质粒，经肌肉注射免疫小鼠，观察它在肌组织中的表达及不同免疫途径所诱导的体液免疫应答。方法　碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１质粒，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每只鼠注射１００ｕｇ，两周后同量加强免疫一次，以ｐｃＤＮＡ３空质粒及生理盐水组为对照。于免疫后第５０天用间接免疫酶法检测注射局部肌组织重组蛋白的表达；ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果　免疫鼠肌组织石蜡切片呈特异性阳性反应；血清ＩｇＧ抗体９０天后测定为阳性；皮下及肌肉不同免疫途径血清均显示阳性结果，无显著性差异。结论　ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１质粒ＤＮＡ免疫小鼠后，肌组织内有重组蛋白表达。; 郭虹陈观今郑焕钦周永安; 关键词：重组质粒 DNA免疫

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究 IV.免疫鼠血清细胞因子IFN-γ、IL-2及NO的测定被引量：15: 2000年; 目的　用 pc- ROP1重组质粒免疫小鼠 ,观察其对细胞因子 IFN-γ、IL - 2及 NO的影响。方法　碱裂解法大量制备 pc- ROP1质粒 DNA,经肌肉注射免疫 BAL B/ c小鼠 ,每只鼠注射 10 0μg,两周后同量加强免疫一次 ,以 pc DNA 3空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后第 30天、5 0天、70天共三次用双夹心 EL ISA测定血清细胞因子 IFN-γ、IL - 2含量 ;酶法测定NO活性。结果　三次检测免疫组 IFN-γ、IL - 2及 NO含量均显著高于对照组 ,随着免疫时间的延长有增高趋势。结论　 pc-ROP1重组质粒 DNA免疫小鼠 ,可刺激细胞因子 IFN-γ、IL - 2产生。; 郭虹陈观今郑焕钦; 关键词：弓形虫病 DNA免疫质粒

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅴ.IFN-γ基因真核表达重组质粒的构建及其在DNA免疫中基因佐剂的作用被引量：6: 1999年; 目的　构建ＩＦＮ－γ基因真核表达重组质粒作为基因佐剂，观察其与ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１（ｐｃ－ＲＯＰ１）ＤＮＡ共同免疫小鼠所诱导的免疫应答。方法　将ＩＦＮ－γ基因片段定向插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３，双酶切鉴定，获得ｐｃＩＦＮ重组子；碱裂解法大量制备，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每只鼠注射ｐｃＩＦＮ、ｐｃ－ＲＯＰ１各１００μｇ，两周后同量加强免疫一次，以ｐｃＤＮＡ３空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后第３０天、５０天、７０天共三次用ＭＴＴ法测定小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞增殖活性及ＮＫ细胞活性；双夹心ＥＬＩＳＡ测定血清细胞因子ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及酶法测定ＮＯ含量；ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果　构建成功的作用下，该两项指标均明显提高，且ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及ＮＯ水平均较不加佐剂组显著提高（Ｐ＜０．０１）；而对ＩｇＧ抗体滴度无显著影响（Ｐ＞０．０５。结论　ＩＦＮ－γ基因佐剂具有协同ｐｃ－ＲＯＰ１ＤＮＡ免疫的作用，可增强免疫鼠细胞免疫应答，ＩＦＮ－γ。; 郭虹陈观今郑焕钦; 关键词：弓形虫 DNA免疫

阳离子脂质体介导的弓形虫SAG1/ROP1复合基因的DNA免疫: ＜正＞弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种危害人体及家畜健康的食源性寄生虫。人群感染普遍广泛,没有年龄和性别的差别,均可得到感染。国外人群的感染率在0.6％～94。6％,国内为 0.33％～11.8％。人...; 陈海峰陈观今郑焕钦郭虹吕芳丽; 文献传递

弓形虫不同分离株ROP1和P30基因的体外扩增被引量：8: 1999年; 通过体外扩增弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２、ＧＴ１４个分离株的编码棒状体蛋白（ＲＯＰ１）和主要表膜蛋白（Ｐ３０）抗原的基因片段，比较虫株间差异，为克隆及其ＤＮＡ免疫的研究做准备。特定引物的设计；弓形虫虫株的复苏、接种、收集、纯化；提取弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＴ１分离株的基因组ＤＮＡ，并以此为模板进行ＰＣＲ扩增，扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳分析。结果从４个分离株基因组ＤＮＡ中均扩增出编码ＲＯＰ１、Ｐ３０抗原的基因片段，其大小ＲＯＰ１约７５６ｂｐ，Ｐ３０约１０２５ｂｐ，电泳条带未见虫株间的明显差别。研究表明，所扩增４个弓形虫分离株的ＲＯＰ１和Ｐ３０基因片段均与理论预测值相符，并具有高度保守性。; 郭虹陈观今郑焕钦周永安; 关键词：弓形虫分离株表膜抗原扩增

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郭虹

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