王敬师
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
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- 发文基金：国家科技重大专项广东省重大科技专项广东省科技计划工业攻关项目更多>>
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- H_5、H_9亚型禽流感病毒和新城疫病毒的多重RT-PCR检测
- 2006年
- 根据Genbank注册发表的H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因和新城疫病毒(NDV)的HA基因序列,设计多对引物,每种病毒各筛选出一对特异性好、灵敏度高的引物,其中FP1/FP2扩增H5亚型AIVHA基因片断长为545bp;P3/P4扩增H9亚型AIVHA基因片断长为321bp;P11/P22扩增NDVHA基因片断长为672bp。用RT-PCR方法,通过特异性试验、灵敏度试验,H5、H9亚型AIV和NDV引物的灵敏度分别达到了1:104、1:108、1:104稀释度,与传染性支气管炎(IB)、传染性法氏囊病(IBD)、传染性喉气管炎(ILTV)、传染性鼻炎(IC)、霉形体(MS)、H1N1猪流感等抗原无交叉反应。实验结果表明,本研究建立了检测H5、H9亚型AIV和NDV的多重RT-PCR方法,混合引物的最佳退火温度为50℃,鉴定检测仅需4小时。
- 谢青梅王敬师李少璃陈丽马静云曹永长毕英佐
- 关键词：新城疫病毒
- 鸡传染性支气管炎病毒CQ/01/2004株的分离与鉴定被引量：9
- 2006年
- 2004年从重庆某肉用鸡场疑似鸡传染性支气管炎的病鸡中采集病料,按常规处理后接种9～10日龄鸡胚,通过鸡胚连续传代培养3代,并对该分离毒株的鸡胚致病性、血凝性和NDV的干扰特性进行检测,同时进行了动物回归试验。结果表明,该分离株具有IBV感染特征,可使鸡胚胚体出血、蜷缩、矮化;该分离毒株无直接血凝性,对NDV有明显的干扰作用;动物回归试验中有75%的感染鸡在10d内发病或死亡。剖检病死鸡可见肾苍白、肿胀,肾小管内充塞大量尿酸盐,支气管有出血点、有大量粘液。采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对CQ/01/2004的纤突蛋白S1基因进行扩增、克隆和序列测定,结果表明该基因具有IBVS1基因的共有分子特征,将测序结果提交GenBank进行同源性检索,发现分离株CQ/01/2004和J株S1的同源性最高,核苷酸同源性为94%,氨基酸同源性为89.4%,与M41的核苷酸同源性为80.6%,氨基酸同源性为78.0%。试验结果表明,分离的病毒株CQ/01/2004为鸡传染性支气管炎病毒。
- 陈峰周庆丰王敬师李少璃张齐吴孔兴曹永长
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒
- H9N2亚型禽流感病毒ns1基因的融合表达
- 2006年
- 禽流感病毒(AIV)非结构蛋白NS1在病毒粒子中不存在,因此,可以通过检测NS1抗体来鉴别禽流感病毒感染鸡群和免疫鸡群.将ns1基因和T4噬菌体soc基因在大肠埃希氏菌中融合表达,融合蛋白可以作为鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群的检测抗原.采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的ns1基因(654 bp);将该片段克隆至pSOC质粒soc基因3′端,成功构建了重组质粒pSOC-NS1,用该重组质粒转化E.coliB l21(DE3)感受态细胞,以终浓度1 mmol/mL的IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果表明pSOC-NS1融合蛋白相对分子质量约39 000.W estern-b lot证实,表达产物与AIV H9N2病毒感染的小鼠血清具有良好的反应性.
- 陈丽谢青梅李少璃王敬师马静云毕英佐曹永长
- 关键词：禽流感病毒NS1基因
- H5亚型AIV HA基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 应用DNAStar软件,参照GenBank中注册的AIV H5亚型毒株HA基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H5亚型AIV的HA基因,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点将H5 HA基因插入转移质粒载体pFastBacHTa中,获得重组转移载体pFastBacHTa-H5HA并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H5HA,再将其转染昆虫细胞High Five,PCR鉴定证实该基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经SDS-PAGE和Western blotting检测,HA基因在High Five细胞中得到了表达,表达产物大小约为67ku,而且具有特异的免疫反应性。
- 詹爱军王新卫王敬师周庆丰马静云毕英佐于康震
- 关键词：禽流感病毒血凝素蛋白昆虫细胞克隆
- 用基因疫苗制备H9亚型禽流感病毒单克隆抗体被引量：3
- 2009年
- 用H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因反转录cDNA第一链PCR扩增其HA基因,PCR产物与pcDNA3.1(+)质粒构建重组质粒作为基因疫苗免疫8周龄Balb/C小鼠,细胞融合后用血凝抑制试验(HI)和ELISA试验检测细胞培养上清,各获得一株阳性细胞株,经3次亚克隆后都能稳定分泌H9AIV特异性抗体。特异性检测与NDV、H5亚型AIV、产蛋下降综合症(EDS76)病毒毒株没有反应,2株单抗经亚型鉴定均为IgG2b,轻链的亚型为kappa链。所获得的单克隆抗体将在禽流感快速诊断和疾病预警监控中发挥重要作用。
- 詹爱军王新卫王敬师李少璃于康震毕英佐
- 关键词：H9亚型禽流感病毒血凝素基因免疫
- 基因免疫制备抗H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体
- 本文以H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因cDNA为模板,扩增HA基因,PCR产物酶切后与pcDNA3.1(+)质粒进行重组.以重组质粒作为基因疫苗免疫8周龄Balb/C小鼠,应用杂交瘤技术进行细胞融合,通过血凝抑制试验...
- 詹爱军王敬师李少璃于康震曹永长毕英佐
- 关键词：禽流感病毒H9亚型血凝素单克隆抗体基因免疫
- 文献传递
- 流感病毒NA蛋白球部区域可溶性表达与应用
- 神经氨酸酶(NetJraminidase NA)是禽流感病毒(Avian influenza virus AIV)主要糖蛋白之一。本论文主要从以下几个方面对其进行研究：a、H5N1、H9N2亚型禽流感病毒NA基因的克隆与...
- 王敬师
- 关键词：神经氨酸酶可溶表达ELISA方法NA基因
- 文献传递
- 鸭源H5N1亚型禽流感病毒NA基因的克隆及序列分析
- 用RNA提取试剂提取鸭源禽流感病毒的RNA,应用自行设计的特异性引物对神经氨酸酶(NA)基因进行RT-PCR扩增,获得NA基因的全长DNA片段,克隆至P18-T载体上,并进行鉴定和序列测定。结果表明:鸭源H5N1亚型禽流...
- 王敬师谢青梅马静云胡轶鹏毕英佐曹永长
- 关键词：禽流感病毒神经氨酸酶基因
