蒋春梅
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- miR-124＊和laminin-8β1链在脑胶质瘤中的表达及相互调控作用
- 2014年
- 目的 探讨miR-124＊和laminin-8 β1链在不同恶性程度人脑胶质瘤中的表达,分析两者间潜在的表达调控关系. 方法 Western blotting、实时荧光定量PCR分别检测南方医科大学珠江医院神经外科自201 1年1月至2012年12月间手术切除并经病理证实的30例人脑胶质瘤标本和2例正常脑组织标本中laminin-8 β1链蛋白、miR-124＊的表达.构建质粒载体psiCHECKTM-2-野生型（WT） laminin β1链3＇非翻译区（3＇UTR）和psiCHECKTM-2-突变型（MUT）laminin β1链3＇UTR,分别同miR-124＊模拟物、miRNA模拟物阴性对照;miR-124＊抑制剂、miRNA抑制剂阴性对照共转染至U87细胞中,转染空载体psiCHECKTM-2作为空白对照.转染48 h后采用双荧光素酶报告检测系统检测各组细胞的荧光强度.nu/nu裸鼠皮下注射U87细胞构建胶质瘤动物模型,miR-124＊模拟物原位注射治疗3周后Western blotting检测肿瘤中laminin-8 β1链蛋白表达,免疫组化染色观察血管内皮细胞标记物CD31的表达. 结果 Western blotting显示Laminin-8蛋白在高级别胶质瘤（WHOⅢ/Ⅳ级）中呈现高表达,而在低级别胶质瘤（WHO Ⅰ/Ⅱ级）中表达不明显;实时荧光定量PCR显示miR-124＊在正常脑组织、WHO Ⅰ级、Ⅱ级、高级别胶质瘤中表达依次降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.双荧光素酶报告实验显示,与psiCHECKTM-2-WTlaminin β1链3＇UTR质粒共转染时,miR-124＊模拟物组荧光强度（2.13±0.25）明显弱于miRNA模拟物阴性对照组（2.71±0.08）,而miR-124＊抑制剂组（3.18±0.22）明显强于miRNA抑制剂阴性对照组（2.70±0.17）,差异有统计学意义（P＜0.05）.动物模型实验结果提示miR-124＊治疗组较对照组肿瘤laminin-8 β1链及CD31表达均明显降低. 结论 miR-124＊通过负调控laminin-8 β1链的表达影响胶质瘤的恶性程度。
- 卢国辉蒋春梅段剑周东伟洪涛张世忠
- 关键词：神经胶质瘤
- MicroRNA-124对帕金森病中多巴胺能神经元的神经保护作用被引量：6
- 2013年
- 目的研究microRNA（miR）．124对帕金森病模型小鼠中脑多巴胺能神经元的神经保护作用．并探讨其免疫炎性调控机制。方法采用小胶质细胞系BV2细胞制备炎性反应的细胞模型．实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-21、miR-124、miR．155、miR-146a、miR．18lc、miR-221．3p等中枢炎性相关miRNAs表达；腹腔内注射1．甲基一4一苯基．1，2，3，6．四氢吡啶（MPTP）制备帕金森病小鼠模型，尾静脉注射miR-124治疗，免疫组织化学染色观察治疗前后多巴胺能神经元凋亡情况（TH蛋白表达）、小胶质细胞活化情况（Ibal蛋白表达），Westernblotting及qRT—PCR检测治疗前后细胞凋亡相关蛋白酶caspase-3、caspase-8的表达情况。结果miR-124在BV2细胞中表达量明显高于其他5种miRNAs，差异有统计学意义（氏0．05），且致炎后表达下调幅度最大；与帕金森病模型鼠相比，miR-124治疗后黑质区TH阳性细胞数明显增多，而lbal阳性细胞数明显减少，caspase-3、caspase-8的表达量亦明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-124可通过抑制黑质区小胶质细胞活性缓解多巴胺能神经元凋亡进程，可能是帕金森病发病机制中的一个关键因子。
- 卢国辉蒋春梅肖振勇张世忠
- 关键词：帕金森病多巴胺能神经元神经保护
- 底蜕膜间充质干细胞分化为多巴胺能样神经元被引量：1
- 2013年
- 目的探讨人胎盘底蜕膜间充质干细胞体外向多巴胺能样神经元分化的潜能,并优化诱导方案。方法体外分离培养底蜕膜间充质干细胞,用表皮生长因子(EGF)+人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)+B27添加剂和人音猬因子(SHH)+成纤维细胞生长因子8(FGF8)+forskolin+脑源性神经营养因子(BDNF)分两个阶段对其进行诱导;免疫细胞化学先后检测干细胞标记nestin和CD133、成熟神经元标记神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质细胞标记胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、多巴胺能神经元标记酪氨酸羟化酶(TH)的表达;Western blot验证诱导后TH蛋白的表达;高效液相色谱-电化学检测诱导前后多巴胺的分泌。结果经第一阶段诱导后,细胞形成漂浮生长的神经球,nestin和CD133均呈阳性表达;第二阶段诱导后,出现明显的神经元样形态,NSE、GFAP和TH均阳性表达,Western blot也显示TH蛋白的表达,多巴胺分泌量相比诱导前明显增加(P<0.001)。结论底蜕膜间充质干细胞体外可分化为多巴胺能样神经元,可能成为帕金森病干细胞移植治疗新的种子细胞来源。
- 卢国辉蒋春梅洪涛张世忠
- 关键词：胎盘间充质干细胞分化
