李由然
- 作品数：57 被引量：154H指数：6
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省科技厅基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程文化科学更多>>
- 生物工程专业虚拟仿真实验教学资源建设思路探讨被引量：1
- 2020年
- 在"互联网+"时代,各项技术的发展给生物工程专业实验教学的教学方法、课堂模式、学习支持、教学资源、教学评价等带来多方面的改变,各项虚拟仿真实验在现代技术的帮助下有了质的改善,无论是实验的仿真程度,还是教学资源的信息化水平,都有了很大的提升。基于当前技术不断发展的社会背景,对优化生物工程专业仿真实验教学的意义和方法进行探索。
- 李由然李江华
- 关键词：生物工程专业虚拟仿真实验教学资源发酵工程微生物工程生物工程下游技术
- 高效利用稻壳联产木糖、多孔炭和二氧化硅被引量：6
- 2015年
- 用稀酸水解半纤维素制得木糖母液,并通过正交实验得到最佳水解条件,即在130℃、稀酸质量分数2%、反应6 h的条件下,水解率可达到96.8%(以稻壳中的半纤维素为基准),去除杂质精制后木糖产率为62.8%.水解后的稻壳残渣用来制备稻壳基多孔炭和二氧化硅,其中多孔炭孔隙发达、孔径均一,可用来对木糖母液进行脱色处理,在脱色过程中对木糖的吸附损失小,达到精制木糖的目的.同时,在制备稻壳基多孔炭的过程中可同步制取高纯度二氧化硅.
- 李赢石刚张梁李由然石贵阳倪才华
- 关键词：稻壳木糖多孔炭二氧化硅
- 耐热细菌脱枝酶的纯化及酶学性质
- ＜正＞脱枝酶是淀粉加工过程中水解其1,6-糖苷键的水解酶,为淀粉彻底糖化所必需。本研究首次从高温菌Bacillus sp.CBB272的培养液中,经过盐析、凝胶过滤层析、弱阴离子交换层析以及强阴离子交换层析联用的方法,纯...
- 李由然Suren Singh石贵阳王正祥
- 文献传递
- 腺苷酸脱氨酶在乳酸克鲁维酵母中构建表达被引量：1
- 2016年
- 【目的】实现鼠灰链霉菌来源经密码子优化后的腺苷酸脱氨酶基因在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis GG799)中组成型表达。【方法】以鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)来源的腺苷酸脱氨酶(AMP)基因经密码子优化后作为模板,设计特异性引物,PCR扩增AMP脱氨酶基因opt-AMPD,以p KLAC1为载体构建重组表达质粒p KLAC1-opt-AMPD,经Sac II线性化后电转化法转入K.lactis GG799,筛选得到重组菌株,测定酶活,经His TrapTM HP纯化后得到AMP脱氨酶,并优化重组菌的发酵培养基。【结果】对AMP脱氨酶基因进行了密码子优化后,构建了重组K.lactis GG799/p KLAC1-opt-AMPD,实现组成型表达,密码子优化后AMP脱氨酶酶活提高到586±50 U/m L。SDS-PAGE结果显示,纯化后的AMP脱氨酶为单一条带,蛋白大小约为60 k D。优化的发酵培养基为(g/L):葡萄糖40、蛋白胨20、酵母粉15、Na Cl 8、KCl 10、Mg SO4 2,30°C、200 r/min发酵120 h,酶活达到2 100±60 U/m L。【结论】实现了密码子优化后的腺苷酸脱氨酶基因在乳酸克鲁维酵母GG799内的组成型表达,为实现腺苷酸脱氨酶的重组高效表达和发酵生产进行了有益探索。
- 许强张梁李由然李赢顾正华丁重阳石贵阳
- 关键词：乳酸克鲁维酵母腺苷酸脱氨酶发酵优化
- 细菌L-天冬氨酸α-脱羧酶的分子机制及分子改造研究进展被引量：5
- 2018年
- L-天冬氨酸α-脱羧酶能够催化L-天冬氨酸生成β-丙氨酸,是泛酸代谢中的关键酶之一,对生物体中的能量代谢和脂肪代谢至关重要。细菌L-天冬氨酸α-脱羧酶属于丙酮酰依赖型的一类酶,具有特别的翻译后加工机制和底物失活作用,本文对L-天冬氨酸α-脱羧酶的分子机制和分子改造进行了综述,并对其在β-丙氨酸合成方面的应用进行了展望。
- 莫芹李由然李由然
- 关键词：Β-丙氨酸
- D-甘露糖异构酶的酶学性质探究和热稳定性改造
- 2023年
- D-甘露糖异构酶可以催化D-果糖与D-甘露糖之间的相互转化,在D-甘露糖的生物酶法制备中具有应用前景,但是目前报道的D-甘露糖异构酶热稳定性较差,无法满足工业生产高温的需求。该研究将大肠杆菌(Escherichia coli)Dh5α来源的D-甘露糖异构酶异源表达后进行酶学性质研究,并对其进行热稳定性改造。研究结果显示D-甘露糖异构酶的最适反应温度为30℃,最适反应pH值为6.0~7.0,K_(m)、k_(cat)和k_(cat)/K_(m)分别为963.4 mmol/L、1.38 s^(-1)、1.4×10^(-3)L/(mmol·s)。通过理性改造该研究获得了一株热稳定性显著提高的突变体A241P/A116V/G253A/Q379P,其最适反应温度提高了15℃,在50℃条件下,半衰期为野生型的33倍,相对酶活力比野生型高60%。分子动力学模拟分析表明脯氨酸的引入和疏水作用的增强,提高了蛋白质的刚性,从而使热稳定性提高。该研究通过对主流来源的D-甘露糖异构酶进行酶学性质探究及热稳定性改造,为生物酶法高效制备D-甘露糖提供了理论依据,为D-甘露糖异构酶结构-稳定性的研究奠定基础。
- 沈玲赵丽婷沈昱陈磊李军训顾正华顾正华石贵阳李由然
- 关键词：异源表达酶学性质分子动力学模拟
- 以培养实践能力为导向的食品发酵工程教学改革研究
- 2021年
- 《食品发酵工程》是高等院校生物技术专业食品方向的核心课程,是利用工程学与自然科学等原理,在生物催化剂的作用下,进行食品加工的技术,也是一门新兴学科。食品发酵工程具有很强的应用性与实践性,在教学中非常注重培养学生的实践能力,而教师实践教学能力的优劣直接关系到学生理论知识与实践能力水平。
- 李由然李江华
- 关键词：发酵工程教学改革
- 重组乳酸克鲁维酵母产磷脂酶A_2发酵条件的优化被引量：1
- 2015年
- 利用重组乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)GG799表达磷脂酶A2,对其产酶发酵条件进行研究。采用单因素试验和正交试验对培养基及培养条件进行优化,确定了重组菌产酶的最佳发酵条件。结果表明:最优培养基组成为葡萄糖30 g/l、酵母粉20 g/l、蛋白胨30 g/l、Kh2PO4 3 g/l;最优培养条件为:发酵温度30℃、接种量2%(V/V)、初始pH 7.0、装液量90 ml/250 ml三角瓶、摇床转速220 r/min,在此条件下发酵培养,酶活力由(1.87±0.12)U提高到(5.35±0.27)U。
- 王辉张梁李由然顾正华丁重阳石贵阳陈国安杨盛荣
- 关键词：乳酸克鲁维酵母磷脂酶A2发酵
- 重组枯草芽孢杆菌分泌表达腺苷酸脱氨酶被引量：2
- 2015年
- 目的:利用基因重组技术,构建腺苷酸脱氨酶高效表达的重组菌株。方法:以前期构建的产腺苷酸脱氨酶重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28α-AMPD中来源于鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)目的基因为模板,设计特异性引物扩增腺苷酸脱氨酶基因,亚克隆至游离型表达载体pHY-WZX,转化枯草芽孢杆菌WB600。结果:成功筛选获得了一株产腺苷酸脱氨酶重组枯草芽孢杆菌WB600/pHY-AMPD,进一步在摇瓶中探究了发酵培养基成分对重组酶发酵的影响。获得了较优发酵培养基为:葡萄糖10 g/L、?酵母膏30 g/L、CaCl2 0.5 g/L、柠檬酸三钠1 g/L、NaH2PO4 10 g/L、K2HPO4 10 g/L、(NH4)2SO4 5 g/L,37℃、200 r/min发酵60 h摇瓶发酵液酶活力可达到(2 230±50)U/m L。结论:本研究实现了鼠灰链霉菌来源的腺苷酸脱氨酶基因在枯草芽孢杆菌中表达。
- 郭自涛张梁李由然李赢顾正华丁重阳石贵阳
- 关键词：腺苷酸脱氨酶枯草芽孢杆菌
- 甜橙来源法尼烯合成酶的异源表达及酶学性质研究被引量：1
- 2021年
- 法尼烯是一种倍半萜化合物,在食品、香料等领域有广泛应用价值。法尼烯合成酶是法尼烯合成途径中的关键限速酶,对法尼烯的合成有重要催化作用。通过生物信息学方法获取了甜橙来源萜类合成酶(farnesene synthase from Citrus sinensis,FSCS)基因Fscs,通过异源表达对其进行了功能鉴定,研究了重组酶的酶学性质并将其应用于酿酒酵母法尼烯合成。结果显示,在以法尼基焦磷酸为底物时,FSCS可催化其生成α-法尼烯;Mg ^(2+)为酶必需的辅因子,K^(+)可促进产物生成,8 mmol/L以上Mn^(2+)对产物生成有抑制作用,最适金属离子条件为30 mmol/L Mg^(2+),40 mmol/L K^(+);最适反应温度为20℃,酶对高温耐受性差。将酶学性质应用于酿酒酵母重组表达菌株,最适金属离子条件下法尼烯产量提升了30%,达到43.76 mg/L;温度条件的改变对发酵后期法尼烯积累有一定促进作用。该研究对一种新的萜类合成酶进行了功能表征,并通过酶学性质研究为构建微生物细胞工厂高效生产法尼烯提供了参考。
- 付闻文王均华李由然李由然
- 关键词：酶学性质
