王玠
- 作品数：64 被引量：172H指数：7
- 供职机构：江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达及特性分析被引量：1
- 2011年
- 目的制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)硒蛋白。方法采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠埃希菌(E.coli)硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体pET-41a中形成重组表达质粒SjTGR-pET-41a。将重组表达质粒SjTGR-pET-41a和质粒pSUABC共转化到E.coliBL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达SjTGR蛋白。用阿糖胞苷-2',5'-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析从表达产物中纯化重组SjTGR蛋白。以重组SjTGR免疫小鼠制备TGR多克隆血清,免疫印迹试验分析日本血吸虫体内是否存在天然TGR。采用生物化学方法分析重组SjTGR硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白的酶活性。结果含有E.coli硒代半胱氨酸插入序列的SjTGR嵌合基因构建成功。含SjTGR基因的重组质粒SjTGR-pET-41a的转化子细菌在静止生长期经IPTG诱导,24℃培养24h可表达出可溶性SjTGR蛋白,质粒pSUABC表达产物可促进硒代半胱氨酸整合,增加硒蛋白的产量。免疫印迹试验结果显示,纯化重组SjTGR多克隆抗体可以识别血吸虫成虫体内天然的TGR。生化分析结果显示,SjTGR是一种具有硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白活性的多功能酶。结论具有生物活性的SjTGR已被成功表达,为进一步研究其功能与应用价值奠定了基础。
- 宋丽君余传信谢曙英殷旭仁钱春艳王玠张伟柯雪丹
- 关键词：日本血吸虫纯化酶活性
- 弓形虫感染对大鼠脑组织神经丝mRNA表达和细胞免疫水平的影响被引量：7
- 2009年
- 目的探讨弓形虫感染对大鼠大脑组织神经丝（NF）mRNA表达和细胞免疫水平的影响。方法将4周龄雄性SD大鼠分成两组（每组10只）：弓形虫感染组腹腔感染2×10^10个／L弓形虫速殖子悬液2ml：对照组腹腔注射灭菌生理盐水2ml。9周后，应用RT-PCR法检测大鼠大脑组织中高相对分子质量NF（NF-H）、中相对分子质量NF（NF—M）和低相对分子质量NF（NF—L）mRNA表达水平；流式细胞术检测大鼠外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞；酶联免疫吸附试验测定其血清γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素4（IL-4）水平。结果大鼠弓形虫感染9周后，大脑组织NF—L、NF—HmRNA表达量（0．51±0．06、0．68±0．05）较对照组（0．79±0．03、0．76±0．05）明显下降（t值分别为3．41、2．17，P〈0．01或〈0．05）：NF—MmRNA表达量（0．69±0．02）与对照组（0．72±0．03）比较，差异无统计学意义（t=2．09，P〉0．05）。弓形虫感染组大鼠的CD4^＋T细胞[（32．19±5．01）％]和CD8^＋T细胞[（20．06±2．28）％1与对照组[（35．82±3．71）％、（22．06±3．90）％]比较，差异均无统计学意义（t值分别为1．69、1．88，P均〉0．05）。弓形虫感染组大鼠血清IFN-γ[（6．03±0．16）ng／L]、TNF-α[（18．05±1．93）ng／L]、IL-4[（15．76±1．59）ng／L]水平均高于对照组[（4．77±0．13）、（9．54±1．57）、（5．67±0．42）ng／L，t值分别为2．81、2．74、2．63，P均〈0．05]。结论弓形虫感染可导致大鼠大脑组织中NF亚单位mRNA表达水平下降。血清IFN-γ、TNF—α、IL-4水平升高。
- 周永华胡玉红顾向明王玠黄玉政董敏石芳许永良高琪
- 关键词：弓形虫属神经丝细胞因子类
- 快速检测日本血吸虫感染性钉螺LAMP试剂盒的建立及应用被引量：19
- 2011年
- 目的构建快速检测日本血吸虫感染性钉螺环介导同温DNA扩增(LAMP)试剂盒,用于血吸虫病流行区感染性钉螺调查。方法采用碱裂解法制备钉螺基因组DNA样品,以缩短检测过程中样品DNA制备时间;对LAMP试剂进行组合优化,采用染料显色方法判定LAMP结果,以减少LAMP检测的操作步骤,避免污染,减少假阳性结果产生;建立批量检测钉螺的LAMP方法,以适用于血吸虫病防治现场大规模钉螺筛查与有感染性钉螺地块的调查。将以上优化技术及试剂整合成快速检测日本血吸虫感染性钉螺LAMP试剂盒。结果制备的日本血吸虫感染性钉螺LAMP检测试剂盒可用于血吸虫流行区现场钉螺快速检测,检测时间可由原来的6h缩短为2h,方法的灵敏性与常规LAMP法相似。该试剂盒能检测出感染后1周钉螺,能对现场钉螺进行大批量检测。结论建立的LAMP试剂盒用于日本血吸虫感染性钉螺检测快速、特异、操作简便,适用于日本血吸虫病流行区感染性钉螺调查。
- 余传信殷旭仁王玠宋丽君钱春艳吴锋何伟张伟
- 关键词：感染性钉螺LAMP检测试剂盒
- 低剂量环磷酰胺对血吸虫感染小鼠的影响
- 2009年
- 目的探讨使用低剂量环磷酰胺对血吸虫感染免疫的影响。方法小鼠经腹腔注射低剂量环磷酰胺(50mg/kg),在体内创造并维持一个Th1型免疫环境。观察小鼠外周血、脾脏调节性T细胞水平及血清细胞因子的动态变化。采用半定量逆转录聚合酶链反应检测经环磷酰胺处理的调节性T细胞上Foxp3基因表达水平。用(30±1)条血吸虫尾蚴感染处于Th1型免疫反应状态小鼠,42d后剖杀,计算减虫率、减卵率,通过组织切片观察小鼠肝脏组织病理变化。结果低剂量环磷酰胺可以降低小鼠外周血、脾脏中的调节性T细胞水平,并下调Foxp3的表达,使小鼠血清IL-2、IFN-γ上升,IL-4、IL-10及TGF-β水平下降,免疫反应向Th1型转变。与对照组相比,用药组的血吸虫虫卵产量明显下降,小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变明显减轻。结论低剂量环磷酰胺可调节小鼠的免疫反应朝Th1发展,可以降低血吸虫虫卵产量,并减轻肝脏虫卵肉芽肿病变。
- 余传信吴宇迪王玠殷旭仁华万全许永良梁幼生高琪
- 关键词：日本血吸虫环磷酰胺肉芽肿小鼠
- 环介导同温DNA扩增法(LAMP)与解剖-显微镜检法检测血吸虫感染性钉螺效果的比较被引量：24
- 2014年
- 目的探讨环介导同温DNA扩增法（LAMP）与解剖-显微镜检法对血吸虫感染不同阶段钉螺检出率的差异。方法用日本血吸虫毛蚴感染钉螺,于25℃培养箱中培养。分别于感染后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周收集10只实验钉螺,解剖后在解剖镜下检查血吸虫感染情况。取解剖的钉螺软体抽提基因组DNA,采用LAMP法进行检测。在感染后10周,取100只实验钉螺,同时用解剖-显微镜检法和LAMP法进行检测。收集吸虫病流行区现场钉螺,采用两种方法同时进行检测,统计血吸虫感染性钉螺阳性率。结果解剖-显微镜检法和LAMP法检测感染1-10周的10批钉螺血吸虫感染率分别为0.00%、0.00%、0.00%、10.00%、0.00、10.00%、20.00%、20.00%、60.00%、60.00%和50.00%、20.00%、30.00%、20.00%、20.00%、40.00%、30.00%、40.00%、80.00%、70.00%,总阳性率分别为18.00%和40.00%,差异有统计学意义（χ^2=11.75,P〈0.01）。两种方法检测感染后7周的100只钉螺阳性率分别31.00%和39.00%,检测来源于两个不同省份血吸虫病流行区钉螺,阳性率分别为29.80%和19.47%。结论环介导同温DNA扩增法能有效地检出感染不同阶段的感染性钉螺,检测结果能更准地反映流行区钉螺的血吸虫感染状态。
- 熊春蓉殷旭仁宋丽君沈双王玠高玒刘茜余传信杨坤
- 关键词：感染性钉螺阳性率
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶SjTGR功能抑制肽及其应用
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶SjTGR功能抑制肽及其应用，属于生物技术的分子生物学与生物化学等技术领域。本发明提供了抑制日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（SjTGR）活性的抑制肽，所述的抑制肽氨基酸序列分别为：J...
- 余传信宋丽君殷旭仁王玠钱春艳梁幼生
- 文献传递
- 2005-2016年血吸虫病研究项目国家自然科学基金资助情况分析被引量：1
- 2017年
- 目的通过研究2005-2016年国家自然科学基金对血吸虫病研究项目的资助情况,分析血吸虫病领域的主要研究方向和动态。方法通过国家自然科学基金ISIS系统,筛选2005-2016年血吸虫病学研究领域的资助课题,统计分析资助数量、金额、类别、机构、学科的分布情况,并借助网络图谱,展现研究主题进展。结果 2005-2016年血吸虫病研究共获得国家自然科学基金资助项目198项,共计7 605万元。获资助的项目以面上项目和青年项目为,获资助机构以科研院所和医学类高校为主,主要资助方向为医学病原微生物与感染、兽医学和医学免疫学。结论国家自然科学基金对血吸虫病的资助有下降趋势,但获项目的研究深度与广度日益渐深,因此需鼓励创新性研究,推动学科交叉,以促进血吸虫病学的发展。
- 周雯迪施亮柯雪丹王玠
- 关键词：血吸虫病国家自然科学基金
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶免疫功能的研究
- 2015年
- 目的研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japonicum,SjTGR)的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用。方法 75只小鼠随机分为5组:空白组、PBS组、CpG2免疫组、TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组,免疫3次。首次免疫前及第3次免疫后2周经尾静脉采血,采用酶联免疫法分别检测血清中抗SjTGR蛋白IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平。第3次免疫后2周,每只小鼠经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±2条,42 d后剖杀,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;制备各组小鼠单个脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测脾细胞表面标志物CD44high、CD4+CD44high或CD8+CD44high水平;用SjTGR刺激免疫小鼠脾细胞72 h,采用酶联免疫法检测脾细胞的IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平。结果第3次免疫后2周TGR与CpG2+TGR免疫组小鼠血清抗SjTGR抗体的IgG滴度均达1:200 000以上,IgG2a与IgG1的比值(IgG2a/IgG1)随时间的延长缓慢增高。TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组细胞上清中的IFN-γ和IL-2水平与空白组、PBS组、CpG2免疫组相比明显增高(P<0.05)。TGR免疫组与TGR+CpG2免疫组小鼠脾细胞的CD44high、CD8+CD44high及CD4+CD44high与空白组和PBS组相比细胞比值增加(P<0.05)。TGR免疫组和CpG2+TGR免疫组的减虫率分别为9.4%,10.5%,减卵率分别为9.2%和32.8%。结论 SjTGR具有较强的免疫原性,可诱导小鼠免疫反应向Th1型极化,但不足以产生抗日本血吸虫感染的保护效应。CpG2 ODN可能是一种有效的Th1型免疫佐剂。
- 宋丽君余传信殷旭仁沈双高玒张伟金一姚媛刘茜王玠柯雪丹许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫免疫原性免疫保护
- 抗三磷酸甘油醛脱氢酶抗体IgG检测诊断日本血吸虫病的研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨检测抗日本血吸虫三磷酸甘油酸脱氢酶(Sj GAPDH)抗体IgG诊断血吸虫病的价值。方法收集血吸虫现症感染患者治疗前、后不同时间点的血清及其他寄生虫病患者血清。以纯化的重组Sj GAPDH蛋白为抗原建立检测抗Sj GAPDH抗体IgG的常规酶联免疫吸附试验方法(Sj GAPDH ELISA)及生物素-亲和素信号放大酶联免疫吸附试验方法(Sj GAPDH BA ELISA),同时对收集的血清标本进行抗Sj GAPDH抗体IgG检测,并与检测抗SEA抗体IgG的SEA ELISA结果作比较,评价检测抗Sj GAPDH抗体IgG用于血吸虫病诊断与疗效考核的价值。结果 Sj GAPDH ELISA和Sj GAPDH BA ELISA检测79份现症感染血吸虫患者血清抗Sj GAPDH抗体IgG的敏感性分别为54.43%和91.14%,差异有统计学意义(P<0.05%);特异性分别为93.85%和92.31%,差异无统计学意义(P>0.05%)。Sj GAPDH ELISA检测患者在治疗后6个月血清特异性抗体阴转率为44.19%,治疗后12个月阴转率达53.49%。Sj GAPDH BA ELISA检测患者治疗后6个月血清特异性抗体阴转率为5.55%,治疗后12个月阴转率为9.72%。患者血清中抗SEA抗体IgG治疗后6和12个月均阳性。结论 Sj GAPDH蛋白在患者体内诱导短寿抗体反应,检测患者血清中的抗Sj GAPDH特异性抗体IgG水平及其在治疗前、后的变化具有一定的诊断与疗效考核价值。
- 王玠刘茜张秋明余传信宋丽君沈双殷旭仁高玒何伟曹国群华万全钟春蕾
- 关键词：血吸虫疗效考核
- 日本血吸虫感染兔血清蛋白质质谱分析被引量：4
- 2008年
- 目的通过对感染日本血吸虫兔血清进行蛋白质质谱分析，确定有潜在诊断意义的标志蛋白，为日本血吸虫病血清学诊断提供理论依据。方法取不同感染时期的兔血清，利用WCX磁珠纯化试剂盒富集血清蛋白，应用基质辅助激光解吸电离飞行时同质谱（MAIDI—TOF-MS）技术进行分析。结果与正常兔血清蛋白指纹图谱比较，在Mr1000-12000区段，不同感染时期实验兔血清分析共有63个蛋白峰，其中7种蛋白有显著差异，利用BrukerClinProTools软件分析，在感染后第6天，Mr1787蛋白有显著上调（P〈O．05）；感染后第9天，Mr2834蛋白有极显著上调（P〈0．01），另外Mr3483蛋白有显著上调（P〈0.05），Mr4018蛋白有显著下调（P〈0.05）；在感染后第12天，Mr3151蛋白有显著下调（P〈0.05），而Mr4018蛋白在感染后第12天，则出现极显著下调（P〈0.01），两者趋势一直持续至感染后第30天。家兔感染后第9～12天，血清中Mr3530蛋白有显著上调（P〈0.05），Mr1716蛋白显著下调（P〈0.05）；第12~30天血清中Mr3151、3530蛋白有显著下调（P均〈0.05）。结论MALDI-TOF-MS结合磁珠富集技术可发现及检测日本血吸虫病具有潜能的早期生物标志物，为从蛋白质水平研究日本血吸虫病免疫诊断及寻找新的治疗靶位奠定了基础。
- 黄玉政徐明王玠周永华许永良梁幼生
- 关键词：日本血吸虫基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱血清学诊断
