沈锦城
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：海南大学农学院更多>>
- 发文基金：海南省重点科技计划项目国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 用Canstatin-N抑制大鼠视网膜血管增生的研究
- 糖尿病视网膜病变是糖尿病严重的并发症之一,是致盲的主要原因之一,严重地影响着人们的生存质量。糖尿病视网膜血管增生将最终致盲,Canstatin-N是一种分子量小而活性高的血管生成抑制因子。本论文研究应用Canstatin...
- 沈锦城
- 关键词：糖尿病视网膜病变高密度发酵毕赤酵母
- 文献传递
- 用毕赤酵母表达理氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因
- 2012年
- 目的:为提高β-葡萄糖苷酶的产量,用毕赤酵母取代理氏木霉用于生产,以弥补理氏木霉在大规模生产中的缺陷。方法:用套叠PCR法从理氏木霉基因组中扩增β-葡萄糖苷酶基因(bglⅠ)。用T4DNA连接酶和限制性DNA内酶将bglⅠ重组于P.pastoris表达载体pPIC9K的多克隆位点,获得含bglⅠ的重组表达载体pPIC9K-bglⅠ。通过电转法将其pPIC9K-bglⅠ载体转化于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性以及高表达bglⅠ酶的重组子作为工程菌。结果:用BMGY-BMMY培养基体系,在摇瓶中发酵48 h,表达BglⅠ30 mg/L,在P.pastoris中表达的BglⅠ能水解对硝基苯-β-D-葡萄糖苷具有β-葡萄糖苷酶活性。其酶活力为56 U/L发酵液。结论:通过这种方法,可以成功地用毕赤酵母表达理氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因。
- 林海鹏沈锦城尹慧祥张泽华张爱联
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶毕赤酵母套叠PCR酶活力
- 用毕赤酵母组成型分泌表达Canstatin-N被引量：2
- 2013年
- 目的:用毕赤酵母的GAP启动子调控组成型表达Canstatin-N。方法:将canstatin-N基因重组于毕赤酵母表达载体pGAP9K的多克隆位点获得pGAP9K-can-N。用电转法将pGAP9K-can-N转化毕赤酵母GS115。筛选高G418抗性的克隆作为工程菌GS115(pGAP9K-can-N)。发酵GS115(pGAP9K-can-N)分泌表达Canstatin-N,用离子交换法纯化目标蛋白。结果:以葡萄糖为碳源,发酵48h分泌表达人血管能抑素蛋白56 mg/L。结论:用毕赤酵母的GAP启动子调控组成型表达的人血管能抑素蛋白具有诱发血管内皮细胞凋亡的生物活性。
- 符策奕沈锦城张爱联罗进贤张添元
- 关键词：毕赤酵母基因表达生物活性
- 一种生产葡萄糖淀粉酶的方法
- 本发明公开了一种生产葡萄糖淀粉酶的方法。属生物技术领域。首先克隆曲霉、毛壳菌和酵母的葡萄糖淀粉酶基因；构建含以上三种葡萄糖淀粉酶基因表达框架的毕赤酵母表达载体、酿酒酵母表达载体和枯草芽孢杆菌表达载体，并将其载体分别转化相...
- 张爱联罗进贤刘振旺张添元符仙沈锦城
- 文献传递
- 工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-lac2)的构建及诱导表达漆酶的研究
- 2013年
- 用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2。构建表达质粒pPIC9K-lac2。通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2)。在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白。在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基。在发酵的第一阶段连续24 h补加50%甘油-0.8%PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8%PTM4诱导49 h。在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20%～30%,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A_(600)=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液。
- 沈锦城张泽华杨穗珊张添元罗进贤张爱联
- 关键词：漆酶PASTORIS高密度发酵
