熊永忠
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南京军区福州总医院更多>>
- 发文基金：福建省重点科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 精子特异性乳酸脱氢酶-C4的研究进展被引量：5
- 2003年
- LDH C4是避孕疫苗研制中最有特征性的精子特异性抗原之一。LDH C基因在生精细胞激活而在体细胞受抑制 ,存在LDH C启动子、多种转录因子、CpG岛甲基化等多种因素在转录水平上发挥基因调节作用。针对LDH C4的高水平抗体能有效阻断受精 ,而天然LDH C4经过化学修饰后显示高度免疫原性 ,能诱导同种异体免疫性不孕。
- 熊永忠兰风华
- 关键词：乳酸脱氢酶精子基因调节避孕疫苗
- 小鼠精子特异性乳酸脱氢酶在cos-7细胞中的表达与鉴定
- 小鼠精子特异性乳酸脱氨酶mLDH-C4(mouse lactate dehy-drogenase-c4)已被公认为是最有特征性及最有效的精子特异性抗原之一,是制备避孕核酸疫苗的理想抗原<'[1]>.笔者自2002-200...
- 熊永忠黄梁浒李慧忠谢飞兰风华
- 关键词：精子乳酸脱氢酶COS-7细胞
- 文献传递
- 小鼠乳酸脱氢酶C亚基在大肠埃希菌中的表达与鉴定
- 2004年
- 目的 :构建小鼠特异性乳酸脱氢酶 (LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定。 方法 :提取小鼠睾丸总RNA ,逆转录合成cDNA ,自行设计引物 ,PCR扩增小鼠LDH C亚基编码序列 ,PCR产物经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ 双酶切后 ,克隆至谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 2T中 ,在E .coliBL2 1中诱导GST融合蛋白的表达。 结果 :在异丙基 β 硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为6 0 0 0 0的产物。对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与GenBank登录的编码序列完全一致。 结论 :小鼠LDH C亚基的全长编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX 2T ,并在E .coliBL2
- 熊永忠郑德柱谢飞涂向东兰风华
- 关键词：精子小鼠PCRLDH同工酶避孕疫苗
- 精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及免疫避孕效果的实验研究被引量：3
- 2008年
- 精子特异性乳酸脱氢酶是精子能量代谢的一个关键酶,具有很强的组织特异性和免疫原性.在本研究中,将人和小鼠(Mus musculus)的精子特异性乳酸脱氢酶编码序列分别与真核表达载体pVAX1连接,构建了两个DNA疫苗:pVAX1-hLDHC和pVAX1-mLDHC.将这两个DNA疫苗通过黏膜表面滴注的方式分别免疫雌雄两性BALB/c小鼠,在实验小鼠的血清和雌性实验小鼠的阴道分泌液中均检测到特异性抗体的存在,滴度随免疫次数的增加而升高.交配实验中,实验组出生子代的数量明显减少,有的小鼠甚至未生育,与未免疫组和pVAX1空质粒免疫组在统计学上有显著性差异.精子凝集实验表明,实验小鼠血清和雌性实验小鼠阴道分泌液均可引起正常雄性小鼠的精子悬液发生凝集反应.免疫组化结果显示:实验小鼠血清和雌性实验小鼠阴道分泌液中的抗体与位于正常精子胞质、顶体外膜及顶体囊中的乳酸脱氢酶抗原发生特异性结合.本研究初步显示了人用避孕DNA疫苗免疫效果,为以后可能进行的临床实验奠定了基础.
- 陈勇张朵辛娜熊永忠陈平李博涂向东兰风华
- 关键词：DNA疫苗避孕疫苗黏膜免疫
- 小鼠乳酸脱氢酶C4在大肠杆菌中的可溶性表达与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建小鼠精子特异性乳酸脱氢酶C4(mLDHC4)的原核表达载体并进行重组蛋白的纯化。方法提取小鼠睾丸组织总RNA,反转录合成cDNA。自行设计引物,PCR扩增mLDHC4的编码序列,产物经EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,获得重组载体。将重组载体转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导mLDHC4表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和乳酸脱氢酶活性测定方法对重组mLDHC4进行鉴定,Ni+-NTA亲和层析法纯化mLDHC4,并将其与pVAX1-mLDHC4(小鼠mLDHC4的真核表达载体)免疫小鼠的抗血清进行免疫印迹反应。结果重组载体经EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后,可释放大小约1000bp的插入片段,序列分析表明,克隆的DNA片段与GenBank登录的mLDHC4编码序列完全一致,将此重组质粒命名为pET-28a(+)-mLDHC4。在IPTG的诱导下,重组菌可表达大小约35kD的蛋白质,且其裂解液具有很高的乳酸脱氢酶活性,经亲和层析纯化后在聚丙烯酰胺凝肢中仅显示单一蛋白区带,与抗血清反应后在硝酸纤维素膜上形成特异性条带。结论小鼠mLDHC4的全长编码序列已被克隆至原核表达载体pET-28a(+)质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,纯化后的蛋白特异性高、活性强。
- 张朵熊永忠陈平辛娜兰风华
- 关键词：乳酸脱氢酶类基因表达
