王风清
- 作品数：64 被引量：41H指数：5
- 供职机构：华东理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>
- 快速分析测定大豆甾醇侧链降解底物的方法被引量：6
- 2003年
- 建立了快速分析测定大豆甾醇侧链降解过程中底物大豆甾醇和产物雄甾 4 烯 3,17 二酮 (AD)及雄甾 1,4 二烯 3,17 二酮 (ADD)的方法。采用薄板层析 (TLC) ,在板层为硅胶 6 0GF2 54,流动相为石油醚 乙酸乙酯(6∶4 )的条件下 ,成功的分离了底物与产物 ,从而能快速简便的监测底物的消耗与产物的生成情况。另外根据底物与产物AD与ADD在紫外区的吸收情况 ,利用 2 5 4nm与 2 98nm双波长测定ADD与AD的生成量。
- 王风清王敏路福平
- 关键词：紫外吸收光谱法
- 朱黄青霉α-1,6-葡聚糖酶在毕赤酵母GS115中的异源表达被引量：3
- 2014年
- 目的构建毕赤酵母基因工程菌,以实现朱黄青霉α-1,6-葡聚糖酶的异源高效表达。方法人工合成朱黄青霉HI-4的α-1,6-葡聚糖酶基因ZHdex,克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,电转入毕赤酵母GS115。甲醇诱导目的蛋白表达。结果成功在毕赤酵母GS115中对ZHdex基因进行表达,SDS-PAGE表明重组毕赤酵母在66×103附近有目的蛋白表达,与理论值一致。在摇瓶水平,甲醇诱导培养120 h后,α-1,6-葡聚糖酶的最高酶活达28.79 U/mL,蛋白质浓度为0.56 mg/mL。结论获得一株重组毕赤酵母GS115-ZHdex,其产物具备α-1,6-葡聚糖酶活性,成功地实现朱黄青霉α-1,6-葡聚糖酶的异源高效表达。
- 王赟章晓庆王风清
- 关键词：异源表达毕赤酵母
- 一种用于生产甾醇侧链不完全降解产物的基因工程菌株及其构建方法以及应用
- 本发明公开了一种用于生产甾醇侧链不完全降解产物的基因工程菌株及其构建方法以及应用，构建方法包括：针对可降解转化甾醇的微生物中igr操纵子中的基因进行失活敲除，以及对甾醇代谢途径中的关键基因进行删除或/和过表达，从而获得一...
- 王风清魏东芝刘勇军宋璐
- 一种分枝杆菌基因工程菌及其在制备甾体化合物中的应用
- 提供了一种分枝杆菌基因工程菌及其在制备甾体化合物中的应用。所述分枝杆菌基因工程菌是同时缺失酰基辅酶A脱氢酶fadE31、fadE32和fadE33基因的分枝杆菌，所述酰基辅酶A脱氢酶fadE31、fadE32和fadE3...
- 王风清徐丽琴刘勇军刘浩浩熊亮斌魏东芝
- 文献传递
- 一种基因工程菌在制备甾体化合物中的应用
- 本发明提供一种基因工程菌在制备甾体化合物中的应用。所述基因工程菌是缺失了一种酰基辅酶A硫解酶基因的菌株，所述酰基辅酶A硫解酶基因编码如下蛋白质(A)或(B)：(A)具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；(B)与SE...
- 王风清魏东芝徐丽琴刘浩浩刘心斌陈能辉
- 文献传递
- 维吉尼链霉菌及其在转化与降解甾体化合物中的应用
- 本发明涉及一种维吉尼链霉菌(Streptomycesvirginiae)，公开了维吉尼链霉菌(Streptomyces virginiae)IBL－14 CCTCC M206045，及其在转化与降解甾体化合物中的应用。本...
- 魏东芝童望宇王风清
- 文献传递
- 棘白霉素脱酰酶基因工程菌的构建及应用研究被引量：1
- 2015年
- 目的:以Streptomyces lividans TK24为表达宿主,构建高效表达棘白霉素脱酰酶(Ech DA)的基因工程菌。方法:从Actinoplanesutahensis NRRL 12052中获取Ech DA的基因片段,连接到链霉菌表达载体p NW-S1,采用诱导型启动子Plac与组成型启动子Perm E*和PSau3A,依次构建基因工程菌株ZNW-S11、ZNW-S12和ZNW-S13。通过分析启动子对Ech DA分泌表达的影响,确定工程菌的表达能力,随后完善发酵放大的工艺过程,将工程菌株发酵放大到300 L发酵罐水平。结果:成功实现了Ech DA在S.lividans TK24中的诱导分泌表达;在摇瓶水平,Ech DA的酶活可达到125U/L,在24h内可实现对15g/L米卡芬净前体FR901379的完全转化;在300L发酵罐水平,Ech DA的酶活可达到80U/L,可用于10g/LFR901379的完全转化。当前,国内在工业生产中仍使用原始菌A.utahensis来表达Ech DA,而开发的Ech DA基因工程菌,与之相比在生产效率上有了大幅度提升,有助于改良当前棘白霉素类抗生素的生产工艺。
- 赵国玲陶欣艺王风清魏东芝
- 关键词：变铅青链霉菌基因工程
- 3-甾酮-△1-脱氢酶和工程菌及应用
- 本发明提供了3-甾酮-△1-脱氢酶基因及其编码的胆固醇氧化酶，提供了含有其基因序列的表达载体和含有该表达载体的基因工程重组菌株，提供了制备该3-甾酮-△1-脱氢酶的方法。本发明提供的3-甾酮-△1-脱氢酶为一新的3-甾酮...
- 魏东芝王风清陈苗苗林良才
- 文献传递
- 一种酶固定化方法及其应用
- 本发明提供一种酶固定化方法及其应用。该固定化方法利用磁感应蛋白与靶蛋白的直接融合，然后通过融合蛋白对纳米铁珠的吸附，从而实现酶的固定化。该方法可提高固定化酶的热稳定性和更强的pH耐受性，所制备的固定化酶在重复利用15次后...
- 高蓓魏东芝张鲁嘉王风清江敏刘国松
- 文献传递
- 应用CRISPR/Cas9系统构建异源萜类化合物酿酒酵母生物合成平台
- 萜类化合物是广泛存在于植物、微生物、昆虫中的一类具有丰富种类多样性和复杂结构多样性的天然化合物.目前已鉴定出的萜类化合物达5.5万种之多，在天然药物、高级香料、食品添加剂、杀虫剂、除草剂等方面都具有广泛应用，对人类的健康...
- 李振海王风清
