徐莹莹
- 作品数：3 被引量：11H指数：1
- 供职机构：宁波市第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人MAPK3基因克隆及其在肝细胞癌细胞中的作用被引量：11
- 2022年
- 目的克隆人MAPK3基因,探讨MAPK3基因对肝细胞癌细胞的作用。方法以肝细胞总RNA为模板,利用RT-PCR体外扩增获得人MAPK3基因的蛋白编码区,并构建重组真核表达载体pEYFP-MAPK3;脂质体转染和G418药物筛选获得MAPK3稳转肝癌细胞株;蛋白免疫印迹检测稳转肝癌细胞株中外源MAPK3蛋白的表达量;实时无标记细胞分析技术检测MAPK3基因对肝癌细胞增殖的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别MAPK3基因对肝癌细胞迁移和侵袭的影响;蛋白免疫印迹检测ERK信号通路靶基因及上皮-间质细胞转化标志物的表达变化。结果RT-PCR克隆获得人MAPK3基因,成功构建重组真核表达载体pEYFP-MAPK3并获得MAPK3基因稳转肝癌细胞株,发现MAPK3基因可以促进人肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,通过磷酸化活化Stat3,促进c-Myc、MMP-2和N-Cadherin表达升高和抑制E-Cadherin表达。结论成功克隆人MAPK3基因并证明MAPK3可以有效促进肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
- 倪佳徐莹莹邓婉玲宋苗苗石静孙达权
- 关键词：肝细胞癌细胞细胞增殖迁移
- 多用途止血袋
- 本实用新型公开了一种多用途止血袋，其包括设置有开口的囊袋，开口处设置有拉链，所述囊袋两侧分别固定连接有绑带。本实用新型将囊袋设计有拉链，可灵活更换囊袋内的冰袋或其他介质，也方便囊袋的清洗，保证使用卫生，并且在囊袋两侧设置...
- 王红幸史定妹林菡群葛见华宋一虹顾秋燕钱亚张飞飞郑繁程董雯雯孙全儿徐莹莹
- 文献传递
- CK18基因的原核表达及蛋白纯化?
- 2022年
- 目的采用原核表达和亲和层析的方法获得人细胞角蛋白18(CK18)。方法利用高保真聚合酶链式反应(PCR)法克隆人CK18基因的蛋白编码区,TA克隆入pMD18-T载体中;经筛选和鉴定后,将CK18基因编码区插入原核表达载体pGEX-4t-1中,构建重组质粒pGEX-CK18 GST;将重组质粒导入感受态细菌Rosetta(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导CK18融合蛋白(GST-CK18)表达,并用GST亲和层析分离纯化CK18蛋白;用体外磷酸化、免疫组化等方法验证CK18磷酸化位点及其对细胞的影响。结果成功克隆人CK18基因蛋白编码区,构建了原核表达质粒pGEX-CK18 GST,表达了GST-CK18并获得纯化蛋白,体外磷酸化、免组织化学方法均证实CK18的52位丝氨酸磷酸化可以导致细胞骨架重排和细胞形态变化。结论成功获得纯化的人CK18蛋白,为体外研究CK18和蛋白激酶之间的关系奠定了前期基础。
- 倪佳王伟徐莹莹陈相屹张欣孙达权
- 关键词：聚合酶链式反应原核表达蛋白纯化
