郑琰
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绒山羊生长期次级毛囊cDNA消减文库的构建及其序列分析被引量：2
- 2009年
- 【目的】构建绒山羊生长期次级毛囊的消减文库,寻找绒毛生长的相关候选基因。【方法】以生长期次级毛囊cDNA为tester,休止期次级毛囊cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术构建生长期次级毛囊消减文库并进行生物信息学分析。【结果】构建了具有高消减效率的cDNA文库。随机挑取20个阳性克隆进行PCR扩增,插入片段长度主要分布在250～1000bp之间。挑取750个克隆进行测序,得到342条有效序列,平均长度596bp。进行同源性分析,有298个与nucleotide数据库山羊及其它物种的已知序列同源。在EST数据库中找到38个相似EST序列和6个无同源性序列。对298个已知功能基因的ESTs进行分类,细胞分裂类为13个、细胞信号类为49个、细胞结构蛋白52个、细胞防御类21个、代谢类46个、基因/蛋白表达类37个、未分类的80个。【结论】应用SSH技术,构建了绒山羊生长期和休止期次级毛囊差异表达基因的cDNA文库,为进一步筛选绒毛生长相关的候选基因奠定了基础。
- 席海燕周欢敏郑琰
- 关键词：绒山羊生长期抑制性消减杂交
- 内蒙古绒山羊皮肤干细胞定位的初步研究
- 本论文旨在探讨BrdU标记内蒙古绒山羊皮肤组织的可行性及免疫组织化学检测的最优条件，并对皮肤干细胞的分布位置、迁移轨迹进行初步研究。通过对绒山羊颈部静脉注射不同剂量BrdU，活体取背部皮样，经4％多聚甲醛固定，石蜡包埋切...
- 郑琰
- 关键词：皮肤干细胞细胞定位免疫组织化学山羊
- 文献传递
- 5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷标记内蒙古绒山羊皮肤组织的免疫组织化学检测被引量：2
- 2009年
- 探讨5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记内蒙古绒山羊皮肤组织的可行性及免疫组织化学检测的最优条件。通过对试验组绒山羊颈部静脉注射BrdU,活体背部皮肤采样,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片,利用免疫组织化学技术检测切片中是否有阳性细胞分布;通过试验BrdU不同注射剂量、生物素标记的第二抗体和链霉菌抗生物素-过氧化物酶各自稀释度、抗原修复方式及DNA变性温度对BrdU标记结果的影响,以寻求免疫组织化学检测的最佳条件。观察发现抗BrdU单克隆抗体处理的试验组皮肤组织切片中均有红色BrdU阳性细胞分布;未经BrdU标记的对照组动物同部位组织切片和以PBS代替抗BrdU单克隆抗体处理的试验组皮肤组织切片中均未见BrdU阳性细胞。BrdU适于内蒙古绒山羊活体标记;2 mol/L HCl 37℃变性30 min,胰蛋白酶37℃修复30 min,生物素标记的第二抗体和链霉菌抗生物素-过氧化物酶的稀释度均为1?100时,免疫组织化学检测结果最佳。
- 郑琰席海燕周欢敏
- 关键词：BRDU绒山羊免疫组织化学技术
- 5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷标记内蒙古绒山羊皮肤组织的免疫组织化学检测
- 2009年
- 探讨5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记内蒙古绒山羊皮肤组织的可行性及免疫组织化学检测的最优条件。对试验组绒山羊颈静脉注射BrdU,活体背部皮肤采样,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片,利用免疫组织化学技术检测切片中是否有阳性细胞分布;通过对BrdU不同注射剂量、生物素标记的第二抗体和链霉菌抗生物素-过氧化物酶各自稀释度、抗原修复方式及DNA变性温度对BrdU标记结果的影响,以寻求免疫组织化学检测的最佳条件。观察发现抗BrdU单克隆抗体处理的试验组皮肤组织切片中均有红色BrdU阳性细胞分布;未经BrdU标记的对照组动物同部位组织切片和以PBS代替抗BrdU单克隆抗体处理的试验组皮肤组织切片中均未见BrdU阳性细胞。BrdU适于内蒙古绒山羊活体标记;且经过2mol·L-1HCl37℃变性30min,胰蛋白酶37℃修复30min,生物素标记的第二抗体和链霉菌抗生物素-过氧化物酶的稀释度均为1:100时,免疫组织化学检测结果最佳。
- 郑琰席海燕周欢敏
- 关键词：BRDU绒山羊免疫组织化学技术
- BrdU标记内蒙古绒山羊皮肤干细胞的初步研究
- 2009年
- 为了探讨BrdU标记绒山羊皮肤干细胞的可行性，并初步确定干细胞的位置，试验采用静脉注射BrdU后进行免疫组化检测，分离培养毛囊的标记部分并检测细胞周期。结果表明：BrdU在绒山羊体内的标记时间为10周；免疫组化AEC染色阳性细胞核呈红色，阴性细胞核不被着色，说明BrdU标记信号存在于初级、次级毛囊及表皮中；注射初期毛囊及表皮增殖细胞均被标记（包括干细胞），4周时标记细胞主要位于毛囊的下部，6周时阳性信号减少且有向上迁移迹象，8～10周标记细胞明显减少或消失，10周后无阳性信号；Ⅳ型胶原黏附培养毛囊的标记部分细胞呈克隆生长；流式细胞检测得到F2代G0／G1比为（73．98±4．74）％，初步证明干细胞的存在。
- 席海燕郑琰周欢敏
- 关键词：绒山羊溴脱氧尿嘧啶核苷皮肤干细胞毛囊
- 内蒙古绒山羊皮肤干细胞定位的初步研究被引量：4
- 2009年
- 为了确定干细胞在内蒙古绒山羊初级毛囊、次级毛囊及表皮中的位置,通过对绒山羊颈部静脉注射BrdU,每周取皮肤样本,用4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,切片,免疫组织化学检测。结果发现,免疫组织化学检测在前10周内BrdU结果呈阳性,说明皮肤中存在干细胞,BrdU可用于大动物短时期的体内标记;BrdU用于大动物标记时在绒山羊体内的存留时间大约为10周;初步判断初级毛囊和次级毛囊及表皮中均存在干细胞,而且干细胞的niche可能就位于毛乳头处;用IV型胶原粘附培养初级和次级毛囊的毛乳头,其呈圆形或多边形,核大,核仁明显,细胞器少,细胞呈克隆生长,慢周期性,具有无限的增殖能力。经流式细胞术检测,初步证明为毛乳头处存在毛囊干细胞。
- 席海燕郑琰周欢敏
- 关键词：绒山羊皮肤干细胞毛囊
- BrdU标记山羊皮肤组织的免疫组化检测
- 2009年
- 目的:探讨5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)标记绒山羊皮肤组织的可行性及免疫组化检测条件的优化。方法:通过对绒山羊颈部静脉注射不同剂量BrdU,活体取背部皮样,经4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,免疫组织化学技术检测不同的BrdU注射剂量、二抗及链霉菌抗生物素-过氧化物酶浓度、抗原修复方式、DNA变性温度对BrdU标记结果的影响,以寻求检测的最佳条件。结果:观察到在试验组山羊皮肤组织中有红色的BrdU阳性细胞的分布。未经BrdU标记的对照组动物的同部位组织中均未见BrdU阳性细胞出现,而显示阳性结果的连续切片的阴性对照均为阴性。结论:BrdU可以用于内蒙古绒山羊的活体标记,BrdU标记剂量无明显区别;2 mol/L HCl 37℃变性30分钟,胰蛋白酶37℃修复30分钟,生物素标记的第二抗体和链霉菌抗生物素-过氧化物酶的稀释度为1∶100,此种条件下免疫组化检测结果最佳。
- 席海燕郑琰周欢敏
- 关键词：BRDU绒山羊免疫组化
