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刘靖华

作品数：60 被引量：217H指数：7
供职机构：南方医科大学基础医学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 57篇期刊文章
  • 2篇专利

领域

  • 31篇生物学
  • 30篇医药卫生
  • 2篇农业科学
  • 1篇化学工程
  • 1篇文化科学

主题

  • 30篇蛋白
  • 29篇细胞
  • 9篇基因
  • 8篇荧光
  • 6篇内皮
  • 6篇内皮细胞
  • 5篇信号
  • 5篇荧光蛋白
  • 5篇噬菌体
  • 5篇噬菌体展示
  • 5篇脓毒
  • 5篇迁移
  • 5篇迁移率
  • 4篇蛋白质
  • 4篇融合蛋白
  • 4篇脓毒症
  • 4篇转导
  • 4篇细胞因子
  • 4篇绿色荧光
  • 4篇绿色荧光蛋白

机构

  • 59篇南方医科大学
  • 3篇东北林业大学
  • 2篇广州医学院第...
  • 2篇贵阳医学院
  • 2篇南方医科大学...
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  • 1篇贵州医科大学

作者

  • 59篇刘靖华
  • 50篇姜勇
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  • 18篇李志杰
  • 11篇唐靖
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  • 5篇李红梅
  • 5篇刘承武
  • 5篇钟田雨
  • 5篇黄穗
  • 4篇刘瑜
  • 4篇李雪

传媒

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年份

  • 1篇2021
  • 1篇2019
  • 1篇2018
  • 3篇2017
  • 3篇2016
  • 2篇2015
  • 2篇2014
  • 2篇2013
  • 1篇2012
  • 10篇2009
  • 9篇2008
  • 7篇2007
  • 10篇2006
  • 5篇2005
  • 2篇2004
共 60 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
基于甲基化反应系统检测SETD3甲基化组蛋白的位点
2017年
[目的]构建pEGX-4T-1-Setd3,表达并纯化GST-SETD3蛋白;用获得的蛋白进行体外甲基化反应并鉴定其活性,建立体外甲基化反应系统。[方法]PCR扩增小鼠全长Setd3,插入到pEGX-4T-1载体获得pEGX-4T-1-Setd3质粒。将质粒转化大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-SETD3蛋白并进行纯化。将获得的GST-SETD3蛋白定量后进行体外组蛋白甲基化反应,用Western Blot检测GST-SETD3对组蛋白H3K4及H3K36的甲基化情况。[结果]p GEX-4T-1-Setd3质粒构建正确,纯化的GST-SETD3蛋白纯度较高;甲基化反应结果表明,用不同来源的组蛋白、反应时间、反应缓冲液及检测方法均检测不到GST-SETD3二甲基化H3K4;GSTSETD3可以二甲基化H3K36。[结论]成功表达和纯化GST-SETD3蛋白;该蛋白可以使H3K36发生二甲基化,但不能使H3K4二甲基化。成功构建体外甲基化反应系统。
钟玙沄黄梦怡孙江黄穗李月罗海华姜勇刘靖华
关键词：蛋白纯化甲基化反应甲基转移酶
人BNIP3基因在Hela细胞中的表达及定位被引量：1
2009年
目的:构建BNIP3-HA融合蛋白的真核表达载体,观察BNIP3在Hela细胞中表达及其定位。方法:采用两步克隆法将HA和BNIP3的编码序列以融合表达的形式克隆到载体pcDNA3上,随后转染Hela细胞。BNIP3经AlexaFluor 488免疫荧光标记,线粒体用MitoFluor Red 589染色后在荧光显微镜下观察BNIP3的表达和定位。结果:重组质粒经酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序鉴定构建正确,并在Hela细胞中能够表达,在荧光显微镜下观察,BNIP3-HA融合蛋白分布于线粒体。结论:成功构建BNIP3-HA融合蛋白表达载体并在Hela细胞线粒体中表达。
陈登宇刘芸钟田雨王蔚赵明哲刘靖华姜勇
关键词：基因BCL-2HELA细胞线粒体荧光免疫测定细胞内定位
白蛋白融合蛋白表达载体的构建及其在细胞中的表达和定位被引量：1
2009年
目的:构建白蛋白-血凝素(Alb-HA)融合蛋白的真核表达载体,观察Alb在NIH3T3细胞中表达和定位。方法:采用两步克隆法将HA和Alb的编码序列以融合表达的形式克隆到载体pcDNA3上,随后转染NIH3T3细胞在荧光显微镜下观察Alb的表达和分布。结果:重组质粒经酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序鉴定证明构建正确,并在NIH3T3细胞中大量表达,免疫荧光标记后在荧光显微镜下观察,Alb-HA融合蛋白分布于细胞质内。结论:成功构建Alb-HA融合蛋白表达载体并表达于NIH3T3细胞中,为下一步深入研究Alb的细胞内功能奠定了基础。
刘承武陈登宇胡水旺刘靖华姜勇
关键词：白蛋白NIH3T3细胞细胞内定位
组蛋白修饰对炎症反应的调控被引量：1
2014年
表观遗传学（epigenetics）是指在基因的DNA序列不发生改变的情况下,基因的表达水平与功能发生改变,并产生可遗传表型的遗传现象。表观遗传学的研究内容主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和非编码RNA调控等。
梁燊黄穗刘靖华
关键词：组蛋白修饰炎症反应表观遗传学非编码RNADNA序列染色质重塑
高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应被引量：11
2006年
目的 观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法 用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种细胞因子／趋化因子的水平变化；检测不同浓度HMGB1（0～75ng／ml）刺激后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1（15ng／ml）与LPS（10ng／ml）共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果 HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、干扰素γ（IFN-γ）、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平明显升高（均P〈0．01），分别是对照（未加刺激）的5．7、4．2、27．8、12．8和5．4倍；HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌，在刺激后3～6h，IL-6水平开始增加，在6h时IL-6由对照的32ps／ml±21pg／ml增加到75pg／ml±22pg／ml（P〈0．01），12h（453pg／ml±78pg／ml）～24h（901pg／ml±184pg／ml）持续升高（P〈0．01）；随着HMGB1浓度的增加，IL-6的水平也明显增加，当HMGB1浓度为3、15、75ng／ml时，IL-6分别是155ps／ml±33pg／ml、901pg／ml±184pg／ml、1508pg／ml±378pg／ml，与基础值32pg／ml±21pg／ml相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。分别用LPS（10ng／ml）和HMGB1（15ng／ml）单独刺激HUVEC时，IL-6的含量从基础的32pg／ml±22pg／ml分别增加至289pg／ml±42pg／ml和901pg／ml±184pg／ml（均P〈0．0l）；如果用二者共同刺激HUVEC，IL-6的生成量大大增加（2361pg／ml±299pg／ml），二者存在协同作用（F=69．405，P〈0．01）。结论 HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子；HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系，并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6，在脓毒症的发生和发展中起重要作用。
刘靖华李志杰唐靖刘亚伟赵雷邓鹏姜勇
关键词：脓毒症细胞因子
C反应蛋白真核表达载体的构建与表达被引量：3
2008年
目的构建人C反应蛋白(CRP)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法利用带HA反向互补序列碱基的特异性引物,从p91023/CRP载体上将编码人CRP的基因序列亚克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH3T3细胞;并使用Westernblot和细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA-CRP在NIH3T3细胞中的表达及其蛋白定位进行分析。结果PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-CRP真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞膜和核周边内质网的区域。结论成功构建了带HA标签的人CRP真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究CRP的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
陈腾祥李红梅胡水旺刘靖华姜勇
关键词：C反应蛋白基因表达蛋白定位
Rab蛋白在吞噬体成熟中的作用被引量：2
2017年
吞噬体成熟是指吞噬细胞吞噬病原体形成的吞噬体与溶酶体融合的过程.吞噬体与溶酶体融合后形成吞噬溶酶体,病原菌被溶酶体内的各种水解酶如氧化酶、酸化酶、水解酶等降解杀灭,因此吞噬体成熟是吞噬细胞消灭病原体的关键环节.大量研究发现,Rab GTPases通过介导吞噬体与溶酶体融合及促进吞噬溶酶体酸化在吞噬体的成熟过程中发挥了非常重要的作用.Rab分子异常会影响吞噬体成熟并进而影响细菌的杀灭,导致感染相关疾病的发生.
赵舒祺刘靖华
关键词：RABGTPASES细菌清除
NF-κB信号通路对BLP耐受巨噬细胞iNOS表达的影响被引量：3
2014年
目的通过检测细菌脂蛋白(BLP)耐受巨噬细胞感染细菌时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达情况及其表达是否受NF-κB信号通路调控,探讨BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的机制。方法比较BLP耐受和非耐受(Naive)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMM)对大肠杆菌的吞噬及杀灭情况,评价BLP耐受巨噬细胞的细菌清除能力;用定量PCR技术检测BLP耐受的BMM内iNOS mRNA表达情况和细胞免疫荧光技术观察p65从胞质向胞核的移位情况;最后观察抑制NF-κB通路活化对iNOS mRNA表达的影响。结果 BLP耐受巨噬细胞吞噬细菌和杀灭细菌的能力较Naive细胞显著增强(P<0.05);iNOS mRNA表达水平较Naive细胞显著(P<0.05);如果抑制BLP耐受巨噬细胞NF-κB通路活化对iNOS mRNA表达有显著影响(P<0.05)。结论本研究结果提示细菌脂蛋白耐受通过NF-κB通路活化增强细菌感染巨噬细胞iNOS表达。
李雪王义乾罗海华钟玙沄雷烨铭雷山蔡军伟姜勇刘靖华
关键词：INOS
两种细胞系中内源性C-反应蛋白的表达和定位分析
2008年
目的观察在不同刺激条件下,不同组织来源细胞系中内源性C-反应蛋白(CRP)的表达及定位情况。方法培养人单核细胞系THP-1和人肝细胞系LO2,用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞;使用内毒素(LPS)对两种细胞进行刺激,同时收集LPS刺激后的THP-1细胞的培养液上清加入到LO2细胞的培养液中进行孵育,运用Western blot和免疫细胞化学技术检测上述刺激条件下CRP在两种细胞中的表达及其定位情况。结果Western blot检测表明,在未受到刺激时,两种细胞的裂解物中均检测到一定量的CRP,在细胞培养液上清中没有检测到;受到LPS刺激后,THP-1细胞内的CRP表达增加,且在培养液上清中也检测到少量的CRP,但对于LO2细胞,刺激前后CRP的表达和分泌没有明显变化;当用LPS刺激后的THP-1细胞的培养液上清处理LO2细胞后,在LO2的细胞裂解物和培养液上清中均检测到CRP。免疫细胞化学检测结果显示,整个THP-1细胞中均可检测到标记的CRP的荧光信号,其中以核内的最明显,LPS刺激可以增加该蛋白的表达,使其核定位更加明显;在LO2细胞中,CRP定位于核外,LPS刺激对其表达和定位没有明显影响,而给予LPS刺激的THP-1细胞培养液上清处理后,LO2细胞中标记CRP的荧光信号增强,尤其以细胞膜上的增强明显。结论LPS不能直接上调肝细胞LO2内的CRP表达,却可以诱导THP-1表达分泌某些细胞因子来增加CRP的合成分泌;CRP在肝细胞系LO2和单核-巨噬细胞系THP-1中的定位有明显不同,在LO2中主要表现为分泌型蛋白的定位特征,而在THP-1细胞中却有明显的核定位表现。
陈腾祥李红梅胡水旺杨婷刘亚伟刘靖华姜勇
关键词：C-反应蛋白蛋白定位单核细胞佛波酯
细胞酶联免疫吸附试验在检测噬菌体阳性克隆中的应用和改进被引量：4
2008年
目的:通过对影响细胞ELISA的关键条件和步骤进行优化和改进,以降低实验假阳性率,提高敏感性。方法:THP-1细胞接种96孔培养板,分别用脂多糖(LPS)刺激或不刺激作为处理组和对照组,将通过噬菌体展示技术筛选获得的噬菌体分别与处理组及对照组细胞作用,洗脱未结合的噬菌体,加入HRP标记的抗M13单克隆抗体,分别用酶标仪和Kodak IS 2000R数码成像系统检测细胞与短肽的结合情况。并针对细胞的特性,在细胞的准备、固定、孵育和洗涤等关键步骤进行改进。结果:酶标仪和数码成像系统检测分别得到6个和8个可与细胞高亲和力结合的阳性噬菌体克隆,经过免疫荧光实验证实数码成像系统检测得到的8个阳性克隆均与细胞结合,并且数码成像系统多次测量值具有很好的重复性。结论:本方法为蛋白质与完整细胞的亲和活性研究提供了有效的实验方案,具有较好的应用前景。
丁宁刘承武李志杰刘靖华邓鹏姜勇
关键词：细胞酶联免疫吸附测定噬菌体展示
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