张夕燕
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
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- 重组人乳头瘤病毒58型L1蛋白在Sf9细胞中的表达条件优化
- 2010年
- 目的 采用昆虫细胞-杆状病毒表达系统扩增人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）58型L1蛋白基因,确定L1蛋白表达的最佳条件.方法 取处于埘数生长期的S19细胞以不同的感染复数（MOI）值扩增病毒,用噬斑试验检测病毒滴度,确定扩增重组病毒的最适条件 用间接免疫荧光法判断目的蛋白表达情况 通过蛋白印迹法测定不同的表达时间和MOI值条件下目的蛋白表达量,确定目的蛋白的最佳表达条件.结果 处于对数生长期的细胞以MOI值为0.5表达48 h条件下扩增含HPV58 LI基因的重组杆状病毒,滴度最高,可达5×108pfu/ml 以MOI值为5.0表达72 h获得最佳的目的蛋白表达量.结论 确定了扩增病毒和表达相应目的蛋白的最佳条件.
- 于世荣孙丽媛刘君丁军颖李军张夕燕张振龙
- 关键词：人乳头瘤病毒基因表达重组蛋白质类
- 重组人睫状神经营养因子纯化工艺的建立被引量：2
- 2016年
- 目的建立适于生产应用的重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rh CNTF)纯化工艺,并对纯化产物进行鉴定。方法将CNTFnew CC22突变体工程菌BL21(DE3)菌体破碎上清经25%饱和度硫酸铵沉淀后,沉淀上清先后经Butyl HP疏水层析和Q HP阴离子交换层析进行纯化。通过非还原SDS-PAGE和反相高效液相色谱分析(RP-HPLC)检测样品纯度;质谱法测定rh CNTF的相对分子质量;Edman化学降解法测定rh CNTF的N-端氨基酸序列;TF-1细胞/CCK-8比色法和对饮食诱导性肥胖(diet-induced obesity,DDIO)大鼠的减肥作用分别测定rh CNTF的体外和体内生物学活性。结果纯化后rh CNTF的纯度可达99.6%,纯化回收率为34.5%;相对分子质量为21 153;N-端15个氨基酸序列为Ala-Phe-Thr-Glu-His-Ser-Pro-Leu-Thr-Pro-His-Arg-Arg-Asp-Leu;生物学比活性高于2×106 IU/mg,并能有效降低DIO大鼠体重。结论经3步纯化成功获得了高纯度的rh CNTF,为进一步对其性质、功能和生产应用研究奠定了基础。
- 刘君蔡觅郑秀玉张夕燕王健张振龙
- 关键词：纯化大肠埃希菌减肥
- 重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白在昆虫细胞sf9中的表达条件优化研究
- 2009年
- 目的确定利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白（HPV11 L1）的最适表达条件。方法通过间接免疫荧光法鉴定目的蛋白表达情况；用蛋白印迹法（Western blot）确定在不同感染复数（MOI）、不同表达时间条件下目的蛋白的最适表达条件。结果当sf9细胞密度为2．0×10^6／ml时，以MOI值为2．0的重组杆状病毒接种，悬浮表达96h收获为最适表达条件。结论确定了目的蛋白的最适表达条件，为进一步大量表达及纯化提供参考。
- 刘君张夕燕孙丽媛于世荣丁军颖许雪梅张振龙
- 关键词：荧光免疫测定L1蛋白昆虫细胞
- 重组人乳头瘤病毒16型L1蛋白在昆虫细胞中的表达及条件优化研究被引量：2
- 2009年
- 目的利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达人乳头瘤病毒16型（human papillomavirus16，HPV16）L1蛋白，并确定含编码HPV16L1蛋白基因杆状病毒的扩增及其相应目的蛋白表达的最佳条件。方法在不同感染复数（MOI）、不同时间条件下扩增病毒，以蚀斑试验检测病毒滴度，研究获得最高滴度病毒的最适条件；通过对相应蛋白进行表达条件的优化，以蛋白印迹法比较蛋白表达量，确定目的蛋白表达的最佳条件。结果确定了扩增含编码HPV16L1蛋白基因杆状病毒及表达相应蛋白的最佳条件，即在sf9细胞系中，以MOI值为0．10接种病毒，扩增48h后收获病毒；以细胞密度为（2—3）×10^6／ml，MOI值为10．0接种病毒，悬浮表达72h收获目的蛋白。蛋白印迹法检测结果证实，表达的目的条带可与HPV16L1蛋白的单克隆抗体发生反应。结论建立了在昆虫细胞中表达HPV16L1蛋白的最适条件，为下一步的纯化及免疫原性研究奠定了基础。
- 孙丽媛刘君张夕燕丁军颖张振龙许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒16L1蛋白昆虫细胞
- 重组人乳头瘤病毒16型L1 VLP的初步纯化、鉴定及免疫效果的初步研究
- 2010年
- 目的 对昆虫细胞-杆状病毒系统表达的人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）16型L1蛋白病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）进行初步纯化研究,并在小鼠中检测纯化VLP的免疫原性.方法 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化方法纯化HPV16 LI VLP.对纯化得到的VLP分别进行蛋白印迹法、十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及电镜鉴定.然后用VLP免疫6周龄BALB/c小鼠.将小鼠随机分成6组（3个剂量组、2个佐剂组和1个对照组）,间隔2周免疫3次,3次剂量相同.取血分离血清,采用间接ELISA法检测抗HPV16 L1 VLP抗体滴度.结果 经蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化后,用SDS-PAGE鉴定纯化的HPV16 LI VLP,纯度达到90%.电镜观察可见完整的VLP颗粒.间接EUSA检测结果显示,剂量组及佐剂组小鼠血清中均可检测到特异性抗HPV16 L1 VLP抗体,且抗体滴度随针次和剂量的增加而增高.结论 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化法得到的HPV16 L1 VLP可用于免疫学初步研究.通过昆虫细胞表达产生的HPV16 LI VLP 具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生强的体液免疫应答.
- 孙丽媛张婷于世荣陈祥鹏刘君李莉莉张夕燕张振龙许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒16L1蛋白病毒样颗粒
- 含编码人乳头瘤病毒18型L1蛋白基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的条件优化被引量：1
- 2009年
- 目的确定以昆虫细胞sf9F增含编码人乳头瘤病毒（human papillomavims，HPV）18型L1蛋白（HPV18L1）基因的杆状病毒以及相应蛋白表达的最佳条件。方法以对数生长期的sf9细胞在不同感染复数（M01）和不同时间条件下扩增病毒，以蚀斑试验检测病毒滴度，选择获得最高滴度病毒的最佳条件；再以sf9细胞在不同细胞密度、不同MOI值和不同时间条件下表达相应蛋白，以蛋白印迹法鉴定并比较不同条件下的蛋白表达量，选择获得最大量目的蛋白的最佳条件。结果对数生长期的sf9细胞在MOI值为0．50、扩增时间为48h时，所扩增的病毒滴度最高，可达3×10^8pfu／ml；在细胞密度为3×10^6／ml、MOI值为2．0、表达时间为72h时，所表达的蛋白量最大，约5mg/L。结论确定了含编码HPV18L1基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的最佳条件。
- 丁军颖张振龙孙丽媛刘君张夕燕于世荣许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒18L1基因杆状病毒昆虫细胞病毒样颗粒
