张凤
- 作品数：9 被引量：18H指数：2
- 供职机构：复旦大学上海医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省省长基金上海市科委国际合作基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 小鼠CD25分子胞外段的原核表达载体的构建及表达鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的构建小鼠CD25分子胞外段的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法从BALB/c小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT-PCR方法获得CD25分子胞外段序列;将其亚克隆入原核表达载体PET-32a,构建好PET-32a-CD25胞外段,并进行酶切及测序鉴定;将PET-32a-CD25胞外段转染大肠杆菌BL21进行表达,并对表达产物进行纯化和鉴定。结果RT-PCR扩增出708 bp的CD25胞外段的基因片段;pET32a-CD25胞外段/BL21经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,相对分子质量约为47×103,重组蛋白用镍树脂纯化后经Western blot检测显示具有良好的免疫反应性,并且可以在体外有效刺激自体T细胞疫苗免疫小鼠脾细胞的增殖并高分泌IL-4。结论CD25胞外段蛋白在原核细胞中成功表达,纯化后的蛋白保持良好的免疫反应性。
- 徐林张凤周涯罗军敏覃明
- 抗hCG新型基因疫苗在恒河猴诱导的免疫应答
- 人绒毛膜促性腺激素的链(hCG)在多种肿瘤组织中表达,其中,末端37肽具有被淋巴细胞TCR和BCR识别的肿瘤抗原表位。因此,可以此作为肿瘤相关抗原诱导抗肿瘤免疫应答。本研究以hCG C-末端37肽为肿瘤抗原靶基因,以pV...
- 张洪勇张凤乔滨郑秀娟熊思东
- 关键词：恒河猴免疫反应
- 文献传递
- 小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体的构建
- 2010年
- 目的构建小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达。方法从前期构建的原核表达载体PET-32a-CD25胞外段上酶切下CD25胞外段;将其亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,并进行酶切及测序鉴定;用Lipofectamine 2000将pcDNA3.1-CD25胞外段转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO)进行表达,并用ELISA法对表达产物进行测定。结果酶切、测序验证成功构建真核表达载体pcDNA3.1-CD25e,并在CHO细胞中有效表达CD25e蛋白。结论成功构建小鼠CD25胞外段的真核表达载体,可在CHO细胞中表达,并具有良好的免疫反应性,为后续实验提供了前期基础。
- 徐林张凤秦安东周涯姚新生罗军敏
- 关键词：真核表达T细胞疫苗
- 肝素抑制T细胞活化及机制研究被引量：2
- 2009年
- 目的:长期临床实践及动物实验研究发现肝素具有一定抗炎作用,本文旨在阐明其机制是否与抑制T细胞活化过程,以及影响T细胞与抗原递呈细胞间的免疫突触的形成有关。方法:本研究通过氚掺入法检测肝素对T细胞活化增殖的影响,包括丝裂原ConA,超抗原SEA作为刺激剂,此外还有特异性抗原肽;加入外源性IL-2检测肝素抑制T细胞活化与IL-2作用的关系。流式细胞术检测T细胞活化表面标志CD62L的变化;肝素干预下T细胞与抗原递呈细胞间的相互作用,以及T细胞肌动蛋白的聚集情况。结果:在肝素干预下,ConA活化T细胞增殖明显降低并体现出剂量依赖关系,另外SEA、混合淋巴细胞反应以及特异性抗原肽刺激T细胞的增殖也不同程度受到肝素的抑制,外源性IL-2不能挽救被抑制的T细胞。流式细胞检测结果提示肝素干预组T细胞上CD62L表达明显高于对照组。肝素不影响T细胞与抗原递呈细胞之间的作用,也不影响T细胞骨架重排,即免疫突触的形成。结论:肝素抑制T细胞活化及增殖,可能是其抗炎机制的一部分,但并非通过影响T细胞与抗原递呈细胞之间的作用或T细胞活化过程中骨架重排及突触形成。
- 张凤张瑞华徐薇储以微邵先安熊思东
- 关键词：肝素T细胞抗原递呈细胞肌动蛋白
- TLR在小鼠胸腺中的表达及其在胸腺细胞发育中的可能作用被引量：3
- 2008年
- 检测体外培养和体内发育过程中,胎鼠胸腺处于不同发育阶段时Toll样受体(TLR)的表达,阐明TLR表达量与胸腺细胞发育相关性,为TLR和胸腺细胞发育分化相关研究提供基础数据。无菌取15d胎龄胎鼠胸腺进行体外培养(FTOC),在培养不同时间点(2d,4d,6d),检测处于不同发育期胸腺TLR的表达;同时在孕期不同天数(15~19d),分别取胎鼠胸腺,检测在体内发育过程中胸腺TLR的表达;在FTOC中加入二脱氧鸟苷培养6d以制备胸腺基质细胞,检测基质细胞与胸腺细胞TLR表达情况。结果:小鼠胸腺中检测到多种TLR。FTOC培养中:培养第2天(F2)开始检测到各种TLR,到培养第6天(F6),TLR1,TLR3,TLR6,TLR7,TLR8明显上调,而TLR4,TLR5保持低水平,TLR4在培养第6天又下降;体内发育过程中:TLR6表达量随胎龄增加有较明显上调,TLR1,TLR3-8保持低水平表达;TLR2,TLR9体内体外都未检测到明显表达。在对胸腺细胞与基质细胞TLR表达比较中发现TLR1,TLR5,TLR6,TLR7高表达于胸腺细胞。胎鼠胸腺表达某些TLR,并且在发育不同阶段表达量有所改变,提示TLR可能参与胸...
- 张凤龚燕萍徐薇储以微熊思东
- 关键词：TLR表达谱胸腺
- 巨噬细胞的极化及其意义被引量：10
- 2007年
- 表型可变性和功能多样性是单个核吞噬细胞的重要特征。近年来巨噬细胞的极化受到关注。一般认为极化巨噬细胞是单核细胞活化后一系列功能状态两个极端。而它的分化受到各种微环境信号的诱导与调节。极化的巨噬细胞能够进一步影响局部免疫反应,与各种因子协同作用调节病原体微生物感染结局和肿瘤免疫,参与免疫调节,组织修复重塑过程。对巨噬细胞亚型诱导因素及功能的研究将有助于了解免疫反应的调节机制。
- 张凤熊思东
- 关键词：巨噬细胞极化
- 肝素抑制胸腺双阳性细胞的发育
- 2009年
- 为研究肝素对胸腺细胞发育的影响,以FTOC的方法进行体外器官培养,以不同浓度肝素干预其发育。观察发育不同时间点,胸腺细胞数和胸腺细胞表型的变化情况。结果显示:在4U/ml的肝素浓度下,胸腺细胞数比对照组显著减少,尤其是CD4+CD8+双阳性细胞数变化明显,且胸腺细胞数的减少与肝素用量具有明显剂量依赖关系;另外,在体外培养的第3天,肝素干预组中胸腺细胞37.98%表达CD69分子,显著高于对照组的0.76%。这些证据提示肝素能够影响双阳性胸腺细胞的发育。
- 邵先安张凤徐薇熊思东
- 关键词：肝素干预胸腺细胞发育
- ALD-DNA对巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用被引量：1
- 2005年
- 目的体外观察ConA活化淋巴细胞来源的DNA(ALDDNA)对BALB/c小鼠巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用。方法将ALDDNA及未活化淋巴细胞来源的DNA(UnALDDNA)分别与BALB/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞表面分子的表达,ELISA检测白细胞介素6(IL6)、白细胞介素12(IL12)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的分泌情况。结果ALDDNA在体外能够明显刺激细胞发生增殖,上调细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)II类分子以及共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达,并能够诱导细胞分泌IL6、IL12和TNFα。结论ALDDNA对RAW264.7细胞具有免疫刺激作用。
- 乔滨徐薇陈刚张凤杨秀利熊思东
- 关键词：巨噬细胞免疫刺激
- CD25分子胞外段基因免疫应答中B淋巴细胞的变化及意义被引量：1
- 2010年
- 目的用鼠CD25分子胞外段基因疫苗免疫Balb/c小鼠,观察其诱导的体液免疫应答中B淋巴细胞的变化并探讨其意义。方法用pcDNA3.1-CD25胞外段真核表达质粒分别在第0天、第10天和第20天肌肉注射免疫同系Balb/c小鼠,酶联免疫法(ELISA)检测抗CD25胞外段的抗体水平及亚型,FACS检测脾细胞中B淋巴细胞的比例变化及细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ的表达变化。结果与对照组相比,CD25胞外段基因免疫组小鼠血清抗CD25抗体在免疫后逐渐升高,第30天达最高峰;抗CD25抗体主要以IgG1为主;免疫小鼠脾细胞中B细胞的比例变化不显著(P>0.05),但高分泌IL-4和IL-10(P<0.05),而低分泌IFN-γ(P<0.05)。结论 CD25胞外段蛋白基因免疫中B细胞功能变化显著,这为后续深入研究体液免疫应答在T细胞疫苗中的作用提供了前期实验基础。
- 徐林张凤周涯罗军敏覃明姚新生
- 关键词：基因免疫B淋巴细胞T细胞疫苗
