刘仕平
- 作品数：21 被引量：16H指数：3
- 供职机构：西南大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学理学轻工技术与工程更多>>
- 一种基于Northern杂交检测家蚕microRNA的方法
- 本申请公开了一种基于Northern杂交检测家蚕microRNA的方法，包括以下步骤：RNA的分离纯化；探针与Marker的放射性标记和标记产物纯化；制胶和电泳；转膜与RNA分子的交联固定；预杂交和杂交；洗杂交膜和低温放...
- 刘仕平夏庆友
- 文献传递
- 家蚕异时性基因Bmlin-28的克隆及表达研究
- 2009年
- 本文通过对其他物种中相关基因的同源比对,首次在家蚕中鉴定了异时性基因Bmlin-28,并对其时空表达模式进行了分析。Bmlin-28在家蚕大造品种5龄3d的卵巢、精巢、血液中特异表达,其中在卵巢中的表达量最高;在3龄前期的表达量要高于3龄后期。
- 周挺高颂刘仕平尹纪云张丹宇夏庆友
- 关键词：家蚕
- Northern杂交检测家蚕microRNA的技术流程被引量：5
- 2014年
- microRNA(miRNA)是一类长度约22个碱基、具有重要转录后调控作用的非编码RNA。Northern杂交方法曾被认为是检测miRNA的金标准,但是由于影响实验结果的因素很多,要高质量地检测到这些短小、特殊的RNA分子也并非易事。在建立检测家蚕miRNA的Northern杂交技术平台基础上,详细介绍了相关的检测技术流程,包括miRNA的分离纯化、探针标记和Northern杂交的全过程,总结了该技术流程的特点以及操作中须重视的环节。所述内容具有很强的可操作性和实用性,可供研究人员检测家蚕miRNA和其他小RNA参考。
- 刘仕平夏庆友
- 关键词：家蚕微小RNANORTHERN杂交
- 40个基因组完全重测序揭示蚕的驯化事件及其相关基因被引量：1
- 2009年
- 我国家蚕基因组研究再获重大突破,研究成果再登《science》杂志,影响广泛。本刊特设专栏刊发该论文中文译文以及相关评述,以满足广大读者的需求。
- 夏庆友郭一然张泽李东玄兆伶李卓代方银李英睿程道军李瑞强程廷才蒋涛赛琳·贝凯赛琳·贝凯刘春刘春查幸福林英林英沈以红杰弗里·詹森杰弗里·詹森唐思赵萍赵萍徐汉福张国捷李俊曹建军刘仕平刘仕平何宁佳刘慧赵静叶辰杜周和杜周和潘国庆赵爱春曾巍吴平李春峰李春峰潘敏慧殷旭阳李大为王娟郑会松王文张秀清李松岗杨焕明鲁成鲁成周泽扬周泽扬向仲怀向仲怀
- 关键词：基因组相关基因家蚕《SCIENCE》驯化测序
- 家蚕microRNAs及其节律性表达
- MicroRNAs(miRNAs)是近几年在真核生物和少数病毒中发现的一类具有重要调控作用的非编码单链小分子RNA。它们通过与靶基因mRNA的3端非翻译区互补作用对靶基因进行转录后调控。本论文运用生物信息学方法对家蚕mi...
- 刘仕平
- 关键词：家蚕MICRORNA蜕皮激素
- 一种sgRNA及转基因表达载体、表达品系、筛选方法
- 本发明属于家蚕基因工程和人工育种技术领域，公开了一种sgRNA及转基因表达载体、表达品系、筛选方法。利用CRISPR/Cas9系统，首先建立一个表达let‑7Complex/Cluster(let‑7C)敲除所用sgRN...
- 刘仕平王伟
- 家蚕Bmyan基因的克隆表达和作为microRNA7靶基因的验证被引量：3
- 2015年
- microRNAs(miRNAs)是一类长约22 nt的非编码RNA,通过与其靶基因3′端非翻译区(3′-UTR)的结合来调节各项生命活动。克隆表达家蚕Bmyan基因,验证其是否是bmo-miR-7的靶基因对于深入研究家蚕变态发育机制有重要意义。基于同源性检索和PCR扩增,克隆了家蚕Bmyan基因CDS全长,编码476个氨基酸。序列分析表明,家蚕YAN蛋白的氨基酸序列保守,含SAM-PNT和ETs结构域。芯片数据、RT-PCR和定量PCR的检测结果表明,Bmyan在五龄3 d的家蚕头部、体壁、卵巢中高量表达,在其余组织中低量表达或不表达。在幼虫期,Bmyan表达水平相对较低,但在上蔟期和蛹期前4 d高量表达。通过3′RACE克隆了Bmyan基因的3′-UTR。RNAhybrid在线软件预测了其3'-UTR上bmo-miR-7的两个靶位点。构建了含有Bmyan基因3′-UTR和荧光素酶报告基因的转染载体,将该载体与bmo-miR-7的mimics序列共转染到家蚕胚胎细胞系BmE中,通过测定荧光素酶的活性,证明了Bmyan基因是bmo-miR-7的靶基因。本研究为进一步揭示bmo-miR-7和Bmyan在家蚕体内的生物学功能奠定了基础。
- 刘仕平黄亚玺尹纪云吴小燕周兰庭王伟夏庆友
- 关键词：家蚕克隆表达MICRORNA靶位点
- Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在制备家蚕microRNA超量表达系统中的应用
- 本发明公开了Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在制备家蚕microRNA超量表达系统中的应用，家蚕microRNA超量表达系统含有重组pFastBac1载体，重组pFastBac1载体由pFastBac1载体多克隆酶切...
- 刘仕平何婷尹权吴小燕黄亚玺王伟夏庆友
- 文献传递
- 利用Bac-to-Bac杆状病毒系统超量表达家蚕let-7簇microRNAs
- 2016年
- 【目的】利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统超量表达家蚕(Bombyx mori)let-7簇(cluster)micro RNAs:bmo-let-7、bmo-mi R-100和bmo-mi R-2795,为研究家蚕micro RNA的功能提供参考。【方法】克隆家蚕let-7 mi RNA簇(bmo-let-7 cluster,bmo-let-7-C)上各mi RNA前体(pri-let-7、pri-mi R-100与pri-mi R-2795)和bmo-let-7-C全长序列,以红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因为报告基因,昆虫细胞表达载体p Fast Bac1为穿梭载体,通过Tn7转座子把目的基因和报告基因转座到杆状病毒A.californica nucleopolyhedrovirus(Ac NPV)基因组上,获得各重组杆状病毒质粒(recombinant baculovirus plasmid,r Bacmid):Bac-let-7、Bac-mi R-100、Bac-mi R-2795和Bac-let-7-C。将重组Bacmid转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9,72 h后用荧光显微镜检查红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测mi RNAs的表达。对转染的Sf9细胞进行离心、收集上清液,获得具感染力的重组病毒,用于侵染新培养的Sf9细胞和注射家蚕幼虫个体,72 h后用荧光显微镜检查红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测mi RNAs的表达。【结果】成功将bmo-let-7-C上各mi RNA前体和bmo-let-7-C全长序列构建到杆状病毒基因组上,获得了各mi RNA及bmo-let-7-C的过量表达载体。将各重组过量表达载体分别转染草地贪夜蛾细胞系Sf9,72 h后在显微镜下观察到了红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测结果表明各mi RNA显著过量表达;通过离心收集的各mi RNA重组过量表达病毒粒子感染新培养的Sf9细胞72 h后检测到了更强的红色荧光蛋白信号,定量PCR结果表明各mi RNA均显著过量表达。将各mi RNA的重组病毒注射到家蚕5龄1 d幼虫体内后,均能显著超量表达相应mi RNA,但注射Bac-let-7-C后只有mi R-2795显著过量表达,并有明显的组织差异性,在丝腺中没有过量表达,在脂肪体、血液和中肠中显著过量表达。【结论】利用杆状病毒过量表达系统在草地贪夜蛾细
- 何婷尹权王伟黄亚玺吴小燕夏庆友刘仕平
- 关键词：家蚕微小RNA杆状病毒表达系统
- 家蚕microRNA 7靶基因Bmhairy的鉴定和转录表达模式被引量：1
- 2016年
- 【目的】micro RNA是一类长约22个碱基的非编码RNA,通过与其靶基因的特异性结合来调控新陈代谢和生长发育等多种生命活动。鉴定家蚕(Bombyx mori)Bmhairy,比较Bmhairy和bmo-mi R-7的表达模式,验证Bmhairy是否为bmo-mi R-7的靶基因,为研究家蚕的变态发育机制提供线索。【方法】用家蚕胚胎反转期的总RNA反转录合成的c DNA模板,克隆Bmhairy编码区(coding DNA sequence,CDS)和3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)并进行序列分析。基于荧光定量PCR和芯片数据比较bmo-mi R-7和Bmhairy的表达模式。利用RNAhybrid和Mi RTif,预测和分析Bmhairy的m RNA 3′UTR上bmo-mi R-7的靶位点。构建荧光素酶报告基因载体,用家蚕胚胎细胞系(Bm E)进行共转染试验,验证bmo-mi R-7对Bmhairy的3′UTR结合位点。【结果】在家蚕中克隆了Bmhairy,含2个内含子和3个外显子,CDS长654 bp,编码217个氨基酸。Bmhairy的m RNA 3′UTR长366nt。Bmhairy高度保守,含有b HLH、ORANGE和WRPW结构域。Bmhairy与鳞翅目(Lepidoptera)蛱蝶科(Nymphalidae)中的黑脉金斑蝶(Danaus plexippus)相似度最高。Bmo-mi R-7在家蚕胚胎期高量表达,在5龄第3天的精巢中相对较高,而Bmhairy在成虫期的表达量最高,在5龄第3天的头部相对较高。Bmhairy m RNA 3′UTR上有bmo-mi R-7一个靶位点。共转染试验表明,bmo-mi R-7下调Bmhairy。【结论】Bmhairy的家蚕时期表达和5龄第3天组织表达均与bmo-mi R-7的表达呈相反的模式。靶基因预测和双荧光素酶转染试验表明Bmhairy是bmo-mi R-7的靶基因,为进一步研究bmo-mi R-7和Bmhairy在家蚕体内的生物学功能及调控关系提供了依据。
- 刘仕平吴小燕张丹宇黄亚玺王伟赵萍夏庆友
- 关键词：家蚕微小RNA靶基因
