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灰树花提取物的体内抗肿瘤及免疫活性研究被引量：4: 2019年; 【目的】研究灰树花不同极性溶剂提取物在小鼠体内的抗肿瘤和机体免疫活性。【方法】按极性从低到高依次采用石油醚、乙酸乙酯、丙酮和甲醇加热回流提取灰树花子实体,获得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、丙酮提取物和甲醇提取物。70只SPF级昆明小鼠(雌雄各半)分为7组,每组10只,分别标记为空白组、模型组、CTX阳性组及灰树花子实体石油醚、乙酸乙酯、丙酮及甲醇提取物组,小鼠接瘤后第2天开始给药,空白组不给药及生理盐水,模型组给予生理盐水,CTX阳性组隔天腹腔注射CTX 20mg/kg,石油醚、乙酸乙酯、丙酮和甲醇提取物组每天灌胃相应的灰树花子实体提取物,抑瘤10d。通过检测肿瘤抑制率,脏器指数,血清中影响因子干扰素-γ(INF-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平等指标及肿瘤切片观察,研究灰树花子实体不同极性溶剂提取物对Hep-A-22荷瘤小鼠体内抗肿瘤、免疫活性及抗氧化作用。同时,通过小鼠耳肿胀试验和腹腔巨噬细胞吞噬试验进一步探究灰树花子实体提取物的免疫活性作用。【结果】各给药组均具有抑制肿瘤生长作用,其中灰树花子实体甲醇提取物组抑瘤效果最佳(52.31%),与模型组相比有极显著性差异(P<0.01),该组血清中IL-2、INF-γ和SOD含量极显著增加(P<0.01),CAT含量显著增加(P<0.05),并与抑制肿瘤具有相关性。通过HE染色和荧光染色后的肿瘤细胞观察,发现肿瘤细胞出现大面积坏死、消融等现象;各给药组对小鼠二甲苯耳肿胀均有抑制效果,其中甲醇组和乙酸乙酯组效果较好,与空白组差异性极显著(P<0.01)。【结论】灰树花甲醇提取物和乙酸乙酯提取物具有良好的抑制肿瘤生长效果。甲醇提取物组能够显著提高小鼠腹腔巨噬细胞活性,从而提高机体免疫活性,并与其抗肿瘤作用; 刘佳刘佳包海鹰图力古尔李欣李欣; 关键词：灰树花抗肿瘤免疫活性

人hCGβ真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立被引量：2: 2010年; 目的：构建人hCGβ真核表达载体，稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，建立稳定表达人hCGβ的小鼠黑色素瘤细胞系。方法：采用PCR方法扩增出人hCGβ全长基因的cDNA编码区序列，利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES—neo中，并加入酶切位点和6×His标签，得到重组表达质粒pIRES—neo—hCGβ-（His）6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞，经G418加压筛选出阳性克隆。RT—PCR、Western blot及免疫荧光检测人hCGβ在B16细胞中的表达。结果：经限制性内切酶鉴定及序列分析，pIRES—neo—hCGβ一（His）6重组体构建正确，最终建立的表达人hCGβ基因的B16细胞系阳性率高于90％。结论：成功构建了真核表达载体plRES—neo—hCGβ-（His）6，建立的稳定转染人hCGβ小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达hCGβ基因。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究人hCGβ抗肿瘤基因疫苗的功能提供了良好的实验基础，为hCGβ在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。; 张亮王宇江乐阎瑾琦王越胡明明于继云; 关键词：HCGΒ 稳定转染小鼠黑色素瘤细胞肿瘤免疫治疗

羧甲基纤维素接枝聚丙烯酸在制备止血剂上的应用及止血材料: 本发明公开了羧甲基纤维素接枝聚丙烯酸作为止血剂的应用，它包括创伤、战伤以及手术伤大、中、小动静脉血管出血的止血，特别是作为动脉血管出血的止血。本发明同时公开了含有羧甲基纤维素接枝聚丙烯酸成分的止血材料，可以为止血粉剂、止...; 窦桂芳孟志云孙文种朱晓霞刘慧玲张亮; 文献传递

HPLC法测定比格犬血浆中西格列羧的血药浓度被引量：1: 2006年; 目的:建立比格犬血浆中西格列羧的定量分析方法,为药物代谢动力学研究提供技术手段。方法:采用高效液相色谱方法,Agilent XDB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,柱温25℃,水(含5%的乙酸)-乙腈(23:77)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),紫外检测波长260 nm,血浆样品经乙腈和乙酸乙酯萃取,以内标法峰面积定量。结果:线性范围为50～2000μg·L^(-1),定量下限为50μg·L^(-1),日内和日间 RSD 在3.8%～11.3%之间,准确度在-0.5%～3.5%之间,本方法涉及的实验条件下样品是稳定的。结论:该方法专属性强,灵敏度高,精密度和准确度好,能够满足药代动力学研究的需要。; 孟志云朱晓霞孟湘明张亮孙文种窦桂芳; 关键词：HPLC 血药浓度

重组肿瘤相关抗原蛋白与肿瘤治疗性DNA疫苗静电耦合成为复合纳米颗粒的初步研究被引量：2: 2008年; 目的:验证原核表达的重组肿瘤相关抗原蛋白SUR-IM与肿瘤治疗性DNA疫苗pVAX1-2PFcGB能够通过静电耦合形成复合纳米颗粒。方法:通过蛋白-DNA琼脂糖凝胶电泳阻滞实验、DNaseⅠ消化核酸的保护实验及原子力显微镜观察验证二者是否结合;此外,通过体外瞬时转染293T细胞研究蛋白质所结合的质粒是否能够在体外顺利表达。结果:证实二者确实能够通过静电耦合形成纳米级的颗粒,结合后蛋白质对DNA具有一定的保护作用,并且蛋白不会影响与之结合的质粒在细胞中的高效表达。结论:该复合纳米颗粒将蛋白质和核酸组分有机结合在一起,使肿瘤抗原、免疫佐剂及DNA肿瘤疫苗协同发挥作用,为日后进行抗肿瘤功能研究奠定了重要基础。; 王浩阎瑾琦张飒贾锐张亮刘宁王宇宋晓国于继云; 关键词：重组蛋白

肿瘤基因疫苗免疫增效载体pVAX1-IRES-GM/B7的构建与表达被引量：7: 2008年; 目的:构建上游可以表达肿瘤抗原复合物,下游表达人GM-CSF和B7.1免疫协同增效分子的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7。方法:通过搭桥PCR获得人GM-CSF和B7.1融合基因,插入已构建好的DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293T细胞,通过流式细胞术和间接免疫荧光检测融合基因的表达。此外,还在载体上游插入肿瘤抗原复合物,进一步验证该载体对肿瘤抗原的表达情况。结果:酶切鉴定和序列分析表明,GM/B7融合基因与设计完全一致,在体外细胞检测中获得表达,而且上游的抗原基因也可以顺利表达。结论:该载体的构建成功可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体。; 刘宁阎瑾琦冉多良贾锐张亮王浩于继云; 关键词：B7.1 IRES 癌症疫苗

双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES的构建与鉴定被引量：6: 2008年; 目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内部核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效。方法:通过PCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达。结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分别表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功。结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备。; 阎瑾琦刘国栋刘荷中贾锐王浩刘宁张亮于继云; 关键词：内部核糖体进入位点真核表达

肾癌相关抗原G250-MN/CAⅨ在肾癌疫苗和免疫治疗研究中的应用被引量：2: 2007年; 肿瘤疫苗主要是通过肿瘤相关抗原,尤其是肿瘤特异性抗原,激活免疫系统产生针对肿瘤的特异性免疫反应来达到治疗目的。G250在肾细胞癌中的特异性表达使它成为肾癌疫苗潜在的靶抗原和肾癌免疫治疗的重要靶分子。本文主要针对以G250-MN/CAⅨ为特异性靶点的肾癌疫苗和免疫治疗研究进展作一综述。; 张亮田仁礼阎瑾琦于继云; 关键词：癌症疫苗靶抗原

Simultaneous Determination of Ceftazidime and Tazobactam in Injectable Powder by Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography被引量：2: 2004年; A reversed-phase high performance liquid chromatographic (RP-HPLC) method wasdeveloped and validated for the simultaneous deteimination of ceftazidime and tazobactam ininject-able powder. Methods Chromatography was carried out on Zorbax 300SB-C_(18) column using amixture of methanol and aqueous solution of phosphate buffer (pH = 5.6) as mobile phase. The UVdetection wavelength was 220 run. Results The linear ranges of ceftazidime and tazobactam were 0.62- 631.8 μg·mL^(-1) and 0.66 - 677.50 μg·mL^(-1), respectively. The average recoveries were 98.8%- 101.4% for ceftazidime, and 99,1% - 100.2% for tazobactam. The RSD values of inter-day andintra-day assays were lower than 1.5% for ceftazidime and 2.6% for tazobactam. Conclusion Thismethod is reproducible, simple, precise, and rapid for the quality control of ceftazidime andtazobactam in injectable powder.; 孟湘明孟志云张亮窦桂芳; 关键词：CEFTAZIDIME TAZOBACTAM

小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及抗原活性检测被引量：3: 2012年; 目的 RT-PCR扩增小鼠前列腺干细胞抗原(mPSCA)基因,构建原核表达质粒pET-42a-mPSCA,诱导mPSCA蛋白表达并纯化,并检测mPSCA蛋白的抗原活性。方法利用RT-PCR的方法从小鼠前列腺癌细胞系RM-1细胞中扩增mPSCA基因,测序正确后PCR的方法去掉mPSCA的信号肽序列将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-mPSCA。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,随后将表达的融合蛋白进行纯化。经SDS-PAGE分析后,Western blot检测纯化的蛋白,将纯化蛋白进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价。结果测序结果证实成功扩增出全长mPSCA基因;酶切和测序结果证实pET-42a-mPSCA原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blot检测证实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应;ELISA检测显示纯化后的mPSCA抗原具有免疫原性。结论成功扩增出小鼠全长PSCA基因,成功构建了mPSCA基因的原核表达载体,获得了纯化的mPSCA蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究以PSCA为靶点的前列腺癌的免疫治疗奠定了基础。; 董金凯罗津阎瑾琦张亮高江平于继云; 关键词：前列腺干细胞抗原原核表达蛋白纯化前列腺癌

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张亮

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