林瑞凤
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学轻工技术与工程更多>>
- 黑曲霉脂肪酶盖子结构域突变对其活性的影响被引量：2
- 2010年
- 比较黑曲霉脂肪酶与黑曲霉酯酶的3-D结构发现二者在盖子结构域存在显著差异。根据已解析的酯酶的3-D结构信息,运用重叠延伸PCR技术,对黑曲霉脂肪酶的4个位点进行突变,以期获得开盖型黑曲霉脂肪酶。4个突变位点分别为形成黑曲霉脂肪酶盖子结构的α-螺旋与酯酶对应区域的α-螺旋相互置换;Ser84突变为Gly;Asp99突变为Pro;Lys108突变为Glu。4个重组质粒导入毕赤酵母GS115菌株进行异源表达后,仅pPCI9K-anl-D99P和pPCI9K-anl-K108E实现了活性表达。
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- 关键词：黑曲霉脂肪酶突变活性
- 扩展青霉脂肪酶“盖子”结构域突变对其活性影响的研究
- 为了便于对扩展青霉脂肪酶基因进行分子设计及改造，本论文将扩展青霉脂肪酶成熟肽编码基因插入到pPIC9K表达载体中，构建重组表达质粒pPIC9K-pel，并在脂肪酶基因5’端上游加上（His）6标签的编码序列。通过比对扩展...
- 林瑞凤
- 关键词：扩展青霉脂肪酶重叠延伸PCR盖子
- 文献传递
- 微生物脂肪酶蛋白质工程被引量：3
- 2009年
- 微生物脂肪酶催化的化学反应具有严格的立体选择性、位点选择性等专一性,催化活性高而副反应少,催化反应不需要辅助因子等特点,因此广泛应用于工农业生产中的诸多领域。利用蛋白质工程技术,提高微生物脂肪酶的特异性、活性和稳定性,对提高微生物脂肪酶制剂产品的市场竞争能力,扩大微生物脂肪酶的应用领域,具有重要的意义。综述了蛋白质工程技术在微生物脂肪酶改性方面的应用现状、存在问题及前景。
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- 关键词：脂肪酶蛋白质工程
- 从植物根际定向批量筛选广谱有机溶剂耐受性脂肪酶产生菌被引量：4
- 2009年
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶是一类具有重要工业应用价值的优良脂肪酶之一。根据已公布的洋葱伯克霍尔德菌基因组信息,在传统的洋葱伯克霍尔德菌选择性培养基中添加适量的氨苄青霉素和卡那霉素,从植物根际的土壤中筛选洋葱伯克霍尔德菌。对获得的单菌落再用含罗丹明B指示剂的产脂肪酶定性检测平板检测,从4个根际土壤中筛选到35株产脂肪酶的洋葱伯克霍尔德菌,阳性率达到65%。其中15株对体积浓度为10%的苯、己烷和正庚烷同时具有耐受性。用recA基因分子鉴定上述15株菌种,全部属于洋葱伯克霍尔德菌菌群。
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- 关键词：脂肪酶洋葱伯克霍尔德菌有机溶剂耐受性根际
- 不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶突变体的构建被引量：1
- 2011年
- 为获得不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶(ANL)突变体,在生物信息学分析基础上,对黑曲霉脂肪酶盖子结构域两侧铰链区的氨基酸残基进行了置换突变,获得两个黑曲霉脂肪酶突变体(ANL-Ser84Gly和ANL-Asp99Pro)。对不同浓度对硝基苯丁酸酯的水解活性检测结果表明:ANL-Ser84Gly的催化活性仍依赖油水界面,而ANL-Asp99Pro的催化活性不再依赖油水界面。底物特异性检测结果表明:较ANL而言,ANL-Ser84Gly的比活力显著降低,其水解对硝基苯棕榈酸酯、对硝基苯豆蔻酸酯、对硝基苯月桂酸酯和对硝基苯癸酸酯的比活力分别降低了29.8%,53.1%,60.1%和77.1%;而ANL-Asp99Pro水解对硝基苯棕榈酸酯的比活力提高了2.2倍。铰链区的突变破坏了突变体蛋白质分子ANL-S84G与ANL-D99P的二级结构作用力,使突变体分子的二级结构域更趋不稳定,从而导致了突变体分子的热稳定性显著降低。不依赖油水界面激活的脂肪酶突变体的构建,将有利于深入了解脂肪酶界面激活的分子机制。
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- 关键词：黑曲霉脂肪酶界面活性
