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己酮可可碱对体外内毒素诱导大鼠心肌细胞生成TNF-α的影响被引量：4: 2005年; 目的观察己酮可可碱(PTX)对体外内毒素(LPS)诱导新生大鼠心肌细胞生成肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨PTX对大鼠心肌细胞的保护机制。方法将培养的新生大鼠心肌细胞分为A、B、C、D组,A组(对照组)加入生理盐水,B组加入1μg/m l PTX,C组加入10μg/m l PTX,D组加入100μg/m l PTX。作用6h后均予LPS 1μg/m l处理。采用RT-PCR及EL ISA法观察各组心肌细胞TNF-α水平及TNF-αmRNA表达情况。结果B、C、D组TNF-α生成及TNF-αmRNA表达均低于A组,且与PTX浓度呈正相关。结论PTX能抑制LPS诱导的心肌细胞产生TNF-α;本研究为PTX治疗心力衰竭提供了实验依据。; 罗萍卢永昕李爱华刘向阳; 关键词：己酮可可碱心力衰竭肿瘤坏死因子-Α

人生长激素慢病毒载体的构建及其在鼠骨骼肌成肌细胞中的表达被引量：1: 2006年; 构建能表达人生长激素(hGH)的pLentivirus6/V5-hGH载体,并实现hGH基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达。体外培养SD鼠骨骼肌成肌细胞,并通过免疫组织化学方法鉴定所得细胞、用台酚兰染色确定培养细胞的活性并绘制生长曲线。将目的基因hGH亚克隆到真核细胞表达载体pLenti6/V5-D-TOPO载体上,构建重组质粒pLentivirus6/V5-hGH。将pLenti6/V5-hGH及阳性对照质粒pLenti6/V5-EGFP分别用Lipofectamin2000介导转染体外培养的SD乳鼠骨骼肌成肌细胞。在激光共聚焦扫描显微镜下计数,确定阳性对照质粒的转染数,从而估计该基因的转染效率。加入筛选试剂以获得稳定表达异源生长激素(GH)的成肌细胞。收集转染及筛选后的细胞培养基,用放射免疫分析法(RIA)检测重组人生长激素(rhGH)的表达水平。聚合酶链式反应法(PCR)及DNA测序显示hGH基因成功地插入到pLenti6/V5-D-TOPO载体中;阳性对照质粒转染细胞24h后,在激光共聚焦显微镜下观察,其转染效率达40%以上。检测收集的上清,与对照组相比,有极显著差异(P<0.01),观察至第8周,rhGH仍持续稳定表达。通过检测培养的chang-liver肝细胞上清中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的水平,验证了rhGH的生物学活性。实验通过培养高纯度的成肌细胞,构建了能在真核细胞内表达hGH的重组质粒pLenti6/V5-hGH,实现了hGH基因在骨骼肌成肌细胞中大量、长期和稳定的表达,并且获得的rhGH具有较强的促进肝细胞分泌IGF-1的能力。; 刘向阳卢永昕徐玉兰李小青刘隽李爱华罗萍万建平; 关键词：生长激素慢病毒载体成肌细胞

Th1型细胞因子干扰素γ及Th2型细胞因子白细胞介素10水平在慢性心力衰竭患者接受己酮可可碱干预过程中的变化:随机对照被引量：3: 2007年; 目的:观察己酮可可碱治疗心力衰竭患者后Th1型细胞因子干扰素γ及Th2型细胞因子白细胞介素10水平的变化,评价己酮可可碱对慢性心力衰竭患者免疫异常调节作用。方法:选择2005-09/2006-04华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科收治的心力衰竭患者38例。①实验分组:随机分为常规治疗组20例,常规治疗包括利尿剂,洋地黄类药物,血管紧张素转换酶抑制剂,β-受体阻滞剂等。己酮可可碱治疗组18例,在常规治疗的基础上加用己酮可可碱400mg,3次/d,饭时口服。两组治疗时间为1周,且均禁用免疫抑制剂。另选取10例健康体检者作为健康对照组。②实验评估:采用流式细胞分析法对各组患者进行CD4+Th1型细胞因子干扰素γ和Th2型细胞因子白细胞介素10水平进行检测,从而测出相应Th1,Th2细胞的百分比。结果:参与常规治疗组实验患者均进入结果分析,参与己酮可可碱治疗组患者18例,脱落3例,余15例患者均进入结果分析。①慢性心力衰竭患者CD4+干扰素γ表达水平和Th1/Th2值高于健康对照组(P<0.05),CD4+白细胞介素10表达水平低于健康对照组(P<0.05)。②己酮可可碱治疗组治疗1周后,CD4+干扰素γ水平和Th1/Th2值低于常规治疗组(P<0.05)。CD4+白细胞介素10水平无显著性变化。结论:心力衰竭患者存在Th1/Th2失衡,己酮可可碱调节了慢性心力衰竭患者Th1/Th2的失衡,该效应可能是己酮可可碱改善慢性心力衰竭患者症状作用机制之一。; 万建平卢永昕徐玉兰刘向阳; 关键词：己酮可可碱 TH细胞

己酮可可碱对NF-κB介导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：6: 2006年; 为探讨己酮可可碱（PTX）对NF-κB介导的心肌细胞的影响，将大鼠心肌细胞体外培养后分为对照组、实验1组、实验2组和实验3组，分别予生理盐水及浓度为100、300、500g／ml的PTX处理。采用流式细胞技术观察细胞凋亡率；采用逆转录聚合酶链式（RT-PCR）测定各组NF-κB mRNA的含量。结果对照组、实验1-3组心肌细胞凋亡率分别为25．82％±1．98％、20．78％±1．29％、15．73％±1．29％、10．03％±2．13％，两两比较P均〈0．011；NF-κB mRNA分别为0．9701±0．0295、0．8342±0．0089、0.7449±0．0373、0．5923±0．0290，两两比较P均〈0．01。PTX可降低心肌细胞凋亡率，其机制可能是抑制NF-κB的活性；本研究为PTX治疗心力衰竭提供了理论基础及实验依据。; 李爱华卢永昕罗萍刘向阳; 关键词：己酮可可碱肿瘤坏死因子-Α 心衰细胞凋亡

己酮可可碱对充血性心力衰竭患者CD_4^+ Th细胞免疫调节的研究被引量：4: 2007年; 目的探讨己酮可可碱(PTX)对慢性充血性心力衰竭(心衰)患者外周血辅助性T淋巴细胞(Th)免疫调节的影响及其机制。方法采用流式细胞分析法,检测50例心衰患者和正常对照者(10名)外周血的CD4+Th1和Th2细胞,及其分泌的细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)和白介素10(IL-10)在PTX干预下的变化。结果心衰对照组与正常对照组比较,分泌IFN-γ的Th1型细胞所占百分比明显增高而分泌IL-10的Th2型细胞所占百分比明显降低;PTX干预组与心衰对照组比较,分泌IFN-γ的Th1型细胞所占百分比明显降低而分泌IL-10的Th2型细胞所占百分比升高。结论心衰患者存在CD4+Th细胞亚群平衡偏移,而PTX可以逆转充血性心衰患者Th1/Th2细胞的失衡,起到免疫调节的作用,从而有可能使心衰患者从中获益。; 徐玉兰卢永昕万建平刘向阳荣书玲米少华高焱章; 关键词：己酮可可碱充血性心力衰竭免疫调节

慢病毒载体表达人B型利钠肽的方法学探索: 2005年; 目的探索构建能表达人B型利钠肽(hBNP)的pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP载体的方法,以实现人B型利钠肽基因在骨骼肌成肌细胞中长久、稳定的表达。方法将目的基因人B型利钠肽(hBNP)亚克隆到真核细胞表达载体pLenti6/V5-D-TOPO载体上,构建重组质粒pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP。将pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP及阳性对照质粒pLenti6/V5-D-TOPO-GFP分别用lipo-fectamin2000介导转染293FF细胞,获得病毒颗粒;用病毒颗粒转染体外培养的SD乳鼠骨骼肌成肌细胞。荧光显微镜下计数确定阳性对照质粒的瞬时转染数,从而估计该基因的瞬时转染效率。加入筛选试剂以获得稳定表达异源B型利钠肽(BNP)的成肌细胞。收集瞬时转染及筛选后的细胞培养基,用酶连结免疫吸附分析(ELISA)检测试剂盒检测人B型利钠肽(hBNP)的表达水平。结果聚合酶链式反应法及DNA测序显示人B型利钠肽基因成功地插入到pLenti6/V5-D-TOPO载体中;阳性对照质粒转染细胞12h后,在荧光显微镜下观察,其转染效率达60%以上。检测收集的上清,结果与阴性对照有显著差别(P<0.01),观察至第4周,人B型利钠肽(hBNP)仍持续稳定表达。结论本实验成功构建了能在真核细胞内表达人B型钠尿肽的重组质粒pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP,并且取得了较高的转染效率,因此慢病毒载体介导的基因治疗在心血管疾病中有乐观的应用前景。; 刘向阳卢永昕李小青刘隽李爱华罗萍朱纪法李锋; 关键词：慢病毒载体 B型利钠肽成肌细胞基因表达

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刘向阳

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