何奇松
- 作品数：29 被引量：69H指数：4
- 供职机构：广西动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西壮族自治区自然科学基金河池市科学研究与技术开发计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- O型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA诊断方法的初步建立
- 2016年
- 利用表达的重组融合蛋白pGEX-6P-1-VP1作为抗原,用PET-32a-VP1蛋白免疫家兔获得的阳性血清作为FMDV阳性血清的竞争抗体,建立了检测FMDV抗体的竞争ELISA,并进行了条件优化,利用统计学方法计算竞争ELISA的阳性临界值。结果显示,重组蛋白抗原的最适包被质量浓度为1μg·mL^(-1),待检血清、酶标抗体和高免血清的最佳稀释度分别为1∶40、1∶2000和1∶500;与液相阻断ELISA试剂盒相比较,该方法的敏感性为91.3%,特异性为95.1%,符合率为96.7%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、重复性好,可用于O型FMDV血清抗体水平的检测。
- 何奇松陈磊颜健华冯淑萍黄胜斌胡巧云梁晟易春华许瑞胜韦达有兰宗宝熊毅
- 关键词：O型口蹄疫病毒竞争ELISA
- A型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA检测方法的初步建立被引量：3
- 2015年
- 用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀释度为1∶2,单抗最大稀释度为1∶400,酶标抗体工作浓度为1∶5000,封闭液、待检血清和单抗作用时间分别为60、60、45 min;阴阳性判断抑制率(PI)≥30%为阳性。与液相阻断ELISA检测试剂盒比对,符合率为84.8%。试验表明,建立的单抗竞争ELISA检测方法具有特异性强、稳定性好等优点,可用于口蹄疫A型血清抗体的检测,这为口蹄疫A型免疫抗体水平检测、疫情监控及流行病学调查提供了技术平台。
- 颜健华何奇松蒋家霞冯淑萍黄胜斌胡巧云易春华许瑞胜梁晟熊毅
- 关键词：A型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA
- 广西马流感H3N8毒株的HA基因序列测定与分析被引量：3
- 2015年
- 为了了解广西马群流感病毒流行病学状况,试验通过RT-PCR方法,从广西4个市采集的104份马组织样品中检测出1份马流感病毒阳性,经鸡胚接种分离到病毒,并进行了血清学检测、基因扩增和测序比对。结果表明:分离到的病毒为H3N8亚型马流感病毒,HA基因阅读框为1 710 bp,编码569个氨基酸,与哈萨克斯坦2007年分离毒株(Otar07)的核苷酸、氨基酸同源性最高,分别为99.5%和99.6%。但与Otar07株相比,广西分离株HA基因蛋白在第11,12位多了苯丙氨酸(F)和异亮氨酸(I)2个氨基酸,存在变异。绘制的系统进化树显示广西分离株属于美洲谱系中的佛罗里达第2分支。
- 冯淑萍韦建华易春华刘杰标熊毅何奇松黄胜斌颜健华
- 关键词：马流感H3N8HA基因
- 猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 根据GenBank中5′端非编码区的靶序列设计了用于TaqMan荧光定量PCR的1对引物及TaqMan探针,以猪瘟活疫苗病毒为模板,在常规PCR的基础上优化了TaqMan荧光定量PCR反应条件,建立了猪瘟病毒(CSFV)TaqMan荧光定量PCR检测方法。其敏感性和特异性试验结果表明,所建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法对CSFV具有很高的特异性,其检测灵敏度可达5.03×10-2μg/μL。说明TaqMan荧光定量PCR适用于CSFV的快速检测。
- 马琳付薇何奇松徐贤坤易春华孙翔翔蒋家霞黄胜斌熊毅
- 关键词：猪瘟病毒TAQMAN探针
- 广西H3N8亚型马流感病毒耐药性分析被引量：3
- 2015年
- 【目的】了解广西H3N8亚型马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)对抗流感病毒药物的耐药性,为临床科学用药提供参考。【方法】采用RT-PCR对广西H3N8亚型EIV分离株A/Equine/Guangxi/1/09(简称GX09株)进行M基因和NA基因扩增,测序分析M2基因和NA基因特征及其与耐药性相关的氨基酸位点,并进行生物学耐药性试验。【结果】GX09株M2基因的相关耐药性位点(L26F、V27A、A30T、S31N、G34E)均未发生变异;在NA基因相关耐药性位点方面,也仅在S247A位点处出现氨基酸替换,其他位点均较保守,未出现氨基酸替换。生物学耐药性试验结果表明,GX09株对金刚烷胺敏感,对奥司他韦已产生耐药性。【结论】广西目前流行的EIV对金刚烷胺敏感,在流感易发季节仍可选用烷胺类药物对广西地区的马流感进行预防和治疗。
- 颜健华何奇松熊毅冯淑萍胡丽萍韦建华
- 关键词：马流感病毒NA基因耐药性
- 2型猪链球菌SspA基因序列及其免疫原性分析被引量：4
- 2015年
- 【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离株中扩增其相应片段,并进行测序分析;同时以Ssp A基因的重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,再以SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况,Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】Ssp A基因上游片段较保守,而下游片段变异区间较大。在IPTG诱导下,含有重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C的菌株表达出3段融合蛋白,其中,Ssp N和Ssp C重组蛋白存在于破碎菌体的上清液中,而Ssp M重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中,其大小为:Ssp N重组蛋白66 k D,Ssp M重组蛋白65 k D,Ssp C重组蛋白32 k D。Western blotting鉴定结果显示,3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血清发生反应,且以Ssp N重组蛋白反应最强烈,而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应。【结论】2型猪链球菌Ssp A基因上游片段较保守,经大肠杆菌重组表达的Ssp N蛋白免疫原性较强,且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫的潜力,可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段。
- 胡巧云袁小宁熊毅何奇松黄胜斌孙翔翔吴军颜健华冯淑萍李军郭建刚
- 关键词：2型猪链球菌免疫原性
- 广西猪源H9N2亚型流感病毒全基因组序列分析被引量：3
- 2012年
- 【目的】了解广西猪源H9N2亚型流感病毒的来源及变异情况,为有效防控广西猪源H9N2亚型流感病毒奠定基础。【方法】运用RT-PCR对广西分离株A/SW/GX/S11/05(H9N2)进行全基因组扩增,并克隆测序及对比分析。【结果】扩增获得的HA、NA、NP、M、NS、PB1、PB2和PA基因片段长度分别为1683、1401、1497、1027、890、2233、2280和2151bp,其推导氨基酸分别为561、467、499、349、338、744、760和717aa。经过序列分析,发现各基因片段的核苷酸及其推导氨基酸与A/Bird/GX/62/05株的同源性最高,分别为96.2%～100.0%和98.5%～99.6%;系统进化分析也表明A/SW/GX/S11/05株与A/Bird/GX/62/05株的亲缘关系最近。【结论】广西猪源H9N2亚型流感病毒属于欧亚谱系的北京亚系,且在一定时间内不同宿主间均有感染,在今后的流感病毒防治工作中,跨种属传播是一个不可忽视的问题。
- 伍和明韦达有易春华徐贤坤何奇松孙翔翔蒋家霞付薇熊毅
- 关键词：H9N2亚型全基因组
- 鹅源H9N2亚型禽流感病毒PB2和PB1基因序列分析被引量：1
- 2011年
- 采用RT-PCR方法对1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒(GS/GX/01/07)RNA聚合酶基因PB2和PB1分别进行了扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1开放阅读框(ORF)分别由2 280和2 277个碱基组成,分别编码759和758个氨基酸。经同源性和系统进化树分析,该毒株RNA聚合酶基因PB2和PB1与H9N2亚型欧亚谱系中的第2亚群代表株QA/HK/G1/97的核苷酸和氨基酸同源性在95%以上,亲缘关系较近。
- 付薇覃芳芸马琳徐贤坤黄胜斌易春华孙翔翔何奇松蒋家霞熊毅
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型
- 广西野鸟H9N2亚型流感病毒的分离与鉴定被引量：3
- 2011年
- 【目的】探讨H9N2亚型流感病毒在野鸟中的存在与传播,为广西流感疫情动态监测和防控及人流感预防监测提供重要依据。【方法】采集广西野鸟肺脏组织,将病料接种于9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔进行分离培养,血清学试验鉴定HA和NA亚型,并克隆扩增其HA和NA基因。【结果】该分离株能被H9亚型阳性血清抑制,神经氨酸酶抑制（NI）试验结果将其鉴定为N2亚型,判断该病毒属于H9N2亚型流感病毒,命名为A/wildbird/Guangxi/H2/07,对HA和NA基因进行序列分析,发现与流感病毒H9亚型和N2亚型同源性最高,分别达到82.4%~99.0%和83.1%~99.9%。【结论】H9N2亚型流感病毒已在广西野鸟中存在,该结论为广西流感疫情动态监测和防控提供了重要依据。
- 黄胜斌蒋家霞何奇松付薇孙翔翔马琳熊毅
- 关键词：野鸟HA基因NA基因
- 两种O型口蹄疫ELISA检测试剂盒的对比被引量：5
- 2016年
- 为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄疫疫苗的猪、牛、羊血清共计1121份进行了检测,对比两种试剂盒的特异性、敏感性、阳性检出率及符合率。检测结果表明,两种口蹄疫ELISA试剂盒的阳性检出率不同,LB-ELISA的阳性检出率比SPC-ELISA高2.4%;LB-ELISA试剂盒对血清抗体滴度水平的要求相比SPC-ELISA试剂盒要低,因此LB-ELISA试剂盒更适合于口蹄疫病毒感染的检测。
- 吕晓丽姚晓韵何奇松冯淑萍马军覃雨阳李雪梅熊毅颜健华
- 关键词：O型口蹄疫抗体
